检测CDR1as表达水平的试剂的新用途制造技术

本发明专利技术提供了一种检测CDR1as表达水平的试剂在预测或辅助预测脊髓损伤预后的试剂盒中的用途，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。CDR1as在脊髓损伤和正常脊髓中差异表达，检测其表达水平能够实现对脊髓损伤预后的预测和辅助预测。此外，CDR1as的表达抑制剂能够抗脊髓纤维化，改善脊髓损伤的预后，具有很好的临床应用价值。具有很好的临床应用价值。具有很好的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
检测CDR1as表达水平的试剂的新用途


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及检测CDR1as表达水平的试剂的新用途。

技术介绍

[0002]脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是一种高致残性、不可逆的中枢神经系统损伤，带来较高的经济压力和社会负担。脊髓损伤有许多潜在的原因，包括创伤、血管病变、感染和肿瘤，最常见的原因是交通事故，然而随着社会的老龄化，跌落伤导致的病例每年都在增加。脊髓在受损后很难进行自我修复，超过一半的脊髓损伤患者在受损部位下方的神经控制区域丧失了全部的运动和感觉功能。4500年来，医生们一直在努力改善脊髓损伤后的恢复，而实用的、有意义的、可临床实践的确切治疗方法依旧没有发展起来。
[0003]脊髓损伤后，损伤部位周围的脊膜和血管成纤维细胞从所在处分离并迁移至损伤中心部位，与大量成纤维细胞分泌的细胞外基质，如纤维连接蛋白、胶原蛋白和层粘连蛋白等纤维化相关蛋白共同形成纤维瘢痕。研究发现，成纤维细胞活化增殖形成的纤维瘢痕是阻碍SCI后轴突再生和功能恢复的主要物质，如果能阻止成纤维细胞的纤维化进程，抑制脊髓的纤维化，将会对脊髓损伤预后的改善起到非常重要的作用。
[0004]非编码核糖核酸(Non
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coding ribonucleic acids,ncRNA)是一类在各种生理和病理过程中发挥重要作用的遗传、表观遗传和翻译调节因子。环状RNA(circular RNAs,circRNAs)是一种新进入学者视野的内源性ncRNA，在哺乳动物细胞中丰富存在，它是通过反向连接形成的，没有开放阅读框、5'帽和聚a尾巴，所以能形成首尾相接、单链闭合的连续环状结构。已有研究显示circRNAs在多种人类疾病，例如恶性肿瘤的发生发展、心血管疾病的诊治中扮演着重要的角色。
[0005]CDR1as是最早报道功能机制的circRNA分子，也是目前研究最广泛的circRNA。现有研究证实，它能够通过海绵微RNA(miRNA)或直接结合RNA结合蛋白(RBP)，调控其下游基因的表达，激活相关信号通路，从而促进或抑制肿瘤的进展，甚至影响肿瘤的化疗敏感性。此外，CDR1as与癫痫、细胞分化的关联也有报道。
[0006]不过，目前尚未见现有技术报道CDR1as与脊髓损伤、脊髓纤维化的关系。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了检测CDR1as表达水平的试剂在预测或辅助预测脊髓损伤预后的试剂盒中的用途，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。
[0008]本专利技术还提供了一种预测或辅助预测脊髓损伤预后的试剂盒，它含有检测CDR1as表达水平的试剂，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。
[0009]进一步地，上述检测CDR1as表达水平的试剂包括扩增CDR1as的引物和/或检测CDR1as的探针。
[0010]本专利技术还提供了CDR1as的表达抑制剂在制备治疗脊髓损伤的药物中的用途，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。
[0011]进一步地，上述表达抑制剂是沉默或敲除CDR1as的试剂。
[0012]更进一步地，上述表达抑制剂为CDR1as的siRNA，序列如SEQ ID NO.2所示。
[0013]更进一步地，上述治疗脊髓损伤的药物为抗脊髓纤维化的药物；优选地，所述抗脊髓纤维化的药物是抑制脊髓成纤维细胞粘连蛋白和/或I型胶原分泌的药物。
[0014]本专利技术还提供了一种治疗脊髓损伤的药物，它含有CDR1as的表达抑制剂，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA；优选地，所述表达抑制剂是沉默或敲除CDR1as的试剂。
[0015]进一步地，上述表达抑制剂为CDR1as的siRNA，序列如SEQ ID NO.2所示。
[0016]更进一步地，上述药物为抗脊髓纤维化的药物；优选地，所述抗脊髓纤维化的药物是抑制脊髓成纤维细胞粘连蛋白和/或I型胶原分泌的药物。
[0017]实验结果表明，CDR1as在损伤脊髓和正常脊髓中差异表达，CDR1as的表达抑制剂能够抗脊髓纤维化，改善脊髓损伤的预后。说明CDR1as表达的降低可改善脊髓损伤的预后，因而对CDR1as表达的检测将有助于对脊髓损伤预后进行预测。
[0018]环状RNA的表达抑制剂是指：抑制环状RNA的表达的物质或试剂，比如，抑制环状RNA转录和/或翻译的物质或试剂。
[0019]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0021]图1为CDR1as的一代测序结果。
[0022]图2为RT
‑
PCR验证脊髓中CDR1as的存在的结果。
[0023]图3为脊髓损伤后环状RNA差异表达。红色像素表示丰度增加，而绿色像素表示丰度减少，p<0.05。
[0024]图4为在脊髓损伤后3天，通过qRT
‑
PCR检测脊髓损伤中心CDR1as的相对表达。
[0025]图5为脊髓纤维化指标的蛋白：粘连蛋白和I型胶原的检测结果；siCirc
‑
NC为CDR1as的siRNA的对照组，siCirc为CDR1as的siRNA组。
具体实施方式
[0026]本专利技术所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0027]实验例1、CDR1as在脊髓组织中存在验证及脊髓损伤后的差异表达
[0028]1.1CDR1as环状结构的验证
[0029]1.1.1组织RNA提取
[0030]新鲜脊髓组织样品研磨后加入Magzol裂解，加氯仿萃取，取水相，加异丙醇沉淀RNA，进而加入75％乙醇洗涤RNA，最后超纯水溶解RNA。RNA浓度利用紫外分光光度计进行OD值的质检。
[0031]1.1.2cDNA反转录、PCR扩增及一代测序
[0032]所用引物序列见表1的F1和R1。反转录采用10μL的体系，其中：RTase Mix 2μL，RT primer(C)*(10μM)1μL,RNA template 1μg，5x RTase Buffer 2μL，最后加入dd水补足10μL。反转录条件是42℃ 60min，72℃ 10min反应，得到cDNA。PCR扩增的体系为30μl体系，具体：2
×
Kofu Mix 15μL，Forward Primer(10μM)1.5μL，Reverse Primer(10μM)1.5μL，cDNA 3μL，H2O 9μL。PCR扩增程序为：9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测CDR1as表达水平的试剂在预测或辅助预测脊髓损伤预后的试剂盒中的用途，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。2.一种预测或辅助预测脊髓损伤预后的试剂盒，其特征在于，它含有检测CDR1as表达水平的试剂，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测CDR1as表达水平的试剂包括扩增CDR1as的引物和/或检测CDR1as的探针。4.CDR1as的表达抑制剂在制备治疗脊髓损伤的药物中的用途，所述CDR1as为序列如SEQ ID NO.1所示的环状RNA。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述表达抑制剂是沉默或敲除CDR1as的试剂。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述表达抑制剂为CDR1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文朝，赵丽红，宋平，张正东，唐秀美，刘雷，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：