用于评估免疫细胞疗法的人源化小鼠模型制造技术

本文提供了人源化小鼠模型和用于确定工程化免疫细胞疗法的施用是否可能引发细胞因子释放综合征和/或确定抗疾病疗法的功效的方法。此外，本文提供的模型可用于测试不同的抗CRS疗法的功效。CRS疗法的功效。CRS疗法的功效。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于评估免疫细胞疗法的人源化小鼠模型
[0001]相关申请
[0002]根据35U.S.C.
§
119(e)，本申请要求2020年9月24日提交的美国临时申请号63/083,003和2020年9月24日提交的美国临时申请号63/083,016的优先权，其各自的全部内容通过引用并入本文中。

技术介绍

[0003]过继细胞疗法(ACT)，如嵌合抗原受体(CAR)免疫细胞疗法(例如，CAR T细胞疗法或CAR
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自然杀伤细胞(CAR
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NK)疗法)已经成为革命性的新癌症治疗。它已被证明是血液恶性肿瘤的有效新治疗，并且目前正在研发用于治疗实体瘤癌症。ACT利用基因转移来重编程表达工程化抗原受体的免疫细胞，这使得免疫细胞(例如，T细胞、B细胞和/或自然杀伤(NK)细胞)能够识别并靶向(结合)患病细胞(如肿瘤细胞)特异性的细胞表面抗原，进一步消除携带抗原的患病细胞。目前，有三种食品和药物管理局(FDA)批准的CAR T细胞产品，例如：两种用于治疗B细胞淋巴瘤，一种用于治疗晚期套细胞淋巴瘤(MCL)。类似地，NK细胞作为身体对抗致命感染和恶性细胞的第一道防线起着关键作用。

技术实现思路

[0004]免疫细胞疗法，如ACT(例如，CAR T细胞、CAR B细胞和/或CAR NK细胞疗法)最常见的副作用是细胞因子释放综合征(CRS)和脑病综合征(神经毒性)
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两种可导致显著发病率和死亡率的主要并发症。CRS是在体内免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、NK细胞)激活和扩增后由多种细胞因子引起的细胞因子介导的全身性炎症反应。包含工程化抗原受体的免疫细胞(即，工程化免疫细胞)、患病细胞(例如，肿瘤细胞)和其他免疫细胞可以释放细胞因子并导致诱导CRS。与CRS的发病机理相关的主要细胞因子包括白细胞介素(IL)6、IL10、干扰素(IFN)
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γ、单核细胞趋化蛋白1(MCP
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1)和粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)。几种其他细胞因子，包括但不限于肿瘤坏死因子(TNF)、IL1、IL2、IL2受体α(IL2Rα)和IL8，也涉及CRS的发生。尽管CRS的机制仍有待更好地理解，但导致这种毒性的几个因素包括嵌合体抗原受体的结构、高肿瘤负荷、更高的工程化免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、NK细胞)输注剂量和其他患者特异性的因素，如预先存在的炎症状态和基线内皮激活。为了克服CRS的毒性，一种用于CRS治疗的途径是在CRS发生早期应用抗细胞因子疗法，以防止发展成危及生命的高级别CRS。目前，托珠单抗(tocilizumab)(IL6拮抗剂)被FDA批准用于治疗严重或危及生命的工程化免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、NK细胞)诱导的CRS。
[0005]CRS的临床前模型可用于鉴定对CRS治疗有效的试剂，其不干扰工程化免疫细胞(例如，CAR T细胞、CAR B细胞或CAR NK细胞)的细胞因子介导的抗肿瘤作用。此外，CRS的临床前模型有助于评估哪些工程化免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、NK细胞)(例如，哪种特异性CAR构建体)诱导最少的CRS并保持治疗有效。
[0006]另外的需要来自通用同种异体工程化免疫细胞(例如，CAR T细胞、CAR B细胞或CAR NK细胞)疗法的进步，其中在患者组或群体中使用相同的工程化免疫细胞，并且目前没
有可用的针对安全性和功效的预筛选(参见例如，Zhao J等，Journal of Hematology&Oncology 2018；11(132))；然而，目前用于这些目的的临床前模型有限。可用的那些不代表在肿瘤微环境中造成CRS诱导的所有各种类型的免疫细胞，或者需要费力的模型开发和工程化免疫细胞(例如，T细胞、B细胞、NK细胞)产生。
[0007]应当理解，本文中的术语“工程化免疫细胞”是指包含(例如，表达)工程化抗原受体(即，特异性结合感兴趣的细胞表面抗原的非天然存在的受体)的任何免疫细胞(例如，T细胞、B细胞或NK细胞)。例如，“CAR免疫细胞”，如“CAR T细胞”被认为是“工程化免疫细胞”。工程化免疫细胞的其他实例包括具有工程化T细胞受体(TCR)的T细胞、工程化(例如，编辑的)肿瘤浸润淋巴细胞(eTIL)和工程化调节性T细胞(eTreg)。
[0008]本公开的一些方面提供了一种方法，其包括：向免疫缺陷小鼠施用人免疫细胞和人外周血单核细胞(PBMC)，其中人免疫细胞包含特异性结合患病人细胞上的细胞表面抗原的工程化受体，并且免疫缺陷小鼠已移植患病人细胞；以及测定免疫缺陷小鼠的CRS症状和/或人免疫细胞的功效。
[0009]在一些实施方式中，方法还包括将患病的人细胞施用于免疫缺陷小鼠。
[0010]在一些实施方式中，人免疫细胞选自T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、树突细胞和嗜中性粒细胞。
[0011]在一些实施方式中，人免疫细胞是基因组修饰的免疫细胞。
[0012]在一些实施方式中，工程化受体是CAR。
[0013]在一些实施方式中，人免疫细胞是具有工程化CAR的T细胞。
[0014]在一些实施方式中，工程化受体是T细胞受体(TCR)。
[0015]在一些实施方式中，人免疫细胞是具有工程化TCR的T细胞。
[0016]在一些实施方式中，人免疫细胞是调节性T细胞(Treg)。
[0017]在一些实施方式中，人免疫细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
[0018]在一些实施方式中，患病的人细胞选自血细胞、肌细胞和神经元细胞。
[0019]在一些实施方式中，患病的人细胞是肿瘤细胞。
[0020]在一些实施方式中，肿瘤细胞是原发性肿瘤细胞。
[0021]在一些实施方式中，患病的人细胞是癌细胞。
[0022]在一些实施方式中，患病的人细胞是非癌细胞。
[0023]在一些实施方式中，PBMC和人免疫细胞是自体的。
[0024]在一些实施方式中，患病的人细胞、PBMC和人免疫细胞是自体的。
[0025]在一些实施方式中，PBMC和人免疫细胞是同种异体的。
[0026]在一些实施方式中，方法还包括在将人免疫细胞和人PBMC施用于免疫缺陷小鼠之前辐照免疫缺陷小鼠。
[0027]在一些实施方式中，同时施用人免疫细胞和人PBMC。
[0028]在一些实施方式中，方法还包括在测定之前向免疫缺陷小鼠施用用于治疗CRS的候选药剂。
[0029]在一些实施方式中，小鼠是非肥胖糖尿病(NOD)小鼠。
[0030]在一些实施方式中，小鼠包含Prkdc基因中的无效突变和Il2rg基因中的无效突变。
[0031]在一些实施方式中，小鼠具有NOD
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Cg.
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Prkdc
scid
IL2rg
tm1wJl
/SzJ基因型本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种方法，包括：向免疫缺陷小鼠施用人免疫细胞和人外周血单核细胞(PBMC)，其中所述人免疫细胞包含特异性结合患病的人细胞上的细胞表面抗原的工程化受体，并且所述免疫缺陷小鼠已移植所述患病的人细胞；和测定所述免疫缺陷小鼠的细胞因子释放综合征(CRS)的症状和/或所述人免疫细胞的功效。2.根据权利要求1所述的方法，还包括将所述患病的人细胞施用于免疫缺陷小鼠。3.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述人免疫细胞选自T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、树突细胞和嗜中性粒细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述人免疫细胞是基因组修饰的免疫细胞。5.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述工程化受体是嵌合抗原受体(CAR)。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述人免疫细胞是具有工程化CAR的T细胞。7.根据权利要求1
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5任一项所述的方法，其中所述工程化受体是T细胞受体(TCR)。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述人免疫细胞是具有工程化TCR的T细胞。9.根据权利要求4
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8任一项所述的方法，其中所述人免疫细胞是调节性T细胞(Treg)。10.根据权利要求4
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8任一项所述的方法，其中所述人免疫细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。11.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述患病的人细胞选自血细胞、肌细胞和神经元细胞。12.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述患病的人细胞是肿瘤细胞。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述肿瘤细胞是原发性肿瘤细胞。14.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述患病的人细胞是癌细胞。15.根据权利要求1
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13任一项所述的方法，其中所述患病的人细胞是非癌细胞。16.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述PBMC和所述人免疫细胞是自体的。17.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述患病的人细胞、所述PBMC和所述人免疫细胞是自体的。18.根据权利要求1
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15任一项所述的方法，其中所述PBMC和所述人免疫细胞是同种异体的。19.根据前述任一项权利要求所述的方法，还包括在将所述人免疫细胞和所述人PBMC施用于免疫缺陷小鼠之前辐照所述免疫缺陷小鼠。20.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述人免疫细胞和所述人PBMC同时施用。21.根据前述任一项权利要求所述的方法，还包括在所述测定之前向所述免疫缺陷小鼠施用用于治疗CRS的候选药剂。22.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠是非肥胖糖尿病(NOD)小鼠。23.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠包含Prkdc基因中的无效突变和Il2rg基因中的无效突变。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述小鼠具有NOD
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Cg.
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Prkdc
scid
IL2rg
tm1wJl
/SzJ基因型。
25.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠缺乏功能性主要组织相容性复合物I(MHC I)和主要组织相容性复合物II(MHC II)。26.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠包含无效H2
‑
Ab1基因。27.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠包含无效MHC I类H2
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K1基因。28.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述小鼠包含无效MHC I类H2
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D1基因。29.根据权利要求23
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28任一项所述的方法，其中所述小鼠是NOD.Cg
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Prkdc
scid H2
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K1
tm1Bpe H2
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Ab1
em1Mvw H2
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D1
tm1Bpe Il2rg
tm1Wjl/
SzJ小鼠(NSG
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(K
b D
b
)
null
(IA
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【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：杰克逊实验室，
类型：发明
国别省市：