人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗中的应用及微针药械制造技术

本发明专利技术提供了一种人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗中的应用及微针药械。将人肝细胞生长因子基因构建到真核表达载体、病毒载体及基因表达框或微环DNA中，采用微针或注射等方式局部导入皮下后，能明显起到抗湿疹及相关症状的作用。因此，该人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗方面，具有极好的应用前景，尤其是以微针器械的形式，不仅能抑制湿疹症状且副作用小。不仅能抑制湿疹症状且副作用小。不仅能抑制湿疹症状且副作用小。

【技术实现步骤摘要】
人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗中的应用及微针药械


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体而言，涉及一种人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗中的应用及微针药械。

技术介绍

[0002]湿疹是由多种内外因素引起的一种皮肤炎症反应，常伴随有剧烈瘙痒，“瘙痒－搔抓”这一恶性循环进一步导致湿疹加重，致使其难愈合，易复发。目前治疗湿疹的药物主要是针对其瘙痒症状，采用多药联合的方式，如抗焦虑药多虑平和抗过敏药物糖皮质激素药膏等的局部应用。此外，也有应用清热利湿、养血润燥中药，及针刺的方式对湿疹进行治疗，取得了一定的治疗效果。然而由于湿疹易反复发作，患者需长期依赖激素类药物，会产生较大的副作用。
[0003]因此，仍需进一步开发一些副作用较小的治疗湿疹的药物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的在于提供一种人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗中的应用及微针药械，以改善现有技术中治疗湿疹的药物副作用严重的问题。
[0005]为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种人肝细胞生长因子基因在制备治疗湿疹及湿疹相关疾病的药物或药械中的应用。
[0006]进一步地，人肝细胞生长因子基因以载体携带的形式存在于药物或药械中。
[0007]进一步地，载体为真核表达质粒、病毒、基因表达框、微环DNA或mRNA；优选地，真核表达质粒包括依次连接的真核细胞启动子、人肝细胞生长因子基因、polyA尾、细菌复制序列及抗生素抗性基因的超螺旋质粒DNA；优选地，作为载体携带人肝细胞生长因子基因的病毒包括：逆转录病毒、腺病毒及腺相关病毒；优选地，基因表达框包括依次连接的真核细胞启动子、增强子、人肝细胞生长因子基因及polyA尾的线性表达框；优选地，微环DNA包括依次连接的真核细胞启动子、人肝细胞生长因子基因、polyA尾及重组酶识别序列的超螺旋闭环DNA；优选地，mRNA指人肝细胞生长因子基因的信使RNA。
[0008]进一步地，药物的剂型为注射液、干粉制剂或载药微针。
[0009]进一步地，药物的给药方式选自局部皮下注射、或微针导入，优选微针导入采用微针贴或滚轮微针、微针注射器导入。
[0010]进一步地，湿疹相关疾病包括湿疹引起的红斑、丘疹、水疱、鳞屑、皮肤炎症反应和瘙痒中的任意一种或多种。
[0011]根据本专利技术的另一方面，提供了一种微针药械，微针药械中含有治疗湿疹及湿疹相关的药物，药物含有人肝细胞生长因子基因。
[0012]进一步地，药物中的人肝细胞生长因子基因以载体携带的形式存在，优选地，载体为真核表达质粒、病毒、基因表达框或微环DNA；更优选地，真核表达质粒含有人肝细胞生长因子基因和卡那霉素抗性基因序列，其中，人肝细胞生长因子基因位于巨细胞病毒启动子
及牛生长激素基因的聚腺苷酸信号之间。
[0013]进一步地，微针药械为微针贴，优选地，微针贴为实心微针、中空微针、镀层微针；优选地，微针贴为可溶性微针；更优选地，可溶性微针的材质选自羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、蔗糖、透明质酸、甲壳素、聚乳酸、聚乳酸
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羟基乙酸共聚物、聚乙内脂、聚碳酸酯、聚乙醇酸及聚二甲基硅氧烷中的任意一种或多种。
[0014]进一步地，药物中载体的浓度为0.001～0.5mg/cm2，优选为0.05～0.1mg/cm2；优选地，微针药械的材质为透明质酸，制备微针药械时，所使用的透明质酸的浓度为200～300mg/mL，更优选为250mg/mL；更优选地，透明质酸的分子量为10～200KD，优选为30～200KD，更优选为40～100KD，进一步优选为45～75KD。
[0015]应用本专利技术的技术方案，将人肝细胞生长因子基因构建到真核表达载体、病毒载体及基因表达框或微环DNA中，采用微针、注射等方式局部导入皮下后，能明显起到抗皮肤炎症和抑制瘙痒等湿疹相关症状的作用。因此，该人肝细胞生长因子基因在湿疹治疗方面，具有极好的应用前景，可进一步制备成载药微针器械。
附图说明
[0016]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0017]图1示出了根据本专利技术的实施例2含质粒DNA的透明质酸微针溶解后的凝胶电泳图；
[0018]图2A和图2B示出了根据本专利技术的实施例3中未给予pHGF治疗的湿疹模型小鼠皮肤状况图；
[0019]图3A和图3B示出了根据本专利技术的实施例3中给予pHGF微针治疗的湿疹模型小鼠皮肤状况图；
[0020]图4A和图4B示出了根据本专利技术的实施例3中给予pHGF皮下注射的湿疹模型小鼠皮肤状况图；
[0021]图5A至图5D示出了根据本专利技术的实施例3中各组小鼠背部剃毛区皮肤病理切片图,其中图5A显示的是正常小鼠的皮肤，图5B结果表明，模型组皮肤表皮脱落坏死，炎性浸润明显，皮肤附件损伤严重；从图5C和图5D分别可以看出，皮下注射组和微针组炎性浸润较轻，皮肤附件较完整，处于修复状态。而且，从图5D的微针组显示出比图5C的皮下注射组更好的疗效；
[0022]图6示出了实施例4所制备的pHGF可溶性微针贴在扫描电镜下的形貌；
[0023]图7示出了实施例5中不同分子量的透明质酸制备的pHGF可溶性微针贴的机械力测试的压力
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位移曲线；
[0024]图8A至8C示出了实施例6中可溶性微针贴小鼠皮肤插入染色试验结果；其中，图8A是小鼠皮肤插入染色情况，图8B是插入前微针形态，图8C是插入后微针形态；
[0025]图9示出了实施例7中透明质酸可溶性微针贴介导pLUC皮下表达小动物活体成像结果；
[0026]图10示出了实施例8中小造模结束后小鼠皮损对比结果。
具体实施方式
[0027]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。
[0028]如前述，现有技术中针对湿疹的药物治疗后存在严重副作用等，为改善这一现状，本申请的专利技术人对开发新的治疗湿疹的药物进行了各种研究和尝试，首次发现人肝细胞生长因子对治疗湿疹具有一定的作用。具体研究如下：
[0029]肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)最初作为一种肝细胞有丝分裂原从肝部分切除大鼠的血清中分离得到。HGF是一多功能生长因子，具有细胞迁移、增殖和促进胚胎期各器官形态发生的作用。它通过与其特异性膜受体c
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met结合而发挥其多样生物学作用，是间质和上皮/内皮细胞间相互作用的重要信息分子，对胚胎发育、组织器官再生、伤口愈合和血管发生起着重要的调节作用。
[0030]专利技术人在之前的研究中，开发了一种合成的携带了肝细胞生长因子(HGF)的重组质粒pHGF，并在前期pHGF镇痛作用研究中发现，pHGF能抑制PGE2、5
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HT及HIS等因子的高表达，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人肝细胞生长因子基因在制备治疗湿疹及湿疹相关疾病的药物或药械中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人肝细胞生长因子基因以载体携带的形式存在于所述药物或药械中。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述载体为真核表达质粒、病毒、基因表达框、微环DNA或mRNA；优选地，所述真核表达质粒包括依次连接的真核细胞启动子、所述人肝细胞生长因子基因、polyA尾、细菌复制序列及抗生素抗性基因的超螺旋质粒DNA；优选地，作为所述载体携带所述人肝细胞生长因子基因的病毒包括：逆转录病毒、腺病毒及腺相关病毒；优选地，所述基因表达框包括依次连接的真核细胞启动子、增强子、所述人肝细胞生长因子基因及polyA尾的线性表达框；优选地，所述微环DNA包括依次连接的真核细胞启动子、人肝细胞生长因子基因、polyA尾及重组酶识别序列的超螺旋闭环DNA；优选地，所述mRNA指人肝细胞生长因子基因的信使RNA。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为注射液、干粉制剂或载药微针。5.根据权利要求1或4所述的应用，其特征在于，所述药物的给药方式选自局部皮下注射、或微针导入，优选所述微针导入采用微针贴、滚轮微针或微针注射器导入。6.根据权利要求1述的应用，其特征在于，所述湿疹相关疾病包括湿疹引起的红斑、丘疹、水疱、鳞屑、皮肤炎症反应和瘙痒中的任意一种或多种。7.一种微针药械，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：张庆林，杜丽，胡申辉，卢育新，程晓晨，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：