治疗BIETTI晶体营养不良的组合物和方法技术

本文提供了将异源CYP4V2基因递送至视网膜例如视网膜的RPE细胞的病毒载体，以治疗患有Bietti晶体营养不良的受试者。有Bietti晶体营养不良的受试者。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗BIETTI晶体营养不良的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用和序列表的并入
[0002]本申请根据35 U.S.C.
§
119(e)要求于2019年2月25日提交的美国临时申请号62/810,257的权益，所述临时申请通过引用以其全文结合入本文。随此提交了包含在名为“PAT058468
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WO
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PCT SQL_ST25”的文件中的序列表并通过引用并入本文，该序列表是156,133字节(在操作系统MS
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Windows中测量)并且于2020年2月22日创建。

技术介绍

[0003]Bietti晶体营养不良(BCD)是一种常染色体隐性遗传障碍，其中许多小的、黄色或白色晶体状脂质沉积物积聚在视网膜中，继而引起脉络膜视网膜萎缩和进行性视力丧失。患有BCD的受试者通常会在十几岁或二十多岁时开始注意到视力问题。除了视力下降外，他们还经常经历夜盲症。他们通常还会失去视力区域，最常见的是周围视力。色觉也可能受损。
[0004]每只眼的视力问题可能以不同的速率恶化，并且受影响的对象之间，甚至在同一家庭中，症状的严重程度和进展也存在很大差异。然而，大多数患有BCD的受试者在40或50岁时成为法律上的盲人。大多数受影响的受试者通常在视野的中央保持一定程度的视力，尽管通常视物模糊并且无法通过处方镜片矫正。
[0005]BCD是由CYP4V2基因突变引起的。该基因位于人类4号染色体的长臂上，编码细胞色素P450家族4亚家族V成员2。作为细胞色素P450酶家族的成员，ω
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羟化酶参与脂质代谢，特别是多不饱和脂肪酸例如二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的氧化。在患有BCD的受试者中鉴定出至少80种不同的CYP4V2基因突变(Zhang等人,Mol Vis[分子视觉]24:700
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711,2018)。导致BCD的CYP4V2基因突变损害或消除了酶的功能，且被认为会影响脂质分解。然而，尚不清楚它们如何导致BCD的特定体征和症状。
[0006]BCD估计将影响全球约65,000人(Xiao等人,Biochem Biophys Res Comm[生物化学与生物物理研究通讯]409:181
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186,2011；和Mataftsi等人,Retina[视网膜]24:416
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426,2004)。它在东亚血统的人中更常见，尤其是中国和日本背景的人。目前，尚无适用于BCD的治疗方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术一般涉及重组病毒载体和使用重组病毒载体在患有视网膜疾病和失明例如BCD的受试者的视网膜(例如视网膜色素上皮(RPE)细胞)中表达蛋白质的方法。
[0008]在一个方面，本专利技术涉及能够将异源基因递送至视网膜，例如人视网膜的病毒载体。本专利技术还涉及能够将异源基因导入视网膜(例如视网膜的RPE细胞)的病毒载体。本专利技术还涉及作为重组腺相关病毒载体的病毒载体(rAAV)。在某些实施例中，rAAV病毒载体可以选自本领域已知的任何AAV血清型，包括但不限于AAV1至AAV12。在某些实施例中，所述rAAV载体衣壳是AAV8血清型。在某些其他实施例中，所述rAAV载体衣壳是AAV9血清型。在某些实施例中，所述rAAV载体衣壳是AAV2血清型。在某些实施例中，所述rAAV载体衣壳是AAV5血清
型。在某些实施例中，所述rAAV载体是衍生自修饰的野生型AAV衣壳序列的新颖的合成AAV血清型。
[0009]在一个方面，提供了病毒载体，其中所述病毒载体包含载体基因组，所述载体基因组以5'到3'方向包含：
[0010](i)5
’
ITR；
[0011](ii)启动子；
[0012](iii)重组核苷酸序列，其包含CYP4V2编码序列；
[0013](iv)聚腺苷酸化(聚A)信号序列；以及
[0014](v)3
’
ITR。
[0015]在一个实施例中，所述载体基因组以5'至3'方向包含：
[0016](i)5
’
ITR；
[0017](ii)启动子；
[0018](iii)内含子；
[0019](iv)重组核苷酸序列，其包含CYP4V2编码序列；
[0020](v)聚A信号序列；以及
[0021](vi)3
’
ITR。
[0022]在一些实施例中，所述载体基因组以5'至3'方向包含：
[0023](i)5
’
ITR；
[0024](ii)启动子；
[0025](iii)重组核苷酸序列，其包含CYP4V2编码序列；
[0026](iv)调节元件；
[0027](v)聚A信号序列；以及
[0028](vi)3
’
ITR。
[0029]在一个实施例中，所述载体基因组以5'至3'方向包含：
[0030](i)5
’
ITR；
[0031](ii)启动子；
[0032](iii)内含子；
[0033](iv)重组核苷酸序列，其包含CYP4V2编码序列；
[0034](v)调节元件；
[0035](vi)聚A信号序列；以及
[0036](vii)3
’
ITR。
[0037]在一些实施例中，所述载体基因组包含的长度大于或约4.1kb且小于或约4.9kb。在另一个实施例中，所述载体基因组包含的长度小于或约5kb。
[0038]在一个实施例中，所述载体基因组包含位于聚A信号序列和3'ITR之间的填充序列。在一些实施例中，所述填充序列的长度在约1
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10、10
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20、20
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30、30
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40、40
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50、50
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60、60
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75、75
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100、100
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150、150
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200、200
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250、250
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300、300
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400、400
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500、500
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750、750
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1,000、1,000
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1,500、1,500
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2,000、2,000
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2,500、或2,500
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3,000个核苷酸之间。
[0039]在一个实施例中，所述5'ITR包含与SEQ ID NO:1具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。
[0040]在一个实施例中，所述启动子是视网膜色素上皮(RPE)
‑
特异性启动子，例如ProA18启动子或ProB4启动子，例如，其本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含载体基因组的病毒载体，所述载体基因组以5
’
至3
’
方向包含：(i)5
’
ITR；(ii)启动子；(iii)重组核苷酸序列，其包含CYP4V2编码序列；(iv)聚腺苷酸化(聚A)信号序列；以及(v)3
’
ITR。2.如权利要求1所述的病毒载体，其中所述启动子是视网膜色素上皮(RPE)
‑
特异性启动子。3.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中所述启动子是ProA18启动子。4.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:2具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。5.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中所述启动子是ProB4启动子。6.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中所述启动子包含与SEQ ID NO:3具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。7.如权利要求1至6中任一项所述的病毒载体，其中所述载体基因组包含位于聚A信号序列和3'ITR之间的填充序列。8.如权利要求1至7中任一项所述的病毒载体，其中所述5'ITR包含与SEQ ID NO:1具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。9.如权利要求1至8中任一项所述的病毒载体，其中所述CYP4V2编码序列包含与SEQ ID NO:13、14、39、41、43、45、47、或49具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。10.如权利要求1至9中任一项所述的病毒载体，其中所述聚A信号包含与SEQ ID NO:18或19具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。11.如权利要求1至10中任一项所述的病毒载体，所述病毒载体还包含内含子序列，所述内含子序列包含与SEQ ID NO:9、10或11具有大于或约90％同一性的核苷酸序列。12.如权利要求1至11中任一项所述的病毒载体，所述病毒载体还包含1)调节元件，所述调节元件包含乙型肝炎病毒或土拨鼠肝炎病毒序列和/或2)位于紧靠包含所述CYP4V2编码序列的重组核苷酸序列的上游的科扎克序列。13.如权利要求1至12中任一项所述的病毒载体，其中所述载体基因组以5
’
至3
’
方向包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：i)SEQ ID NO:1、2、13、18和22；ii)SEQ ID NO:1、3、13、18和22；iii)SEQ ID NO:1、2、14、18和22；iv)SEQ ID NO:1、3、14、18和22；v)SEQ ID NO:1、2、13、19和22；vi)SEQ ID NO:1、3、13、19和22；vii)SEQ ID NO:1、2、14、19和22；viii)SEQ ID NO:1、3、14、19和22；ix)SEQ ID NO:1、2、9、13、18和22；x)SEQ ID NO:1、3、9、13、18和22；
xi)SEQ ID NO:1、2、9、14、18...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：弗里德里克，
类型：发明
国别省市：