异源核酸的最适PS修饰模式制造技术

本发明专利技术的目的在于提供反义链中的PS修饰的数量减少且维持反义效果的双链核酸复合物。本发明专利技术公开了双链核酸复合物的最适PS修饰模式。包含具有这种最适PS修饰模式的反义链的核酸复合物的特征在于毒性低且生物利用率高。将包含具有本发明专利技术的最适PS修饰模式的反义链的双链核酸复合物作为核酸医药使用时是有用的，所述核酸医药利用使特定基因的表达的阻碍(敲除)、特定基因的编码或非编码RNA的功能变化的活性、或者通过在特定基因的前mRNA的加工中诱导外显子跳读使RNA的功能变化的活性。导外显子跳读使RNA的功能变化的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异源核酸的最适PS修饰模式


[0001]本专利技术涉及减轻具有通过反义效果来阻碍或抑制靶向基因的表达的活性的双链核酸的副作用的结构，更详细而言，涉及通过构成反义链的最适PS修饰模式，能够兼顾反义效果的维持和毒性等副作用降低的双链核酸。

技术介绍

[0002]近年，正在进行寡核苷酸作为被称为核酸医药的医药品的开发，特别是从靶向基因的选择性的高度的观点出发，利用了反义法的核酸医药的开发在尽力地进行。反义法是通过将与靶向基因的mRNA(有义链)的部分序列互补的寡核苷酸(反义寡核苷酸(ASO))导入至细胞内，选择性地的阻碍或控制靶向基因编码的蛋白质的表达的方法。单链的反义寡核苷酸(Antisense Oligonucleotide，以下称为“ASO”)有：例如具有杂交至靶向信使RNA而形成了双链后，通过核糖核酸酶(RNase H)分解RNA链，靶向信使RNA的表达受到抑制的作用机制的核苷酸；或利用通过ASO杂交至靶向前信使RNA的外显子(编码区域)或内含子(非编码区域)，在前mRNA的加工中诱导外显子跳读，从而在正常的作用下ASO不存在的情况下，作为外显子部而被剪接，除去生成全长mRNA的部分的作用机制的核苷酸。
[0003]ASO作为核酸医药而发挥功能，因此需要提高核酸酶抗性。专利文献1中公开了通过进行将作为天然的寡核苷酸的核酸间键的磷酸二酯键的磷酸基的一个氧原子取代为硫原子的硫代磷酸酯化(PS化)，能够大幅提高核酸酶抗性。然而，已知包含数量过多的硫代磷酸酯化核酸的ASO作为核酸医药，作为不依赖于序列的副作用而显示出强的肝毒性(非专利文献1、非专利文献2)。因此，与磷酸二酯键的寡聚物相比，需要在抑制了强的肝毒性的副作用的基础上，提高核酸酶抗性，且提高与靶向mRNA的结合活性。作为解决这个问题的一个手段，提出了使ASO的核酸间键是磷酸二酯键(PO)、硫代磷酸酯键(PS)交替反复的构成的方案(专利文献1)。
[0004]另外，专利文献2公开了在由具有能够杂交至靶向信使RNA的序列的ASO和与ASO互补的核酸链构成的双链中使ASO的核酸间键是磷酸二酯键(PO)、硫代磷酸酯键(PS)交替反复的结构的核酸医药(专利文献2)。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：WO00/03720 A1
[0008]专利文献2：WO2018/051762 A1
[0009]非专利文献
[0010]非专利文献1：Nucleic Acids Res.,16,pp.3209
‑
3221(1998)
[0011]非专利文献2：Trends Biotechnol.1996Oct；14(10):376
‑
87.

技术实现思路

[0012]专利技术要解决的技术问题
[0013]本专利技术人等认识到异源双链核酸(Hetero
‑
duplex Oligonucleotide)在各种脏器具有高基因表达抑制效果，但存在(1)给药急性期的出血倾向的副作用、(2)皮下给药时的低生物利用率等技术问题。
[0014]以往已知减少反义链中的PS修饰的数量时毒性等副作用减少，但PS修饰对于维持核酸的稳定性是必须的，因此减少PS的数量时异源核酸变得不稳定，有效性受到损害。
[0015]本专利技术的目的在于提供减少反义链中的PS修饰的数量(即降低毒性等副作用)且维持了反义效果的双链核酸复合物。
[0016]另外，本专利技术的目的在于提供通过以往提案的PS、PO交替重复的构成以外的结构减少反义链中的PS修饰的数量(即降低毒性等副作用)且维持了反义效果的双链核酸复合物。
[0017]用于解决技术问题的技术方案
[0018]本专利技术人等发现了：通过作为双链核酸复合物的第一核苷酸的反义链构成PS修饰模式，维持反义效果并降低毒性的副作用的效果，所述PS修饰模式是(POPOPS)n[PS表示被硫代磷酸酯化的PS修饰核苷酸间键，PO表示未被硫代磷酸酯化的天然的核苷酸间键，n表示自然数]，或具有从第一寡核苷酸的5
’
端侧向3
’
端连续的m个PS修饰核苷酸间键(m＝第一寡核苷酸所包含的核酸数的2/3以下，优选是1/2以下的自然数)的。
[0019]因此，本专利技术涉及以下内容。
[0020]1.一种双链核酸复合物，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～30的核苷酸组成的反义链，所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含将PO、PS、POPO、PSPS、POPS及PSPO中的任意核苷酸间键追加至(POPOPS)n的模式[PS表示被硫代磷酸酯化的PS修饰核苷酸间键，PO表示未被硫代磷酸酯化的天然的核苷酸间键，n表示自然数]，或包含具有从第一寡核苷酸的5
’
端侧向3
’
端连续的m个PS修饰核苷酸间键(m＝第一寡核苷酸所包含的核酸数的2/3以下的自然数)的模式。
[0021]2.根据上述1所述的双链核酸复合物，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～30的核苷酸组成的反义链，所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含将PO、PS、POPO、PSPS、POPS及PSPO中的任意核苷酸间键追加至(POPOPS)n的模式[PS表示被硫代磷酸酯化的PS修饰核苷酸间键，PO表示未被硫代磷酸酯化的天然的核苷酸间键，n是1～9]。
[0022]3.根据上述2所述的双链核酸复合物，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式是以下的任一者：
[0023]POPOPS(n＝1)
[0024]POPOPSPO
[0025]POPOPSPS
[0026]POPOPSPOPO
[0027]POPOPSPSPS
[0028]POPOPSPOPS
[0029]POPOPSPSPO
[0030]POPOPSPOPOPS(n＝2)
[0031]POPOPSPOPOPSPO
[0032]POPOPSPOPOPSPS
[0033]POPOPSPOPOPSPOPO
[0034]POPOPSPOPOPSPSPS
[0035]POPOPSPOPOPSPOPS
[0036]POPOPSPOPOPSPSPO
[0037]POPOPSPOPOPSPOPOPS(n＝3)
[0038]POPOPSPOPOPSPOPOPSPO
[0039]POPOPSPOPOPSPOPOPSPS
[0040]POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPO
[0041]POPOPSPOPOPSPOPOPSPSPS
[0042]POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPS
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双链核酸复合物，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～30的核苷酸组成的反义链，所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含将PO、PS、POPO、PSPS、POPS及PSPO中的任意核苷酸间键追加至(POPOPS)n的模式；或包含具有从第一寡核苷酸的5
’
端侧向3
’
端连续的m个PS修饰核苷酸间键的模式，PS表示被硫代磷酸酯化的PS修饰核苷酸间键，PO表示未被硫代磷酸酯化的天然的核苷酸间键，n表示自然数，m＝第一寡核苷酸所包含的核酸数的2/3以下的自然数。2.根据权利要求1所述的双链核酸复合物，其中，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～30的核苷酸组成的反义链；所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含将PO、PS、POPO、PSPS、POPS及PSPO中的任意核苷酸间键追加至(POPOPS)n的模式，PS表示被硫代磷酸酯化的PS修饰核苷酸间键，PO表示未被硫代磷酸酯化的天然的核苷酸间键，n是1～9。3.根据权利要求2所述的双链核酸复合物，其中，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式是以下的任一者：POPOPS即n＝1POPOPSPOPOPOPSPSPOPOPSPOPOPOPOPSPSPSPOPOPSPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPS即n＝2POPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝3POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPS
POPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝4POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝5POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝6POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝7POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝8POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPS即n＝9POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPS
POPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPOPOPSPSPO。4.根据权利要求3所述的双链核酸复合物，其中，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式是POPOPSPOPOPSPOPOPS。5.一种双链核酸复合物，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～30的核苷酸组成的反义链，所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含具有从第一寡核苷酸的5
’
端侧向3
’
端连续的m个PS修饰核苷酸间键的模式，m＝第一寡核苷酸所包含的核酸数的2/3以下的自然数。6.一种双链核酸复合物，是包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的核酸复合物，所述第一寡核苷酸包含由7～28的核苷酸组成的反义链，所述第二寡核苷酸具有与第一寡核苷酸互补的序列且杂交至第一寡核苷酸，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式包含具有从第一寡核苷酸的5
’
端侧向3
’
端连续的m个PS修饰核苷酸间键的模式，m＝第一寡核苷酸所包含的核酸数的2/3以下的自然数，为1～13的范围。7.根据权利要求6所述的双链核酸复合物，其中，第一寡核苷酸的核苷酸间键的修饰模式是以下的任一者：PSPOPOPOPSPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPO
PSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPSPSPOPOPOPSPSPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPO
PSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPOPSPSPSPOPOPOPOPOPOPO...

【专利技术属性】
技术研发人员：横田隆徳，原伦太朗，永田哲也，木泽秀树，高木钢，
申请(专利权)人：国立大学法人东京医科齿科大学，
类型：发明
国别省市：