猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用，属于猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体快速检测技术领域，所述试纸条的结合垫含有荧光微球标记的兔抗鸡IgY，硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和猪蓝耳病毒GP5重组抗原包被的检测线。本发明专利技术的试纸可用于现场快速检测或者实验室检测，只需要5‑10min，操作方便，操作人员不需要专业培训，且不需要专门的实验室，克服了现有检测方法的局限性，具有良好的市场前景，相比较ELISA抗体检测方法，本发明专利技术更加的方便快捷，灵敏度高，利于推广。

【技术实现步骤摘要】
猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光试纸及其制备方法和应用
本专利技术涉及猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体(猪蓝耳病毒GP5卵黄抗体)的快速检测
，尤其涉及一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体检测免疫荧光纸质及其制备方法和应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)又称猪蓝耳病，是20世纪80年代末暴发的一种新型的高致病性猪传染病.由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。自2006年开始，高致病性猪蓝耳病在我国的爆发与流行给养猪业带来了巨大的经济损失。PRRS病毒(PRRSV)具有高度变异性，有美洲型和欧洲型两种毒株，我国流行的均属于美洲型。PRRSV有9个不分节段的开放阅读框编码。多种非结构蛋白和8个结构蛋白，其中GP5和M蛋白是病毒的主要结构蛋白。GP5蛋白又称为E蛋白，由ORF5编码。是一种跨膜糖蛋白，位于病毒粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体免疫荧光检测试纸，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述结合垫为包被有兔抗鸡IgY-荧光微球复合物的兔抗鸡IgY-荧光微球结合垫，所述硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和猪蓝耳病毒GP5重组抗原包被的检测线。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体免疫荧光检测试纸，包括PVC底板、及依次搭接在PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于，所述结合垫为包被有兔抗鸡IgY-荧光微球复合物的兔抗鸡IgY-荧光微球结合垫，所述硝酸纤维素膜上设有由山羊抗兔IgG包被的质控线和猪蓝耳病毒GP5重组抗原包被的检测线。


2.一种如权利要求1所述的猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体免疫荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备纯化的猪蓝耳病毒GP5重组抗原；
(2)制备硝酸纤维素膜：将山羊抗兔IgG和纯化的猪蓝耳病毒GP5重组抗原分别稀释后，包被在硝酸纤维素膜的质控线和检测线上；
(3)荧光微球标记兔抗鸡IgY：取兔抗鸡IgY，将荧光微球与兔抗鸡IgY混合，离心，用稀释液重悬沉淀，获得兔抗鸡IgY-荧光微球复合物；
(4)制备结合垫：将兔抗鸡IgY-荧光微球复合物均匀喷在结合垫上，充分干燥，获得兔抗鸡IgY-荧光微球结合垫；
(5)试纸条的组装。


3.根据权利要求2所述的一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体免疫荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)制备纯化的猪蓝耳病毒GP5重组抗原的步骤包括：根据已知猪蓝耳病毒GP5蛋白基因序列，制备猪蓝耳病毒GP5蛋白的大肠杆菌重组菌，将重组菌发酵表达并离心获得菌体，将菌体破碎，离心取上清，将上清过亲合层析柱，即为纯化的猪蓝耳病毒GP5重组抗原。


4.根据权利要求2所述的一种猪蓝耳病毒GP5蛋白IgY抗体免疫荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)制备硝酸纤维素膜的步骤包括：山羊抗兔IgG和纯化的猪蓝耳病毒GP5重组抗原分别以10mM的PB缓冲液稀释至终浓度为1mg/ml，再以0.7μL/cm的喷量喷施包被在质控线和检测线上，充分干燥。

【专利技术属性】
技术研发人员：卞传忠，
申请(专利权)人：安徽中起生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34