抗-CTLA-4抗体及其使用方法技术

本公开提供了特异性地结合人CTLA

【技术实现步骤摘要】
抗
‑
CTLA
‑
4抗体及其使用方法
[0001]本申请是申请日为2016年5月27日和专利技术名称为“抗
‑
CTLA
‑
4抗体及其使用方法”的201680042887.8号专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2015年5月29日提交的美国临时申请No:62/168,391、2015年6月19日提交的美国临时申请No:62/182,363、2015年7月09日提交的美国临时申请No:62/190,653、2015年11月18日提交的美国临时申请No:62/257,202、2016年1月19日提交的美国临时申请No:62/280,263、2016年2月08日提交的美国临时申请No:62/292,500、2016年2月12日提交的美国临时申请No:62/294,558和2016年4月15日提交的美国临时申请No:62/323,226的利益，其各自通过引用全文并入本文中。
1.

[0004]本公开涉及特异性地结合人CTLA
‑
4的抗体和使用该抗体的方法。
2.
技术介绍

[0005]T淋巴细胞在对抗原的适应性免疫应答中起关键作用。原始T细胞的完全激活需要至少两种信号(Bretscher 1999,Proc Natl Acad Sci USA 96:185
‑
90)。第一种抗原特异性的信号是由T细胞受体(TCR)与抗原呈递细胞(APC)上的MHC/肽复合体的相互作用提供的。第二种共刺激性信号是由T细胞上的受体与抗原呈递细胞(APC)上的其配体之间的相互作用提供的。TCR/MHC与共刺激相互作用二者的耦合经由多种细胞内途径(包括钙
‑
钙调磷酸酶和RAS丝裂原活化蛋白激酶)导致T细胞激活，和多种效应化合物(包括细胞因子诸如IL
‑
2)的转录因子的随后激活。这些事件导致T细胞增殖、CD4
+
辅助T细胞(T
H
)池的产生和激活的CD8
+
细胞毒性T细胞的扩增。共刺激不仅对于完全T细胞激活是关键的，其在TCR/MHC耦合期间的不存在也导致无反应性和/或细胞凋亡。
[0006]虽然多种正向和负向共刺激途径参与T细胞调节，但最关键的是在T细胞上的CD28与APC上的B7
‑
1(CD80)和B7
‑
2(CD86)之间。CD28促进T细胞分化为TH1表型细胞并增强B细胞的抗体产生和T细胞的激活。APC诸如树突细胞(DC)和B细胞上表达的B7
‑
1和B7
‑
2具有重叠但不同的功能。B7
‑
2是组成型地表达的，且与TCR/MHC耦合(信号1)一致地在APC上快速上调。B7
‑
1表达在静止细胞上非常低，但通常在延长的T细胞刺激后被诱导。这些差异暗示，尽管B7
‑
2在T细胞激活的起动时可能是重要的，但是B7
‑
1可能在保持免疫应答方面起更大作用。
[0007]在T细胞激活后，负向调节受体细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)在T细胞上被上调(Alegre等，2001，Nat Rev Immunol 1：220
‑
8)。CTLA4在结构上与CD28同源，但更紧密地结合B7
‑
1和B7
‑
2配体二者。CLTA4以几种方式抑制免疫反应：它与CD28竞争B7配体并因此阻断共刺激；它负向地传递信号以抑制T细胞激活；且它可以通过转胞吞作用(trans
‑
endocytosis)从相对的细胞捕获CD80和CD86，从而导致受损的经由CD28的共刺激(Krummel和Allison，1995，J Exp Med 182：459
‑
465；Walunas等，1994，Immunity 1：405
‑
413；
Qureshi等,2011,Science 332:600
‑
603)。
[0008]由于B7共刺激途径在促进和保持免疫反应方面的关键作用，设计为拮抗这一途径的治疗剂对于治疗自身免疫性疾病和病症是有希望的。
3.
技术实现思路

[0009]本公开提供了特异性地结合人CTLA
‑
4和拮抗CTLA
‑
4功能(例如，CTLA
‑4‑
介导的免疫抑制)的抗体。还提供了包含这些抗体的药物组合物、编码这些抗体的核酸、用于产生这些抗体的表达载体和宿主细胞及使用这些抗体治疗受试者的方法。本文公开的抗体特别可用于提高响应于抗原(例如，肿瘤抗原)的T
‑
细胞激活和/或降低Treg
‑
介导的免疫抑制，且因此用于治疗受试者中的癌症。
[0010]因此，在一个方面，本公开提供了分离的抗体，其包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区和含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：
[0011](a)CDRH1包含SYX1MX2(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列，其中X1是S或A；和X2是N或S；
[0012](b)CDRH2包含SISSSSSYIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；
[0013](c)CDRH3包含VGLMGPFXI(SEQ ID NO:23)的氨基酸序列，其中X是D或N；
[0014](d)CDRL1包含RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO:24)的氨基酸序列，其中X1是S或G；X2是R、S或T；和X3是G或A；
[0015](e)CDRL2包含X1X2SX3RAT(SEQ ID NO:25)的氨基酸序列，其中X1是G或A；X2是A或T；和X3是T、S、R或N；和
[0016](f)CDRL3包含QQYGX1SPX2T(SEQ ID NO:26)的氨基酸序列，其中X1是S或T；和X2是W或F。
[0017]在某些实施方式中，CDRH1包含选自SEQ ID NO:1和27的氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRH3包含选自SEQ ID NO:3和28的氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRL1包含选自SEQ ID NO:4、29和30的氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRL2包含选自SEQ ID NO:5和31
‑
35的氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRL3包含选自SEQ ID NO:6、36和37的氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRH1、CDRH2和CDRH3分别包含SEQ ID NO:1、2和3；27、2和3；或27、2和28中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列。在某些实施方式中，CDRL1、CDRL2和CDRL3分别包含SEQ ID NO:4、5和6；29、32和36；29、33和3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区和含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中：(a)CDRH1包含SYX1MX2(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列，其中X1是S或A；和X2是N或S；(b)CDRH2包含SISSSSSYIYYADSVKG(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列；(c)CDRH3包含VGLMGPFXI(SEQ ID NO:23)的氨基酸序列，其中X是D或N；(d)CDRL1包含RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO:24)的氨基酸序列，其中：X1是S或G；X2是R、S或T；和X3是G或A；(e)CDRL2包含X1X2SX3RAT(SEQ ID NO:25)的氨基酸序列，其中：X1是G或A；X2是A或T；和X3是T、S、R或N；和(f)CDRL3包含QQYGX1SPX2T(SEQ ID NO:26)的氨基酸序列，其中：X1是S或T；和X2是W或F。2.权利要求1所述的分离的抗体，其中CDRH1包含选自SEQ ID NO:1和27的氨基酸序列。3.权利要求1或2所述的分离的抗体，其中CDRH3包含选自SEQ ID NO:3和28的氨基酸序列。4.权利要求1
‑
3任一项所述的分离的抗体，其中CDRL1包含选自SEQ ID NO:4、29和30的氨基酸序列。5.权利要求1
‑
4任一项所述的分离的抗体，其中CDRL2包含选自SEQ ID NO:5和31
‑
35的氨基酸序列。6.权利要求1
‑
5任一项所述的分离的抗体，其中CDRL3包含选自SEQ ID NO:6、36和37的氨基酸序列。7.权利要求1
‑
6任一项所述的分离的抗体，其中CDRH1、CDRH2和CDRH3分别包含SEQ ID NO:1、2和3；27、2和3；或27、2和28中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列。8.权利要求1
‑
7任一项所述的分离的抗体，其中CDRL1、CDRL2和CDRL3分别包含SEQ ID NO:4、5和6；29、32和36；29、33和37；30、31和6；29、34和6；或29、35和37中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列。9.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含含有互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链可变区及含有互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链可变区，其中CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3分别包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6中所示的氨基酸序列。10.权利要求1
‑
9任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的重链可变区。
11.权利要求1
‑
9任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有与选自SEQ ID NO:7和38
‑
42的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一的氨基酸序列的重链可变区。12.权利要求11所述的分离的抗体，其中所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:7和38
‑
42的氨基酸序列。13.权利要求12所述的分离的抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。14.权利要求13所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链。15.权利要求13所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链。16.权利要求13所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链。17.权利要求13所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链。18.权利要求1
‑
11任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有源自人IGHV3
‑
21种系序列的氨基酸序列的重链可变区。19.权利要求1
‑
18任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链可变区。20.权利要求1
‑
18任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有与选自SEQ ID NO:8和43
‑
47的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、95％或100％同一的氨基酸序列的轻链可变区。21.权利要求20所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有选自SEQ ID NO:8和43
‑
47的氨基酸序列的轻链可变区。22.权利要求21所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区。23.权利要求22所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链。24.权利要求22所述的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链。25.权利要求1
‑
20任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有源自人IGKV3
‑
20种系序列或人IGKV3
‑
11种系序列的氨基酸序列的轻链可变区。26.权利要求1所述的分离的抗体，其中所述重链可变区和所述轻链可变区分别包含SEQ ID NO:7和8；7和44；7和45；38和8；38和45；39和43；39和45；39和46；39和47；40和43；40和8；40和44；40和45；41和8；41和44；41和45；41和47；42和43；或42和45中所示的氨基酸序列。27.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区；和(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区。
28.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含含有选自SEQ ID NO:7和38
‑
42的氨基酸序列的重链可变区。29.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含含有选自SEQ ID NO:8和43
‑
47的氨基酸序列的轻链可变区。30.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链。31.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链。32.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链。33.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的重链；和(b)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链。34.一种特异性地结合人CTLA
‑
4蛋白的分离的抗体，其包含：(a)具有源自人IGHV3
‑
21种系序列的氨基酸序列的重链可变区；和(b)具有源自人IGKV3
‑
20种系序列或人IGKV3
‑
11种系序列的氨基酸序列的轻链可变区。35.权利要求1
‑
13、18
‑
29或34任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含选自人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2的重链恒定区。36.权利要求35所述的分离的抗体，其中所述重链恒定区是IgG1。37.权利要求35所述的分离的抗体，其中所述重链恒定区是IgG2。38.权利要求1
‑
22、25
‑
29或34
‑
37任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含选自人IgGκ和IgGλ的轻链恒定区。39.权利要求1
‑
13、18
‑
29或34
‑
37任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含作为野生型人IgG重链恒定区的变体的人IgG重链恒定区，其中所述变体人IgG重链恒定区以比野生型人IgG重链恒定区结合选自FcγRIIB和FcγRIIA的人Fcγ受体更高的亲和力结合所述人Fcγ受体。40.权利要求1
‑
13、18
‑
29或34
‑
37任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含作为野生型人IgG重链恒定区的变体的人IgG重链恒定区，其中所述变体人IgG重链恒定区以比野生型人IgG重链恒定区结合人FcγRIIB更高的亲和力结合人FcγRIIB。41.权利要求39或40所述的分离的抗体，其中所述变体人IgG重链恒定区是变体人IgG1、变体人IgG2或变体人IgG4重链恒定区。42.权利要求39
‑
41任一项所述的分离的抗体，其中所述变体人IgG重链恒定区包含根据EU编号系统的一个或多个以下氨基酸突变：G236D、P238D、S239D、S267E、L328F和L328E。43.权利要求39
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41任一项所述的分离的抗体，其中所述变体人IgG重链恒定区包含选自以下的一组氨基酸突变：根据EU编号系统，S267E和L328F；P238D和L328E；P238D和选自
E233D、G237D、H268D、P271G和A330R的一个或多个置换；P238D、E233D、G237D、H268D、P271G和A330R；G236D和S267E；S239D和S267E；V262E、S267E和L328F；及V264E、S267E和L328F。44.权利要求40所述的分离的抗体，还包含降低IgG对人FcγRIIIA、人FcγRIIA或人FcγRI的亲和力的一个或多个氨基酸突变。45.权利要求39
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44任一项所述的分离的抗体，其中所述FcγRIIB在选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究有限公司纪念斯隆凯特琳癌症中心，
类型：发明
国别省市：