支持先天免疫功能的转基因小鼠模型制造技术

在一些方面，本文提供了一种包含编码人FLT3L和失活的小鼠Flt3等位基因的核酸的NOD.Cg

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】支持先天免疫功能的转基因小鼠模型
[0001]政府许可权
[0002]本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的编号为1R01132963的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有一定的权利。
[0003]相关申请
[0004]本申请要求于2019年2月13日根据35 U.S.C.
§
119(e)提交的美国临时申请号62/805257的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0005]通过fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)受体的信号传导支持造血祖细胞和树突细胞(DC)的存活、增殖和分化(1，2)。人DC是将抗原呈递给人T细胞所必需的，并且是发展强大的人免疫应答所必需的(4)。成熟的人DC还产生白细胞介素15和支持自然杀伤(NK)细胞和人先天免疫系统的其他成分的发育的其他因子(5)。

技术实现思路

[0006]在一些实施方式中，本文提供了免疫缺陷型NOD.Cg
‑
Prkdc
scid Il2rg
tm1Wjl
/SzJ(NSG
TM
)小鼠(“NOD scid gamma”小鼠)，其包含编码人FLT3L的核酸(例如，包含人FLT3L转基因)和失活的小鼠Flt3等位基因。尽管NSG
TM
小鼠支持人造血干细胞(HSC)移植，但它表现出人HSC向树突细胞(DC)群体的发育受损(3)。为了提供支持人HSC发育成DC群体的小鼠模型，产生了表达人FLT3L(NSG
TM
‑
Tg(Hu/>‑
FLT3L))的转基因NSG
TM
小鼠。然而，预料不到的是，与NSG
TM
对照相比，NSG
TM
‑
Tg(Hu
‑
FLT3L)小鼠中人HSC的移植显著降低。为了理解在NSG
TM
‑
Tg(Hu
‑
FLT3L)小鼠中观察到的表型，FLT3L的小鼠内源性受体
–
Flt3
–
被敲除。令人惊讶的是，用这种转基因品系进行的人HSC移植，在本文中称为NSG
TM Flt3
null
‑
Tg(Hu
‑
FLT3L)，其导致(1)人CD3
+
T细胞和人CD33
+
骨髓细胞的百分比显著增加，(2)人CD123
+
浆细胞样树突细胞、CD56
+
人自然杀伤(NK)细胞、CD14
+
人单核巨噬细胞和CD11C
+
HLA
‑
DR
+
人髓样树突细胞的百分比增加，以及(3)支持小肠中人CD45
+
细胞的粘膜移植。不受理论束缚，人HSC移植减少的NSG
TM
‑
Tg(Hu
‑
FLT3L)可能是人FLT3L通过宿主小鼠FLT3受体激活宿主小鼠DC和可能的其他先天免疫小鼠成分的结果。
[0007]因此，本公开的一些方面提供了包含编码人FLT3L的核酸和失活的小鼠Flt3等位基因(NSG
TM Flt3
null
‑
Tg(Hu
‑
FLT3L))的NSG
TM
小鼠。这种小鼠模型支持将HSC发育成人先天免疫系统的许多不同细胞类型，包括树突细胞。
[0008]在一些实施方式中，小鼠包含使小鼠Flt3等位基因失活的基因组修饰。在一些实施方式中，基因组修饰在选自编码区、非编码区和调控区的小鼠Flt3等位基因的至少一个区域。在一些实施方式中，基因组修饰在小鼠Flt3等位基因的至少一个编码区。例如，基因组修饰可以在外显子6、外显子7和/或外显子8中。在一些实施方式中，基因组修饰选自基因组缺失、基因组插入、基因组置换及其组合。例如，基因组修饰可以是基因组缺失。小鼠Flt3等位基因可包含例如外显子6、外显子7和外显子8中核苷酸序列的基因组缺失。
[0009]在一些实施方式中，SEQ ID NO:5的核酸序列已从小鼠Flt3等位基因中缺失。
[0010]在一些实施方式中，修饰的小鼠Flt3等位基因包含SEQ ID NO:6的核酸序列。
[0011]在一些实施方式中，编码人FLT3L的核酸包含人FLT3L转基因。在一些实施方式中，人FLT3L转基因包含SEQ ID NO:7的核酸序列。在一些实施方式中，小鼠表达人FLT3L。人FLT3L可以例如以至少10,000pg/ml的水平表达。在一些实施方式中，人FLT3L以10,000pg/ml至30,000pg/ml的水平表达。例如，人FLT3L可以以15,000
+
/
‑
1000pg/mL至17,000
+
/
‑
100pg/ml的水平表达。
[0012]在一些实施方式中，所述小鼠表达小鼠FLT3L。在一些实施方式中，小鼠FLT3L以至少2,000pg/ml的水平表达。例如，小鼠FLT3L可以以5,000pg/ml至10,000pg/ml的水平表达。在一些实施方式中，小鼠FLT3L以6,000pg/ml至8,000ml的水平表达。
[0013]在一些实施方式中，所述小鼠不表达可检测水平的小鼠FLT3。在一些实施方式中，由所述小鼠表达的小鼠FLT3的可检测水平低于1,000pg/ml。。
[0014]在一些实施方式中，小鼠缺乏可检测数量的CD135
+
多能祖细胞。
[0015]在一些实施方式中，小鼠进一步包含人CD34
+
造血干细胞。在一些实施方式中，人CD34
+
造血干细胞来自人脐带血、骨髓或动员的外周血。
[0016]在一些实施方式中，小鼠包含人CD45
+
细胞群。在一些实施方式中，人CD45
+
细胞群包含人CD45
+
/CD3
+
T细胞和/或人CD45
+
/CD33
+
骨髓细胞。
[0017]在一些实施方式中，相对于NOD scid gamma对照小鼠或NOD scid gamma
‑
Hu
‑
FLT3L对照小鼠，所述人CD45
+
细胞群包含增加的百分比的人CD45
+
/CD3
+
T细胞。例如，所述小鼠中人CD45
+
/CD3
+
T细胞的百分比增加至少25％、至少50％或至少100％。
[0018]在一些实施方式中，相对于NOD scid gamma对照小鼠或NOD scid gamma
‑
Hu
‑
FLT3L对照小鼠，所述人CD45
+
细胞群包含增加的百分比的人CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Wjl
/SzJ(NOD scid gamma)小鼠，其包含编码人FLT3L的核酸，和失活的小鼠Flt3等位基因。2.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠包含使所述小鼠Flt3等位基因失活的基因组修饰。3.权利要求2所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠Flt3等位基因的选自编码区、非编码区和调控区的至少一个区域。4.权利要求3所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠Flt3等位基因的至少一个编码区。5.权利要求4所述的小鼠，其中所述基因组修饰在外显子6、外显子7和/或外显子8中。6.权利要求2
‑
5中任一项所述的小鼠，其中所述基因组修饰选自基因组缺失、基因组插入、基因组置换及其组合。7.权利要求6所述的小鼠，其中所述基因组修饰是基因组缺失。8.权利要求7所述的小鼠，其中所述小鼠Flt3等位基因包含外显子6、外显子7和外显子8中核苷酸序列的基因组缺失。9.权利要求8所述的小鼠，其中SEQ ID NO:5的核酸序列已从所述小鼠Flt3等位基因中缺失。10.权利要求9所述的小鼠，其中所述修饰的小鼠Flt3等位基因包含SEQ ID NO:6的核酸序列。11.权利要求1
‑
10中任一项所述的小鼠，其中所述编码人FLT3L的核酸包含人FLT3L转基因。12.权利要求11所述的小鼠，其中所述人FLT3L转基因包含SEQ ID NO:7的核酸序列。13.权利要求1
‑
12中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠表达人FLT3L。14.权利要求13所述的小鼠，其中所述人FLT3L以至少10,000pg/ml的水平表达。15.权利要求14所述的小鼠，其中所述人FLT3L以10,000pg/ml至30,000pg/ml的水平表达。16.权利要求14或15所述的小鼠，其中所述人FLT3L以15,000+/
‑
1000pg/mL至17,000+/
‑
100pg/ml的水平表达。17.权利要求1
‑
16中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠表达小鼠FLT3L。18.权利要求17所述的小鼠，其中所述小鼠FLT3L以至少2,000pg/ml的水平表达。19.权利要求18所述的小鼠，其中所述小鼠FLT3L以5,000pg/ml至10,000pg/ml的水平表达。20.权利要求18所述的小鼠，其中所述小鼠FLT3L以6,000pg/ml至8,000ml的水平表达。21.权利要求1
‑
20中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠不表达可检测水平的小鼠FLT3。22.权利要求1
‑
21中任一项所述的小鼠，其中由所述小鼠表达的小鼠FLT3的可检测水平小于1,000pg/ml。23.权利要求1
‑
22中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠缺乏可检测数量的CD135+多能祖细胞。24.权利要求1
‑
23中任一项所述的小鼠，其进一步包含人CD34
+
造血干细胞。
25.权利要求24所述的小鼠，其中所述人CD34
+
造血干细胞来自人脐带血、骨髓或动员的外周血。26.权利要求1
‑
25中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠包含人CD45
+
细胞群。27.权利要求26所述的小鼠，其中所述人CD45
+
细胞群包含人CD45
+
/CD3
+
T细胞和/或人CD45
+
/CD33
+
骨髓细胞。28.权利要求27所述的小鼠，其中相对于NOD scid gamma对照小鼠或NOD scid gamma
‑
Hu
‑
FLT3L对照小鼠，所述人CD45
+
细胞群包含增加的百分比的人CD45
+
/CD3
+
T细胞。29.权利要求28所述的小鼠，其中所述小鼠中人CD45
+
/CD3
+
T细胞的百分比增加至少25％、至少50％或至少100％。30.权利要求27
‑
29中任一项所述的小鼠，其中相对于NOD scid gamma对照小鼠或NOD scid gamma
‑
Hu
‑
FLT3L对照小鼠，所述人CD45
+
细胞群包含增加的百分比的人CD45
+
/CD33
+
骨髓细胞。31.权利要求30所述的小鼠，其中所述小鼠中人CD45
+
/CD33
+
骨髓细胞的百分比增加至少25％、至少50％或至少100％。32.权利要求1
‑
31中任一项所述的小鼠，其中相对于NOD scid gamma对照小鼠或NOD scid gamma
‑
Hu
‑
FLT3L...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：杰克逊实验室，
类型：发明
国别省市：