免疫缺陷小鼠制造技术

本发明专利技术的课题为提供能够排除来源于免疫缺陷小鼠的免疫细胞针对人抗体的影响、且人细胞的植入性高的免疫缺陷小鼠。从NOG小鼠中进一步使小鼠FcgR基因缺损时，该小鼠不显示针对肿瘤的抗体依赖性细胞毒性活性，较之NOG小鼠而言，人细胞以显著高的比例植入。此外，向将人IL‑15基因导入至该小鼠而得到的小鼠中植入人NK细胞，从而仅人NK细胞成为效应细胞，且能够评价ADCC活性。

SCID mouse

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫缺陷小鼠
本专利技术涉及向IL-2(白细胞介素2)受体γ链的基因中导入突变从而IL-2受体γ链缺损、且FcgR(IgGFc受体)在功能上不表达的基因改造免疫缺陷小鼠、及在该基因改造免疫缺陷小鼠中以显著高的比例植入有人细胞的人细胞植入免疫缺陷小鼠等。
技术介绍
能够在体内对人细胞、人组织进行分析的人源化免疫缺陷小鼠不仅可作为用于开发药品的研究工具进行利用，还作为能够通过移植人细胞从而在体内进行人细胞的分化、功能分析等基础研究的有用工具，而被认为是可期待对于医疗的贡献的实验动物，长年以来一直尝试制备更有用的人源化免疫缺陷小鼠。例如，伊藤等人在能够植入人细胞、可观察到补体活性、巨噬细胞功能的减弱、自然杀伤(NK)细胞活性的减弱等的NOD-scid小鼠中敲除了作为细胞因子受体共通结构域的IL-2受体γ链基因，将所得小鼠(IL2RγKO小鼠)进行回交，从而制备了功能性T细胞及B细胞一同缺失、NK细胞活性消失、巨噬细胞功能减弱、且树突状细胞功能减弱、具有优异的异种细胞植入性的NOG小鼠(也表示为“NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/ShiJic”、“NOD-scid，il2rgnull”等)(例如，参见专利文献1)。NOG小鼠被认为是人的细胞、组织的植入性非常高的免疫缺陷小鼠。另一方面，免疫系统中，IgG抗体在其结构中包含可变区和恒定区，在可变区中与病原体等异种抗原进行结合。另一方面，在许多免疫细胞的表面，存在与IgG抗体的恒定区结合的受体FcgR，与抗原等结合的抗原特异性IgG抗体介由其恒定区与FcgR结合。结果，可诱导免疫细胞的活化，排除病原体等异物。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第3753321号公报
技术实现思路
专利技术所要解决的课题已知向上述的NOG小鼠中移植高表达肿瘤相关抗原的人癌细胞、进而施予识别肿瘤相关抗原的IgG抗体后，可显著抑制NOG小鼠内的人癌的生长，但本申请的专利技术人确认到，在NOG小鼠中，IgG抗体介由小鼠FcgR而参与抗体依赖性癌抑制反应，所述反应捕获与该肿瘤相关抗原结合的抗体，并损伤人癌细胞。因此，在实施施予人抗体的抗体医药品的功能评价实验等情况下，存在难以判别对于抗体的免疫应答是来自人免疫细胞的免疫应答、还是来自小鼠免疫细胞的免疫应答的问题。本专利技术的课题在于提供能够排除来源于免疫缺陷小鼠的免疫细胞针对人抗体的影响、且人细胞的植入性较之以往而言更高的免疫缺陷小鼠。用于解决课题的手段本申请的专利技术人发现，从NOG小鼠中进一步使小鼠FcgR基因缺损时，该小鼠不显示针对肿瘤的抗体依赖性细胞毒性(Antibody-Dependent-Cellular-Cytotoxicity：ADCC)活性，较之NOG小鼠而言，人细胞以显著高的比例植入。此外，确认了向该小鼠中导入人IL-15基因，并将人NK细胞植入后，仅人NK细胞成为效应细胞，能够评价ADCC活性，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述。[1]基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，向IL-2受体γ链基因中导入突变从而IL-2受体γ链缺损，且与T细胞及B细胞的抗原受体基因的重建相关的基因的突变位于双等位基因座，并且FcgR在功能上不表达。[2]如上述[1]所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，与T细胞及B细胞的抗原受体基因的重建相关的基因的突变为SCID突变或RAG突变。[3]如上述[1]或[2]所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，所述基因改造免疫缺陷小鼠是NOG-FcgRKO小鼠。[4]如上述[1]～[3]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，FcgR的基因包括Fcer1g及Fcgr2b。[5]如上述[1]～[4]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，所述基因改造免疫缺陷小鼠不显示针对肿瘤的抗体依赖性的细胞毒性活性。[6]来源于上述[1]～[5]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的组织。[7]来源于上述[1]～[5]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的体细胞。[8]来源于上述[1]～[5]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的生殖细胞。[9]人细胞植入免疫缺陷小鼠，其特征在于，在上述[1]～[5]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠中以显著高的比例植入有人细胞。[10]如上述[9]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠，其特征在于，人细胞为人外周血单核细胞。[11]植入有来源于上述[9]或[10]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的人细胞的组织。[12]来源于上述[9]或[10]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的人体细胞。[13]来源于上述[9]或[10]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的生殖细胞。[14]基因改造免疫缺陷小鼠(II)，其是通过将上述[1]～[5]中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠、与导入了人IL-15基因的基因改造免疫缺陷小鼠(I)进行交配而制备成的。[15]如上述[14]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)，其特征在于，基因改造免疫缺陷小鼠(I)为能扩增·维持人NK细胞的NOG-hIL-15Tg小鼠。[16]来源于上述[14]或[15]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)的组织。[17]来源于上述[14]或[15]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)的体细胞。[18]来源于上述[14]或[15]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)的生殖细胞。[19]人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)，其特征在于，在上述[14]或[15]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)中以显著高的比例植入有人细胞。[20]如上述[19]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)，其特征在于，人细胞为人外周血单核细胞。[21]来源于上述[19]或[20]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)的组织。[22]来源于上述[19]或[20]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)的体细胞。[23]来源于上述[19]或[20]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)的生殖细胞。[24]使用上述[9]或[10]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠，对针对人细胞的抗人细胞表面蛋白分子抗体的活性、作用机制进行评价的方法。[25]使用上述[14]或[15]所述的基因改造免疫缺陷小鼠(II)、对人NK细胞的ADCC活性进行评价的方法。[26]使用上述[19]或[20]所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠(II)、对人NK细胞的ADCC活性进行评价的方法。[27]人细胞植入免疫缺陷小鼠(III)，其特征在于，通过使人免疫细胞和人肿瘤细胞在基因改造免疫缺陷小鼠中共存，从而能够对抗人细胞表面蛋白分子抗体的功能进行评价。[28]使用人细胞植入免疫缺陷小鼠(III)、对针对人细胞的抗人细胞表面蛋白分子抗体的功能进行评价的方法。[29]使用人细胞植入免疫缺陷小鼠(III)、对针对人免疫细胞的抗人细胞表面蛋白分子抗体的功能进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，向IL-2受体γ链基因中导入突变从而IL-2受体γ链缺损，且与T细胞及B细胞的抗原受体基因的重建相关的基因的突变位于双等位基因座，并且FcgR在功能上不表达。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180927 JP 2018-181930;20181120 JP 2018-2172291.基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，向IL-2受体γ链基因中导入突变从而IL-2受体γ链缺损，且与T细胞及B细胞的抗原受体基因的重建相关的基因的突变位于双等位基因座，并且FcgR在功能上不表达。


2.如权利要求1所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，与T细胞及B细胞的抗原受体基因的重建相关的基因的突变为SCID突变或RAG突变。


3.如权利要求1或2所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，所述基因改造免疫缺陷小鼠是NOG-FcgRKO小鼠。


4.如权利要求1～3中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，FcgR的基因包括Fcer1g及Fcgr2b。


5.如权利要求1～4中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠，其特征在于，所述基因改造免疫缺陷小鼠不显示针对肿瘤的抗体依赖性的细胞毒性活性。


6.来源于权利要求1～5中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的组织。


7.来源于权利要求1～5中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的体细胞。


8.来源于权利要求1～5中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠的生殖细胞。


9.人细胞植入免疫缺陷小鼠，其特征在于，在权利要求1～5中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠中以显著高的比例植入有人细胞。


10.如权利要求9所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠，其特征在于，人细胞为人外周血单核细胞。


11.植入有来源于权利要求9或10所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的人细胞的组织。


12.来源于权利要求9或10所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的人体细胞。


13.来源于权利要求9或10所述的人细胞植入免疫缺陷小鼠的生殖细胞。


14.基因改造免疫缺陷小鼠(II)，其是通过将权利要求1～5中任一项所述的基因改造免疫缺陷小鼠、与导入了人IL-15基因的基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：高桥武司，片野郁实，
申请(专利权)人：公益财团法人实验动物中央研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP