一种调节卵巢功能的生物制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种调节卵巢功能的生物制剂及其制备方法和应用，生物制剂为由重组抗缪勒管激素、PEG化的重组抗缪勒管激素、重组卵泡刺激素、PEG化的重组卵泡刺激素、抗缪勒管激素卵黄抗体、卵泡刺激素卵黄抗体中单个或者多个成分组成的口服制剂。本发明专利技术中，TAT诱导肽可促进蛋白的肠道吸收，PEG化的重组抗缪勒管激素和卵泡刺激素可延长半衰期，使用这两种重组蛋白分别免疫动物可获得含有这两种蛋白抗体的制品，可直接食用也可制成冲剂及压片制品等。重组抗缪勒管激素和其卵黄抗体制品，重组卵泡刺激素和其卵黄抗体制品，组成了一种可调节卵巢功能的体系，可用于临床治疗卵巢功能障碍及日常保健，且本产品成本低廉便于临床及日常保健使用。健使用。健使用。

【技术实现步骤摘要】
一种调节卵巢功能的生物制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因重组
，具体涉及一种调节卵巢功能的生物制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]卵巢功能异常的影响因素很多，从激素角度看影响最大的是抗缪勒管激素和卵泡刺激素。抗缪勒管激素(anti
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M
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llerian hormone，AMH)属于转化生长因子β超家族(transforming growth factor
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beta，TGF
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β)成员的糖蛋白，分子量大小在60kD。AMH在性分化过程中可以促进缪勒氏管退化而使中肾管发育成雄性生殖器官，雌性动物中因缺乏抗缪勒氏管激素使缪勒氏管演变成子宫和输卵管。在成年女性中，AMH抑制原始卵泡的募集和窦卵泡的发育，防止卵泡过早耗竭，是卵巢衰老最准确的生物标志物。卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone，FSH)是脑垂体前叶分泌的一种糖蛋白类促性腺激素，由非共价键结合的α亚基和β亚基两个亚基所组成的异二聚体，分子量大小约为38kD，在下丘脑－垂体－性腺生殖轴中起重要的作用。FSH使颗粒细胞增生，内膜细胞分化，卵泡液形成卵泡腔扩大，从而促进卵巢卵泡的生长、卵泡颗粒细胞的增生以及雌激素的合成与分泌。
[0003]TAT转导蛋白：TAT蛋白转导域是源自人类免疫缺陷病毒Tat蛋白的一段碱性氨基酸多肽，能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部，在药物转运和疾病治疗等领域有着巨大的应用潜力。TAT蛋白转导域首先通过电荷相互作用吸附于细胞膜，然后通过脂筏介导的巨胞饮作用进入细胞。
[0004]真核表达技术是蛋白质重组的一种方法类别，是指通过基因克隆技术，将外源目的基因通过构建表达载体并导入表达细胞的方法，使其在特定真核生物或细胞内表达。其优点在于能够短时间内获得基因表达产物，且可以进行翻译后的修饰加工。方法较简单，适合糖蛋白类的大规模生产。
[0005]卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk，IgY)：通过免疫接种产蛋母鸡(或其他产卵动物)，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗。IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。且IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。
[0006]目前有相关机构研制出了重组抗缪勒管激素、卵泡刺激素，但不能口服。且目前尚未见有抗缪勒管激素卵黄抗体，卵泡刺激素卵黄抗体的制备技术。也未见重组抗缪勒管激素与抗缪勒管激素抗体、卵泡刺激素与卵泡刺激素抗体组成的治疗或保健体系。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种调节卵巢功能的生物制剂及其制备方法和应用，用于调节因抗缪勒管激素、卵泡刺激素分泌异常引起的卵巢功能障碍。
[0008]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0009]一种调节卵巢功能的生物制剂，所述生物制剂为由重组抗缪勒管激素、PEG化的重
组抗缪勒管激素、重组卵泡刺激素、PEG化的重组卵泡刺激素、抗缪勒管激素卵黄抗体、卵泡刺激素卵黄抗体中单个或者多个成分组成的口服制剂；其中，所述重组抗缪勒管激素为由抗缪勒管激素的氨基酸序列的N端连接TAT转导序列组成；所述重组卵泡刺激素为由卵泡刺激素的氨基酸序列的N端连接TAT转导序列组成；所述抗缪勒管激素卵黄抗体为通过重组抗缪勒管激素免疫卵生动物后，再从卵生动物生产的蛋黄中提取获得；所述卵泡刺激素卵黄抗体为通过重组卵泡刺激素免疫卵生动物后，再从卵生动物生产的蛋黄中提取获得。
[0010]进一步改进在于，编码所述重组抗缪勒管激素的氨基酸序列的基因序列如SEQ ID NO:1所示，编码所述重组卵泡刺激素的氨基酸序列的基因序列如SEQ ID NO:2所示。
[0011]进一步改进在于，所述PEG化的重组抗缪勒管激素和PEG化的重组卵泡刺激素为采用分子量为5kD的甲氧基聚乙二醇琥珀酰
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亚胺丙酸酯mPEG
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SPA对所述重组抗缪勒管激素和重组卵泡刺激素进行修饰后制备获得。
[0012]进一步改进在于，所述卵生动物为鸡。
[0013]本专利技术还提供了一种生物制剂的制备方法，所述重组抗缪勒管激素或重组卵泡刺激素的制备方法，步骤包括：
[0014]①
取人抗缪勒管激素氨基酸序列或卵泡雌激素氨基酸序列，在N端连接TAT转导序列，反向翻译获得目的基因序列，将目的基因序列连接到pYES2/CT质粒中；
[0015]②
将质粒用PEG/LiCl法导入到Invscv1酿酒酵母中，获得AMH工程菌或FSH工程菌；
[0016]③
取AMH工程菌或FSH工程菌进行发酵培养和纯化，获得重组的目的蛋白AMH或FSH。
[0017]进一步改进在于，所述PEG化的重组抗缪勒管激素和PEG化的重组卵泡刺激素的制备方法，步骤包括：
[0018]将重组抗缪勒管激素或重组卵泡刺激素进行真空冷冻干燥，获得粉剂；
[0019]利用mPEG
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SPA在反应缓冲体系中进行PEG化处理，获得PEG化修饰的目的蛋白。
[0020]进一步改进在于，所述抗缪勒管激素卵黄抗体或卵泡刺激素卵黄抗体的制备方法，步骤包括：
[0021]步骤一、利用重组抗缪勒管激素或重组卵泡刺激素对卵生动物进行免疫，至卵生动物血清抗体效价为32以上时开始收集鸡蛋；
[0022]步骤二、将鸡蛋的蛋黄液处理成粉状制剂后保存。
[0023]本专利技术还提供了一种生物制剂在作为调节由抗缪勒管激素和卵泡刺激素分泌异常所导致的卵巢功能障碍药物中的应用。
[0024]本专利技术的有益效果在于：
[0025](1)该生物制剂采用的重组蛋白为TAT诱导肽与抗缪勒管激素或者卵泡刺激素的融合蛋白，TAT诱导肽可促进蛋白的肠道吸收，PEG化的重组抗缪勒管激素和卵泡刺激素可延长半衰期，同时可解决抗缪勒管激素和卵泡刺激素口服的问题。
[0026](2)该生物制剂提供了抗缪勒管激素和卵泡刺激素的卵黄抗体制品，其鲜蛋可直接食用，其卵黄冲剂可口服，解决了抗体应用的高成本问题，可广泛应用于临床和日常保健。
[0027](3)该生物制剂可解决AMH和FSH异常的针对性治疗和保健。
附图说明
[0028]图1为重组抗缪勒管激素wb验证图；图中，泳道M：蛋白Marker、泳道1：空菌对照、泳道2：重组抗缪勒管激素、泳道3：PEG化重组抗缪勒管激素。
[0029]图2为重组卵泡刺激素wb验证图；图中，泳道M：蛋白Marker、泳道1：空菌对照、泳道2：重组卵泡刺激素、泳道3：PEG化重组卵泡刺激素。
[0030]图3为重组抗缪勒管激素和重组卵泡刺激素免疫蛋鸡的琼脂双扩散图；
[0031]图中，A为重组抗缪勒管激素免疫蛋鸡血清效价测试结果；B为重组卵泡刺激素免疫蛋鸡血清效价测试结果。1到6孔本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调节卵巢功能的生物制剂，其特征在于，所述生物制剂为由重组抗缪勒管激素、PEG化的重组抗缪勒管激素、重组卵泡刺激素、PEG化的重组卵泡刺激素、抗缪勒管激素卵黄抗体、卵泡刺激素卵黄抗体中单个或者多个成分组成的口服制剂；其中，所述重组抗缪勒管激素为由抗缪勒管激素的氨基酸序列的N端连接TAT转导序列组成；所述重组卵泡刺激素为由卵泡刺激素的氨基酸序列的N端连接TAT转导序列组成；所述抗缪勒管激素卵黄抗体为通过重组抗缪勒管激素免疫卵生动物后，再从卵生动物生产的蛋黄中提取获得；所述卵泡刺激素卵黄抗体为通过重组卵泡刺激素免疫卵生动物后，再从卵生动物生产的蛋黄中提取获得。2.根据权利要求1所述的一种调节卵巢功能的生物制剂，其特征在于，编码所述重组抗缪勒管激素的氨基酸序列的基因序列如SEQ ID NO:1所示，编码所述重组卵泡刺激素的氨基酸序列的基因序列如SEQ ID NO:2所示。3.根据权利要求1所述的一种调节卵巢功能的生物制剂，其特征在于，所述PEG化的重组抗缪勒管激素和PEG化的重组卵泡刺激素为采用分子量为5kD的甲氧基聚乙二醇琥珀酰
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亚胺丙酸酯mPEG
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SPA对所述重组抗缪勒管激素和重组卵泡刺激素进行修饰后制备获得。4.根据权利要求1所述的一种调节卵巢功能的生物制剂，其特征在于，所述卵生动物为鸡。5.一种如权利要求1
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4任一所述的生物制剂的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：符修乐，卞传忠，
申请(专利权)人：安徽中起生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：