用于序列操纵的系统、方法和优化的指导组合物的工程化技术方案

本发明专利技术提供了用于操纵序列和/或靶序列的活性的系统、方法、和组合物。提供了多种载体和载体系统、以及用于设计和使用此类载体的方法，其中一些载体和载体系统编码CRISPR复合物的一个或多个组分。还提供了指导CRISPR复合物在真核细胞中形成的方法以及用于通过利用CRISPR

【技术实现步骤摘要】
用于序列操纵的系统、方法和优化的指导组合物的工程化
[0001]本申请是申请日为2013年12月12日、申请号为201380070567.X、专利技术名称 为“用于序列操纵的系统、方法和优化的指导组合物的工程化”的专利技术专利申请的 分案申请。
[0002]相关应用和引用参考
[0003]本申请要求于2013年6月17日提交的标题为“用于序列操纵的系统、方法和 优化的组合物的工程化(Engineering Of Systems,Methods And OptimizedCompositions For Sequence Manipulation)”的美国临时专利申请61/836,127的优先 权。本申请还要求美国临时专利申请61/758,468；61/769,046；61/802,174； 61/806,375；61/814,263；61/819,803以及61/828,130的优先权，每个的标题为对用 于序列操纵的系统、方法以及组合物进行的工程化和优化，分别提交于2013年1 月30日；2013年2月25日；2013年3月15日；2013年3月28日；2013本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程化的、非天然存在的CRISPR
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Cas系统，其包括：(a)包含Cas9切口酶的蛋白质或者编码所述蛋白质的多核苷酸，所述Cas9切口酶包含在催化结构域中的至少一个突变并且缺乏切割一条DNA链的能力，其中所述Cas9切口酶连接至至少两个核定位信号(NLS)；(b)CRISPR
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Cas系统嵌合指导序列，其包含能够与真核细胞的核中与原型间隔子邻近基序(PAM)相邻的靶序列杂交并指导CRISPR
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Cas复合物与所述靶序列序列特异性结合的指导序列，能够与tracr序列杂交的tracr配对序列，和长度为至少30个核苷酸的tracr序列。2.一种工程化的、非天然存在的CRISPR
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Cas载体系统，其包括一个或多个载体，所述载体包含：(a)可操作地连接至编码包含Cas9切口酶的蛋白质的核苷酸序列的第一调节元件，所述Cas9切口酶包含在催化结构域中的至少一个突变并且缺乏切割一条DNA链的能力，其中所述Cas9切口酶连接至至少两个核定位信号(NLS)；(b)可操作地连接至编码CRISPR
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Cas系统嵌合指导序列的核苷酸序列的第二调节元件，所述CRISPR
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Cas系统嵌合指导序列包含能够与真核细胞的核中与原型间隔子邻近基序(PAM)相邻的靶序列杂交并指导CRISPR
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Cas复合物与所述靶序列序列特异性结合的指导序列，能够与tracr序列杂交的tracr配对序列，和长度为至少30个核苷酸的tracr序列；其中组分(a)和(b)位于所述系统的相同或不同载体上。3.根据权利要求2所述的系统，其中所述载体是病毒载体。4.根据权利要求3所述的系统，其中所述病毒载体是腺相关载体。5.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述tracr序列的长度为至少40个核苷酸。6.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述tracr序列的长度为至少50个核苷酸。7.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述指导序列的长度为15
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30个核苷酸。8.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述指导序列的长度为至少20个核苷酸。9.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述Cas9...

【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：麻省理工学院哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：