一种血清9型重组腺相关病毒复合剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种血清9型重组腺相关病毒复合剂的制备方法，首先分别设计合成两端带有EcoR I与Hind III两个酶切位点的目的基因片段，构建含有hsa

【技术实现步骤摘要】
一种血清9型重组腺相关病毒复合剂的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种血清9型重组腺相关病毒复合剂的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]病理性心肌细胞肥大(pathologicalcardiomyocyteshypertrophy,PCH)是心力衰竭的关键风险因素，其受很多因素的调控，尤其是肾素
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血管紧张素
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醛固酮(RAAS)系统及其主要效应分子血管紧张素II(AngII)。老年个体心脏中AngII上调，RAAS系统激活是引起心脏衰老的关键机制。衰老相关的病理性心肌细胞肥大(SA
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PCH)与RAAS系统活化、心肌纤维化、衰老相关分泌表型(SASP)、心脏功能障碍以及发病率和死亡率增加有关，并且随着衰老成为全球公共卫生日益突出的问题，防治SA
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PCH对治疗多种心血管疾病保护老年健康有着重要的意义。
[0003]腺相关病毒(adeno
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associatedvirus,AAV)，是微小病毒科依赖病毒属本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清9型重组腺相关病毒复合剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)合成带有EcoR I和Hind III两个酶切位点的hsa
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mir
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5p序列，以及带有EcoR I和Hind III两个酶切位点的hsa
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3p和hsa
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3p串联序列，分别进行PCR扩增，酶切以后利用琼脂糖凝胶电泳将目的片段所在区域切胶回收，得到hsa
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5p目的片段和hsa
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3p和hsa
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3p串联目的片段；(2)将hsa
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5p目的片段和穿梭质粒pshuttl
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CMV各自用限制性内切酶EcoR I和Hind III双酶切，然后将得到的双酶切反应产物混合，进行DNA连接反应，得到含有hsa
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5p序列的重组穿梭质粒，对其进行扩增，提纯；将hsa
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3p和hsa
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3p串联目的片段和穿梭质粒pshuttl
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CMV各自用限制性内切酶EcoR I和Hind III双酶切，然后将得到的双酶切反应产物混合，进行DNA连接反应，得到含有hsa
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3p和hsa
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3p串联序列的重组穿梭质粒，对其进行扩增，提纯；(3)将含有hsa
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5p序列的重组穿梭质粒和含腺相关病毒基因组DNA的pAAV
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RC和pHelper质粒共转染293T细胞，培养后收获细胞，反复冻融后离心，获得病毒上清，即为过表达hsa
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5p序列的血清9型重组腺相关病毒，提取DNA进行测序鉴定；将含有hsa
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3p和hsa
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3p串联序列的重组穿梭质粒和含腺相关病毒基因组DNA的pAAV
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RC和pHelper质粒共转染293T细胞，培养后收获细胞，反复冻融后离心，获得病毒上清，即为过表达hsa
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3p和hsa
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3p串联序列的血清9型重组腺相关病毒，提取DNA进行测序鉴定；(4)将过表达hsa
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【专利技术属性】
技术研发人员：靳建亮，苗登顺，王嵘，周佳雯，陈海云，谢春凤，朱剑云，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：