移植有人肝细胞的非人脊椎动物及其制造方法技术

本发明专利技术提供一种人肝细胞的增殖速度比目前存在的人肝脏移植非人脊椎动物更快，且人肝细胞的取代率、组织学及生理学上的人再造性也很高的非人脊椎动物及其制造方法。一种移植有人肝细胞的基因改造非人脊椎动物的制造方法，包括在体内存在人IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】移植有人肝细胞的非人脊椎动物及其制造方法


[0001]本专利技术涉及一种移植有人肝细胞的非人脊椎动物。

技术介绍

[0002]为了分析人特异性肝炎病毒的感染、所给药的药剂的代谢、或人肝脏的增殖，目前，多个团队均制得了保持有人肝细胞的免疫耐受小鼠。其中，在保持外源胸苷激酶基因在该肝脏中特异性表达，且移植有人的肝细胞的小鼠中，小鼠的肝细胞被人的肝细胞取代，人肝细胞取代率良好，达80％左右(参见专利文献1)。
[0003]现有技术文献
[0004]专利文献
[0005]专利文献1：专利第5073836号公报

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于，提供一种人肝细胞的增殖速度比目前存在的人肝脏移植非人脊椎动物更快，且人肝细胞的取代率、组织学及生理学上的人再造性也很高的非人脊椎动物及其制造方法、以及通过该有效的作用制备更高程度重建了人肝组织的结构及生理的非人脊椎动物、及该非人脊椎动物的制造方法。
[0007]本专利技术人等针对人肝细胞的增殖速度比目前存在的人肝脏移植小鼠更快，且人肝细胞的取代率也很高的移植有人的肝细胞的小鼠的制造方法进行了潜心研究。
[0008]本专利技术人等发现，通过在向免疫缺陷小鼠移植人肝细胞时存在人IL
‑
6，能够制造人肝细胞的增殖速度快，且人肝细胞的取代率也很高的移植有人的肝细胞的小鼠。此外还发现，该小鼠为具有与人肝脏非常类似的肝脏的小鼠模型，在这种人肝细胞的取代快且取代率也高的小鼠的肝脏中，组织学及生理学上均更高程度地再造了人肝组织，从而完成了本专利技术。
[0009]即，本专利技术如下所述。
[0010][1]一种移植有人肝细胞的基因改造非人脊椎动物的制造方法，包括在体内存在人IL
‑
6的状态下向对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物中移植人肝细胞。
[0011][2]根据[1]的制造方法，其中，对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物为免疫缺陷动物。
[0012][3]根据[1]或[2]的制造方法，其中，通过肝损伤诱导法使对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏产生肝损伤，使移植后的人的肝细胞代替非人脊椎动物的肝细胞在非人脊椎动物的肝脏中存活。
[0013][4]根据[3]的制造方法，其中，肝损伤通过以下中任意一种方法诱导：
[0014](i)通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持胸苷激酶基因能够表达，并向非人脊椎动物给药人肝细胞与自杀底物来诱导肝损伤；
[0015](ii)通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持尿激酶
型纤溶酶原激活因子基因能够表达来诱导肝损伤；
[0016](iii)通过使对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的延胡索酰乙酰乙酸水解酶(Fah)基因缺失来诱导肝损伤；
[0017](iv)通过给药以下(a)～(e)中任意一种化合物来诱导肝损伤：
[0018](a)四氯化碳
[0019](b)对乙酰氨基酚
[0020](c)d
‑
半乳糖胺
[0021](d)硫代乙酰胺
[0022](e)抗Fas抗体；及
[0023](v)并用上述的(i)～(iv)中的两种、三种或四种。
[0024][5]根据[4]的制造方法，其中，通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持胸苷激酶基因能够表达，并向非人脊椎动物给药人肝细胞与自杀底物来诱导肝损伤。
[0025][6]根据[1]～[5]中任意一种制造方法，其中，通过向非人脊椎动物导入并表达人IL
‑
6基因而使体内存在人IL
‑
6。
[0026][7]根据[1]～[5]中任意一种制造方法，其中，通过向非人脊椎动物给药人IL
‑
6而使体内存在人IL
‑
6。
[0027][8]根据[1]～[5]中任意一种制造方法，其中，通过向非人脊椎动物给药并表达人IL
‑
6基因表达培养细胞或表达该基因的载体分子而使体内存在人IL
‑
6。
[0028][9]根据[4]～[8]中任意一种制造方法，其中，非人脊椎动物为通过如下工序制作的TK
‑
NOG小鼠：
[0029](i)将人单纯疱疹病毒1型
‑
胸苷激酶(HSV
‑
tk)基因显微注射于NOD/Shi小鼠的受精卵；及
[0030](ii)使(i)工序中得到的具有人单纯疱疹病毒1型
‑
胸苷激酶(HSV
‑
tk)基因的NOD/Shi小鼠与NOG(NOD/SCID/γc
null
)小鼠交配。
[0031][10]根据[9]的制造方法，其中，TK
‑
NOG小鼠为由选自NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Alb
‑
UL23)7
‑
2/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)4
‑
9/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)5
‑
2/ShiJic小鼠及NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)10
‑
15/ShiJic构成的组中的基因记号所表示的小鼠。
[0032][11]根据[9]或[10]的制造方法，其中，所述制造方法包括下述工序：
[0033]向[9]或[10]的小鼠、即在体内存在人IL
‑
6的TK
‑
NOG小鼠给药自杀底物及由人分离出的肝细胞，从而损伤小鼠肝细胞，并由人肝细胞取代小鼠肝细胞。
[0034][12]根据[9]或[10]的制造方法，其中，[9]或[10]的小鼠、即在体内存在人IL
‑
6的TK
‑
NOG小鼠为通过下述工序得到的TK
‑
NOG
‑
IL
‑
6小鼠：
[0035](i)将包含人IL
‑
6cDNA的DNA片段显微注射于由雌性NOD小鼠与雄性NOG小鼠所制作的受精卵，获得人IL
‑
6转基因首建小鼠；
[0036](ii)通过使人IL
‑
6转基因首建小鼠与NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种移植有人肝细胞的基因改造非人脊椎动物的制造方法，包括在体内存在人IL
‑
6的状态下向对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物中移植人肝细胞。2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物为免疫缺陷动物。3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，通过肝损伤诱导法使对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏产生肝损伤，使移植后的人的肝细胞代替非人脊椎动物的肝细胞在非人脊椎动物的肝脏中存活。4.根据权利要求3所述的制造方法，其中，肝损伤通过以下中任意一种方法诱导：(i)通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持胸苷激酶基因能够表达，并向非人脊椎动物给药人肝细胞与自杀底物来诱导肝损伤的方法；(ii)通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持尿激酶型纤溶酶原激活因子基因能够表达来诱导肝损伤的方法；(iii)通过使对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的延胡索酰乙酰乙酸水解酶Fah基因缺失来诱导肝损伤的方法；(iv)通过给药以下(a)～(e)中任意一种化合物来诱导肝损伤的方法：(a)四氯化碳(b)对乙酰氨基酚(c)d
‑
半乳糖胺(d)硫代乙酰胺(e)抗Fas抗体；及(v)并用上述的(i)～(iv)中的两种、三种或四种。5.根据权利要求4所述的制造方法，其中，通过在对于人的免疫反应缺失或降低的非人脊椎动物的肝脏中保持胸苷激酶基因能够表达，并向非人脊椎动物给药人肝细胞与自杀底物来诱导肝损伤。6.根据权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，通过向非人脊椎动物导入人IL
‑
6基因并使其表达而使体内存在人IL
‑
6。7.根据权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，通过向非人脊椎动物给药人IL
‑
6而使体内存在人IL
‑
6。8.根据权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，通过向非人脊椎动物给药人IL
‑
6基因表达培养细胞或表达该基因的载体分子并使其表达而使体内存在人IL
‑
6。9.根据权利要求4～8中任一项所述的制造方法，其中，非人脊椎动物为通过如下工序制作的TK
‑
NOG小鼠：(i)将人单纯疱疹病毒1型
‑
胸苷激酶HSV
‑
tk基因显微注射于NOD/Shi小鼠的受精卵；及(ii)使(i)工序中得到的具有人单纯疱疹病毒1型
‑
胸苷激酶HSV
‑
tk基因的NOD/Shi小鼠与NOG即NOD/SCID/γc
null
小鼠交配。10.根据权利要求9所述的制造方法，其中，TK
‑
NOG小鼠为由选自
NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Alb
‑
UL23)7
‑
2/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
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Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)4
‑
9/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)5
‑
2/ShiJic小鼠及NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)10
‑
15/ShiJic构成的组中的基因记号所表示的小鼠。11.根据权利要求9或10所述的制造方法，其中，所述制造方法包括下述工序：向权利要求9或10所述的小鼠、即在体内存在人IL
‑
6的TK
‑
NOG小鼠给药自杀底物及由人分离出的肝细胞，从而损伤小鼠肝细胞，并由人肝细胞取代小鼠肝细胞。12.根据权利要求9或10所述的制造方法，其中，权利要求9或10所述的小鼠、即在体内存在人IL
‑
6的TK
‑
NOG小鼠为通过下述工序得到的TK
‑
NOG
‑
IL
‑
6小鼠：(i)将包含人IL
‑
6cDNA的DNA片段显微注射于由雌性NOD小鼠与雄性NOG小鼠所制作的受精卵，获得人IL
‑
6转基因首建小鼠；(ii)通过使人IL
‑
6转基因首建小鼠与NOG小鼠交配，得到scid及IL2Rg
null
的变异体；及(iii)使(ii)中得到的NOG
‑
IL
‑
6小鼠与TK
‑
NOG小鼠交配。13.根据权利要求12所述的制造方法，其中，得到的TK
‑
NOG
‑
IL
‑
6小鼠由选自由N NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg((Alb
‑
UL23)7
‑
2,CMV
‑
IL
‑
6)/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
‑
UL23 mutant30)4
‑
9,CMV
‑
IL
‑
6/ShiJic、NOD.Cg
‑
Prkdc
scid
Il2rg
tm1Sug
Tg(Ttr
...

【专利技术属性】
技术研发人员：末水洋志，
申请(专利权)人：公益财团法人实验动物中央研究所，
类型：发明
国别省市：