新型CRISPR酶以及系统技术方案

本发明专利技术提供了用于靶向核酸的系统、方法和组合物。具体地说，本发明专利技术提供了包含新型DNA

【技术实现步骤摘要】
新型CRISPR酶以及系统
相关申请并通过引用结合
[0001]本申请要求于2015年6月18日提交的美国临时62/181,739；于2015年7月16日提交的美国临时 62/193,507；2015年8月5日提交的美国临时62/201,542；2015年8月16日提交的美国临时62/205,733； 2015年9月24日提交的美国临时62/232,067；2015年12月18日提交的美国申请序列号14/975,085以及 欧洲申请号16150428.7的权益和优先权。
[0002]将前述申请及其中或它们的诉讼期间(“应用引用文献”)所引用的所有文献或在此引用文献中引用 或参考的所有文献，以及在此或在通过引用结合在此的任何文献中提到的任何产品的任何厂商说明书、描 述、产品规格和产品清单均通过引用结合在此，并且可以应用于本专利技术的实践中。更具体地，所有参考的 文献通过引用结合在此，其程度如同将每个单独的文献具体并单独地指明通过引用结合在此。联邦资助研究的声明
[0003]本专利技术是根据由美国国立卫生研究院(National Institutes of 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程化的、非天然存在的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)
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CRISPR相关(Cas)(CRISPR
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Cas)系统，包含a)一种或多种包含指导RNA的V型CRISPR
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Cas多核苷酸序列，该指导RNA包含连接至同向重复序列的指导序列，其中该指导序列能够与靶序列杂交，或者一种或多种编码该一种或多种V型CRISPR
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Cas多核苷酸序列的核苷酸序列，以及b)Cpf1效应蛋白或者编码该Cpf1效应蛋白的一种或多种核苷酸序列；其中该一种或多种指导序列与所述靶序列杂交，所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3
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，并且所述指导RNA与该Cpf1效应蛋白形成复合物。2.一种包含一种或多种载体的工程化的、非天然存在的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)
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CRISPR相关(Cas)(CRISPR
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Cas)载体系统，包含a)可操作地连接至一种或多种核苷酸序列的第一调节元件，该一种或多种核苷酸序列编码包含指导RNA的一种或多种V型CRISPR
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Cas多核苷酸序列，该指导RNA包含连接至同向重复序列的指导序列，其中该指导序列能够与靶序列杂交，b)可操作地连接至编码Cpf1效应蛋白的核苷酸序列的第二调节元件；其中组分(a)和(b)位于该系统的相同或不同的载体上，其中当转录时，该一种或多种指导序列与所述靶序列杂交，所述靶序列是原型间隔区相邻基序(PAM)的3
’
，并且所述指导RNA与该Cpf1效应蛋白形成复合物。3.如权利要求1或2所述的系统，其中该靶序列是在细胞内。4.如权利要求3所述的系统，其中该细胞包括真核细胞。5.如权利要求1或2所述的系统，其中当转录时，该一种或多种指导序列与该靶序列杂交并且该指导RNA与该Cpf1效应蛋白形成一种复合物，该复合物引起该靶序列遠端切割。6.如权利要求5所述的系统，其中所述切割生成具有4或5
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nt 5
’
突出端的交错双链断裂。7.如权利要求1或2所述的系统，其中该PAM包含5
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T
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富集基序。8.如权利要求1或2所述的系统，其中该效应蛋白是来源于图64所列出的细菌种类的Cpf1效应蛋白。9.如权利要求8所述的系统，其中该Cpf1效应蛋白是来源于选自下组的细菌种类，该组由以下各项组成：土拉热弗朗西丝菌1、土拉热弗朗西丝菌新杀手亚种、易北普雷沃菌、毛螺旋菌科细菌MC20171、解朊丁酸弧菌、佩莱格里尼菌科细菌GW2011_GWA2_33_10、Parcubacteria细菌GW2011_GWC2_44_17、密斯氏菌属某种SCADC、氨基酸球菌属某种BV3L6、毛螺旋菌科细菌MA2020、候选白蚁甲烷枝原体、挑剔真细菌、牛莫拉氏菌237、稻田钩端螺旋体、毛螺旋菌科细菌ND2006、狗口腔卟啉单胞菌3、解糖胨普雷沃菌和猕猴卟啉单胞菌。10.如权利要求9所述的系统，其中该PAM序列是TTN，其中N是A/C/G或T并且该效应蛋白是FnCpf1或者其中该PAM序列是TTTV，其中V是A/C或G并且该效应蛋白是PaCpf1p、LbCpf1或AsCpf1。11.如权利要求1或2所述的系统，其中该Cpf1效应蛋白包含一个或多个核定位信号。12.如权利要求1或2所述的系统，其中编码该Cpf1效应蛋白的这些核酸序列被密码子优化用于在真核细胞中表达。13.如权利要求1或2所述的系统，其中组分(a)和(b)或这些核苷酸序列是在一种载体
上。14.一种修饰感兴趣的靶座位的方法，该方法包括将如权利要求1或2所述的系统递送到所述座位或含有该座位的细胞中。15.一种修饰感兴趣的靶座位的方法，该方法包括将包含Cpf1效应蛋白和一种或多种核酸组分的非天然存在或工程化的组合物递送至所述座位，其中该Cpf1效应蛋白与该一种或多种核酸组分形成一种复合物并且在所述复合物与是原型间隔区相邻基序(PAM)的3
’
的感兴趣的靶座位结合后，该效应蛋白诱导对该感兴趣的靶座位的修饰。16.如权利要求15所述的方法，其中该感兴趣的靶座位是在细胞内。17.如权利要求16所述的方法，其中该细胞是真核细胞。18.如权利要求16所述的方法，其中该细胞是动物细胞或人类细胞。19.如权利要求16所述的方法，其中该细胞是植物细胞。20...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锋，B，
申请(专利权)人：麻省理工学院哈佛大学校长及研究员协会，
类型：发明
国别省市：