用于SARS-COV-2感染的人源化小鼠模型制造技术

本公开提供了经工程化以表达人血管紧张素转化酶2(huACE2)序列的转基因免疫受损小鼠。huACE2序列可与人角蛋白18(hKRT18)启动子或内源性小鼠血管紧张素转化酶2(mACE2)启动子可操作地连接。本公开的转基因免疫受损小鼠可用于评价用于减少或预防SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于SARS
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COV
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2感染的人源化小鼠模型
[0001]相关申请
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求2020年7月15日提交的美国临时申请号63/052,260的利益，该临时申请通过引用整体并入本申请。
[0003]政府许可权利
[0004]本专利技术是在国立卫生研究院授予的出资编号CA034196的政府支持下完成的。政府对专利技术享有一定的权利。

技术介绍

[0005]严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)流行刺激了开发有效药物的努力。尽管使用细胞系的体外研究可用于测试抗病毒药物的潜在效力，但也必须在不使患者面临风险的情况下测试这些实验性治疗剂的体内功效和安全性。这些药物的测试和早期试验中实验性疫苗的评价已在患者和健康志愿者中启动，但为了加快进展，迫切需要可经受SARS
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CoV
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2感染的动物模型。

技术实现思路

[0006]本文提供了在一些实施方案中以人体生理水平表达人血管紧张素转化酶2(huACE2)的免疫缺陷小鼠品系，从而支持SARS
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COV
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2感染、致病性以及用于预防和/或治疗SARS
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COV
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2感染和/或COVID
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19(冠状病毒病)发生的预防和/或治疗剂的测试。
[0007]本公开的一些方面提供了一种免疫缺陷非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其基因组中包含含有编码人宿主细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的开放阅读框的核酸，其中该小鼠缺乏成熟T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞。
[0008]在一些实施方案中，小鼠包含Prkdc基因中的无效突变和Il2rg基因中的无效突变。
[0009]在一些实施方案中，小鼠具有选自NOD
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Cg.
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Prkdc
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/SzJ、NOD.Cg
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/SzJ和NOD.Cg
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Prkdc
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/ShiJic的基因型。例如，小鼠可具有NOD
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/SzJ基因型。
[0010]在一些实施方案中，所述核酸与编码表位标签(任选地FLAG标签)的序列连接。
[0011]在一些实施方案中，编码人ACE2的开放阅读框与人角蛋白18(KRT18)启动子可操作地连接。
[0012]在一些实施方案中，核酸位于小鼠基因组的安全港基因座(safe harbor locus)内。例如，安全港基因座可以是Rosa26基因座。
[0013]在一些实施方案中，小鼠的基因组包括单拷贝的该核酸。
[0014]在一些实施方案中，开放阅读框与内源性小鼠Ace2启动子可操作地连接。在一些实施方案中，该核酸位于小鼠Ace2的外显子2中。在一些实施方案中，小鼠不表达小鼠Ace2。
[0015]在一些实施方案中，小鼠的基因组不含外源载体DNA。
[0016]在一些实施方案中，小鼠表达生理水平的人ACE2。
[0017]在一些实施方案中，小鼠被移植人造血干细胞(HSCs)。在一些实施方案中，小鼠被移植人外周血单核细胞(PBMCs)。
[0018]本公开的其他方面提供了一种方法，其包括施用候选预防或治疗剂。该候选药剂选自康复期人血清、人疫苗和抗微生物剂，任选地抗细菌剂和/或抗病毒剂。
[0019]在一些实施方案中，该方法进一步包括用SARS
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COV
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2感染小鼠。
[0020]在一些实施方案中，该方法进一步包括评估所述药剂预防或治疗SARS
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COV
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2感染和/或COVID
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19发生的效力。
[0021]本公开的再其他方面提供了一种方法，其包括向免疫缺陷小鼠胚胎中引入(a)包含含有编码人ACE2的开放阅读框的核酸的供体多核苷酸，其中该核酸侧翼为第一Bxb1附着位点和第二Bxb1附着位点，任选地attB位点，和(b)Bxb1整合酶或编码Bxb1整合酶的多核苷酸，其中小鼠胚胎在其基因组中包含第一同源Bxb1附着位点和第二同源Bxb1附着位点，任选地attP位点。
[0022]在一些实施方案中，第一同源Bxb1附着位点和第二同源Bxb1附着位点位于安全港基因座中，任选地Rosa26中。
[0023]在一些实施方案中，核酸进一步包含与开放阅读框可操作地连接的人KRT18启动子。
[0024]在一些实施方案中，第一同源Bxb1附着位点和第二同源Bxb1附着位点位于小鼠Ace2中。例如，第一同源Bxb1附着位点和第二同源Bxb1附着位点可以位于小鼠Ace2启动子的下游。
[0025]本公开的再其他方面提供了一种方法，其包括向免疫缺陷小鼠胚胎中引入(a)包含含有编码huACE2的开放阅读框的核酸的供体多核苷酸，和(b)靶向目标小鼠基因的指导RNA(gRNA)。
[0026]在一些实施方案中，该方法进一步包括向小鼠胚胎中引入RNA引导核酸酶或编码RNA引导核酸酶的核酸。在一些实施方案中，RNA引导核酸酶是Cas9核酸酶。
[0027]在一些实施方案中，gRNA靶向小鼠Ace2基因。在一些实施方案中，gRNA靶向小鼠Ace2基因的外显子2。
[0028]在一些实施方案中，胚胎为单细胞胚胎或多细胞胚胎。
[0029]在一些实施方案中，该方法进一步包括将小鼠胚胎植入假孕雌性小鼠中，其中该假孕雌性小鼠能够生育后代小鼠。
[0030]在一些实施方案中，引入是通过显微注射或电穿孔。
[0031]在一些实施方案中，小鼠胚胎包含Prkdc基因中的无效突变和Il2rg基因中的无效突变。
[0032]在一些实施方案中，小鼠具有选自NOD
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/ShiJic的基因型。例如，小鼠可具有NOD
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/SzJ基因型。
附图说明
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫缺陷非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其基因组中包含含有编码人宿主细胞受体血管紧张素转化酶2(ACE2)的开放阅读框的核酸，其中所述小鼠缺乏成熟T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。2.根据权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠包含Prkdc基因中的无效突变和Il2rg基因中的无效突变。3.根据权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠具有选自NOD
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/SzJ、NOD.Cg
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/SzJ和NOD.Cg
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/ShiJic的基因型。4.根据权利要求3所述的小鼠，其中所述小鼠具有NOD
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/SzJ基因型。5.根据权利要求1所述的小鼠，其中所述核酸与编码表位标签，任选地FLAG标签的序列连接。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的小鼠，其中编码人ACE2的所述开放阅读框与人角蛋白18(KRT18)启动子可操作地连接。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的小鼠，其中所述核酸位于所述小鼠的基因组的安全港基因座内。8.根据权利要求4所述的小鼠，其中所述安全港基因座是Rosa26基因座。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠的基因组包括单拷贝的所述核酸。10.根据权利要求1
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5中任一项所述的小鼠，其中所述开放阅读框与内源性小鼠Ace2启动子可操作地连接。11.根据权利要求10所述的小鼠，其中所述核酸位于小鼠Ace2的外显子2中。12.根据权利要求10或11所述的小鼠，其中所述小鼠不表达小鼠Ace2。13.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠的基因组不含外源载体DNA。14.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠表达生理水平的人ACE2。15.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠被移植人造血干细胞(HSCs)。16.根据前述权利要求中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠被移植人外周血单核细胞(PBMCs)。17.一种方法，包括向前述权利要求中任一项的小鼠施用候选预防或治疗剂。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述候选药剂选自康复期人...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：杰克逊实验室，
类型：发明
国别省市：