表达人HLA-A201限制基因的转基因小鼠模型制造技术

本公开提供了免疫缺陷NOD.Cg

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达人HLA
‑
A201限制基因的转基因小鼠模型
[0001]相关申请
[0002]根据35U.S.C.
§
119(e)，本申请要求于2020年7月8日提交的美国临时申请号63/049,187的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]小鼠模型已被广泛用于在体内研究人类疾病，以规避处理人类患者的复杂性。然而，部分地由于小鼠和人类免疫系统之间的重要差异，鼠模型通常不能充分地重演人类疾病(Hagai等，2018；Kanazawa,2007；Mestas&Hughes,2004；Williams,Flavell,&Eisenbarth,2010)。因此，人源化小鼠(定义为具有人类免疫系统的小鼠)可能是有吸引力的替代方案(Shultz,Brehm、Garcia
‑
Martinez&Greiner,2012；Theocharides,Rongvaux,Fritsch,Flavell&Manz,2016；Victor Garcia,2016；Zhang&Su,2012)。为此，可通过移植人类CD34
+
造血祖细胞(HPC)来人源化缺乏共同γ链(γc)的免疫缺陷小鼠，如NOD
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SCID
‑
Il2γc
‑
/
‑
(NSG)或BALB/c
‑
Rag2
‑
/
‑/>‑
γc
‑
/
‑
(BRG)(Matsumura等，2003；Traggiai等，2004)。基于T细胞的来源，该模型可进一步分类为两种类型：(1)其中成熟T细胞从HPC的供体中分离并过继转移的模型(Aspord等，2007；Pedroza
‑
Gonzalez等，2011；Wu等，2014；Wu等，2018；Yu等，2008)；在这种情况下，T细胞在人类胸腺中选择；和(2)其中内源性T细胞从人类CD34
+
HPC从头生成的模型(Matsumura等，2003；Traggiai等，2004)；在这种情况下，人类T细胞在小鼠胸腺中选择。

技术实现思路

[0004]本公开提供了表达HLA
‑
A201限制基因的人源化小鼠模型。人源化小鼠研究的一个重要方面是在人类MHC的背景下人类适应性免疫的成熟(Billerbeck等人，2013；Danner等人，2011；Najima等人，2016)。产生该小鼠模型以部分地支持人HLA上的抗原呈递和使造血祖细胞(HPC)供体与小鼠匹配。该小鼠模型尤其解决了上述模型的局限性。其中从HPC供体中分离成熟T细胞并过继转移的第一模型的最大限制是移植物抗宿主病；其中内源性T细胞从人CD34
+
HPC从头生成的第二模型的最大限制是能够识别人主要组织相容性复合物(MHC)的有限T细胞数量。
[0005]因此，本公开的一些方面提供了非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其包含失活的小鼠Prkdc等位基因、失活的小鼠IL2rg等位基因、失活的小鼠Flt3等位基因、编码人白介素3(IL3)的核酸、编码人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM
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CSF)的核酸、编码人干细胞因子(SCF)的核酸和编码与人HLA
‑
A2.1基因的MHC1类、α1和α2结合结构域共价连接的人B2
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微球蛋白(B2M)以及鼠H2
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Db的α3胞质和跨膜结构域(HLA
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A2/H2
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D/B2M)的核酸。本公开的进一步方面提供了包含失活的小鼠Flt3等位基因、编码人IL3的核酸、编码人GM
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CSF的核酸、编码人SCF的核酸和编码HLA
‑
A2/H2
‑
D/B2M的核酸的NSG
TM
小鼠。这些小鼠模型支持人HLA上的抗原呈递并允许造血祖细胞(HPC)供体与小鼠的匹配。
[0006]本文还提供产生包含失活的小鼠Prkdc等位基因、失活的小鼠IL2rg等位基因、失
活的小鼠Flt3等位基因、编码人IL3的核酸、编码人GM
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CSF的核酸、编码人SCF的核酸和编码人HLA
‑
A2/H2
‑
D/B2M的核酸的NOD小鼠的方法，使用所述小鼠作为模型系统的方法和繁殖所述小鼠的方法。
[0007]本文进一步提供了包含编码人ILS的核酸、编码人GM
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CSF的核酸、编码人SCF的核酸和编码人HLA
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A2/H2
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D/B2M的转基因的NSG
TM
细胞。
附图说明
[0008]图1A
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1C描述了在NSG
‑
SGM3F
‑
A2小鼠中来自不同的人CD34
+
HPC来源的人类移植。图1A是描述NSG
‑
SGM3F
‑
A2小鼠的繁育方案的示意图。图1B描述了4周龄小鼠血液中mCD45
+
细胞上的HLA
‑
A2表达。图1C描述了在用人胎儿肝脏、脐带血和骨髓HPC移植后12周，测定hNSG
‑
SGM3F
‑
A2中hCD45
+
细胞的绝对数量和人CD33
+
、CD19
+
和CD3
+
细胞的百分比的图。
[0009]图2A
‑
2D描述了用人脐带血或胎儿肝脏HPC移植的人源化SGM3F
‑
A2小鼠中人类移植的比较。图2A描述了在用1
×
105个脐带血(CB)或胎儿肝脏(FL)HPC移植后12周，通过hSGM3F
‑
A2小鼠中hCD45+细胞的百分比和绝对数量在血液中测量的人类移植。n＝91只小鼠，来自5个CB供体，n＝95只小鼠，来自4个FL供体。嵌套t检验。图2B描述了hSGM3F
‑
A2小鼠中hCD33+、hCD19+、hCD3+细胞的绝对数量。图2C描述了hSGM3F
‑
A2小鼠的血液中人CD4
+
T细胞和CD8
+
T细胞的绝对数量。图2D描述了在移植后12周通过ELISA在hSGM3F
‑
A2小鼠的血浆中测量的总人IgM、IgG和IgA。
具体实施方式
[0010]本公开提供了支持人HLA上的抗原呈递并使造血祖细胞(HPC)供体与小鼠匹配的小鼠模型。在一些方面，本文提供的小鼠模型具有NOD.Cg
‑
Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NSG
TM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种非肥胖糖尿病(NOD)小鼠，其包含失活的小鼠Prkdc等位基因；失活的小鼠IL2rg等位基因；失活的小鼠Flt3等位基因；编码人白细胞介素3(IL3)的核酸；编码人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM
‑
CSF)的核酸；编码人干细胞因子(SCF)的核酸；以及编码与人HLA
‑
A2.1基因的MHC I类、α1和α2结合结构域共价连接的人B2
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微球蛋白(B2M)以及鼠H2
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Db的α3胞质和跨膜结构域(HLA
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A2/H2
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D/B2M)的核酸。2.根据权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠是包含失活的小鼠Flt3等位基因、编码人IL3的核酸、编码人GM
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CSF的核酸、编码人SCF的核酸和编码HLA
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A2/H2
‑
D/B2M的核酸的NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Wjl
/SzJ(NOD scidγ)小鼠。3.根据权利要求1或2所述的小鼠，其中所述编码HLA
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A2/H2
‑
D/B2M的核酸包含编码HLA
‑
A2/H2
‑
D/B2M的转基因。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠表达编码HLA
‑
A2/H2
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D/B2M的转基因。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的小鼠，其中骨髓小鼠CD45
+
细胞在4周龄时表达可检测水平的HLA
‑
A2。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的小鼠，其中所述小鼠已被照射，用人造血祖细胞(HPC)移植，并且所述人HPC作为人CD45+细胞移植。7.根据权利要求6所述的小鼠，其中所述人HPC来自胎儿肝脏、脐带血或骨髓，并且所述小鼠中的移植的人CD45
+
细胞包括CD19
+
B细胞、CD33
+
骨髓细胞和CD3
+
T细胞的混合群体。8.根据权利要求6所述的小鼠，其中所述人HPC来自胎儿肝脏、脐带血或骨髓，且所述小鼠的肺组织包含CD3
+
T细胞和HLA
‑
DR
+
CD11c
+
树突细胞。9.根据权利要求6所述的小鼠，其中所述人HPC为HLA
‑
A2
+
且所述小鼠包含HLA
‑
A2
+
小鼠胸腺上皮细胞。10.一种产生权利要求1
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5中任一项所述的小鼠的方法，包括将编码HLA
‑
A2/H2
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D/B2M的转基因引入NOD scidγ小鼠中，该小鼠包含失活的小鼠Flt3等位基因、编码人白介素3(IL3)的核酸、编码人粒细胞/巨噬细胞刺激因子(GM
‑
CSF)的核酸和编码人干细胞因子(SCF)的核酸。11.一种产生权利要求1
‑
5中任一项所述的小鼠的方法，包括使NSG
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SGM3F小鼠与NSG
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HLA
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A2/HHD小鼠杂交，所述NSG
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SGM3F小鼠包含编码人...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：杰克逊实验室，
类型：发明
国别省市：