一种封闭抗体及其在制备靶向T细胞表达抗原的CAR-T细胞中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种封闭抗体及其在制备靶向T细胞表达抗原的CAR

【技术实现步骤摘要】
targeting of T
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cell malignancies.Blood Adv,2017.1(25):p.2348
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2360)，获得CD7阴性的T细胞，但是这两种技术会引入“脱靶(off
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target)”等不可控的风险因素，且T淋巴细胞膜表面CD7分子的缺失是否会影响尚未被挖掘的生物功能尚不可知。这似乎表明需要创新方法，例如CRISPR/Cas9基因组编辑或蛋白质表达阻断剂，在CAR转导之前破坏T细胞中的靶抗原，以避免广泛的自身抗原驱动的自相残杀。
[0006]除CD7外，CD3、CD4、CD8、CD38、CD34、nTdT、CD99、CD1a、CD10、cyCD3、CD5和CD2也在T细胞表面上有表达。

技术实现思路
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[0007]为了避免经过CAR改造后的T细胞受到自身抗原驱动的自相残杀，本专利技术公开了一种不同于基因编辑敲除T细胞表达抗原或者内质网滞留T细胞表达抗原的技术原理。该技术原理是采用与嵌合抗原受体(CAR)相同结合域的游离抗体，阻断(封闭)CAR
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T细胞与T细胞表面抗原的结合以克服靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞在制备和使用过程中的自相残杀问题，达到了良好的效果。通过封闭T细胞表面抗原，比如CD7分子的方法所制备获得的CAR
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T细胞可以稳步扩增，同时具备特异靶向杀伤肿瘤细胞的功能。本专利技术的方法简易、安全、有效，为临床治疗T
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ALL提供了新思路。
[0008]本专利技术提供一种封闭抗体，其特征在于，所述封闭抗体的重链可变区和轻链可变区分别与待封闭的CAR
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T细胞的scFv的重链可变区和轻链可变区相同；所述待封闭的CAR
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T细胞的scFv靶向T细胞表达抗原。
[0009]进一步地，所述T细胞表达抗原选自CD7、CD3、CD4、CD8、CD38、CD34、nTdT、CD99、CD1a、CD10、cyCD3、CD5和CD2中的一种或多种。
[0010]进一步地，所述T细胞表达抗原为CD7；所述待封闭的CAR
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T细胞的scFv为CD7 scFv；所述封闭抗体的重链可变区包含与所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性的氨基酸序列；所述封闭抗体的轻链可变区包含与所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性的氨基酸序列。
[0011]进一步地，所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示或如SEQ ID NO.21所示；所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示或如SEQ ID NO.23所示。
[0012]进一步地，所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示；所述封闭抗体的重链可变区包含与所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列具有至少62.96％同源性的氨基酸序列；所述封闭抗体的轻链可变区包含与所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列具有至少53.66％同源性的氨基酸序列。
[0013]SEQ ID NO.15与SEQ ID NO.21之间存在62.96％的同源性；SEQ ID NO.17与SEQ ID NO.23之间存在53.66％的同源性。
[0014]进一步地，所述封闭抗体的重链可变区的氨基酸序列选自如下a1)
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a4)任意一种的氨基酸序列：
[0015]a1)SEQ ID NO.15；a2)SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/
或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；a3)SEQ ID NO.21；a4)SEQ ID NO.21所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；
[0016]所述封闭抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自如下b1)
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b4)任意一种的氨基酸序列：
[0017]b1)SEQ ID NO.17；b2)SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；b3)SEQ ID NO.23；b4)SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列。
[0018]进一步地，所述封闭抗体包含所述轻链可变区、所述重链可变区、连接序列linker、Fc区和His标签；所述Fc区为人源lgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc段。
[0019]进一步地，所述连接序列linker可为任意一种所有曾经出现在抗体的轻链可变区和重链可变区之间起到连接作用的氨基酸片段。
[0020]进一步地，所述连接序列linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示、如SEQ ID NO.26所示、如SEQ ID NO.27所示或如SEQ ID NO.28所示。
[0021]本专利技术还提供一种靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞，所述靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞上结合有如上所述的封闭抗体。
[0022]另一方面，本专利技术还公开了如上所述的靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞的制备方法，将所述封闭抗体添加至所述待封闭的CAR
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T细胞的培养体系中，防止所述待封闭的CAR
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T细胞在培养中的自我损伤，得到所述靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞。
[0023]进一步地，包括以下步骤：
[0024]步骤一、制备所述待封闭的CAR
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T细胞；
[0025]步骤二、制备所述封闭抗体；
[0026]步骤三、加入所述步骤二得到的封闭抗体到培养基中，使得所述封闭抗体在所述培养基中的浓度为0.5
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3μg/mL，得到添加有封闭抗体的培养基；采用所述添加有封闭抗体的培养基培养所述步骤一得到的待封闭的CAR
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T细胞，得到所述靶向T细胞表达抗原的CAR
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T细胞。
[0027]进一步地，所述添加有封闭抗体的培养基中所述封闭抗体在所述培养基中的浓度为0.72
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2.88μg/mL，优选地，为0.72μg/mL。
[0028]本专利技术还提供一种含封闭抗体和待封闭的CAR
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T细胞的药物组合物，包含如上所述的封闭抗体和所述待封闭的CAR
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T细胞。
[0029]第三方面，本专利技术还公开了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种封闭抗体，其特征在于，所述封闭抗体的重链可变区和轻链可变区分别与待封闭的CAR
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T细胞的scFv的重链可变区和轻链可变区相同；所述待封闭的CAR
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T细胞的scFv靶向T细胞表达抗原。2.如权利要求1所述的封闭抗体，其特征在于，所述T细胞表达抗原选自CD7、CD3、CD4、CD8、CD38、CD34、nTdT、CD99、CD1a、CD10、cyCD3、CD5和CD2中的一种或多种。3.如权利要求2所述的封闭抗体，其特征在于，所述T细胞表达抗原为CD7；所述待封闭的CAR
‑
T细胞的scFv为CD7 scFv；所述封闭抗体的重链可变区包含与所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性的氨基酸序列；所述封闭抗体的轻链可变区包含与所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同源性的氨基酸序列。4.如权利要求3所述的封闭抗体，其特征在于，所述CD7 scFv的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示或如SEQ ID NO.21所示；所述CD7 scFv的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示或如SEQ ID NO.23所示。5.如权利要求3所述的封闭抗体，其特征在于，所述封闭抗体的重链可变区的氨基酸序列选自如下a1)
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a4)任意一种的氨基酸序列：a1)SEQ ID NO.15；a2)SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；a3)SEQ ID NO.21；a4)SEQ ID NO.21所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；所述封闭抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自如下b1)
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b4)任意一种的氨基酸序列：b1)SEQ ID NO.17；b2)SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列；b3)SEQ ID NO.23；b4)SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列经过添加、缺失、修饰和/或保守性置换至少1个氨基酸残基获得的氨基酸序列。6.如权利要求1所述的封闭抗体，其特征在于，所述封闭抗体包含所述轻链可变区、所述重链可变区、连接序列linker、Fc区和His标签；所述Fc区为人源lgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc段。7.如权利要求6所述的封...

【专利技术属性】
技术研发人员：余宙，叶晶，徐南，谭静雯，康立清，
申请(专利权)人：上海优卡迪生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：