SARS-CoV-2S蛋白特异性抗体或其片段及其应用制造技术

本发明专利技术从新冠病毒感染后康复人员PBMC中分离冠状病毒纤突蛋白RBD特异性记忆B细胞、扩增获得抗体轻重链可变区序列，连接导入载体、重组表达获得重组人源单抗，从中选择出与SARS

【技术实现步骤摘要】
SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段及其应用


[0001]本专利技术属于抗体工程领域，具体涉及一种针对冠状病毒的单抗及其应用， 特别是涉及一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]尽管康复患者血浆疗法在临床上取得了一定的成效，然而由于抗原患者血 浆来源有限、纯化抗体安全隐患高、特异性抗体效价不稳定。效价高、性能稳 定、安全性好的单克隆抗体对于控制新冠状病毒疫情具有良好的应用前景。目 前现有文献已经公开或教导了针对新冠病毒RBD制备保护性中和单抗的报道。 利用新冠病毒刺突蛋白RBD产生抗新冠病毒的保护性中和抗体(如：bioRxiv，
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SARS-CoV-2 and SARS-CoV Spike-RBD Structure and Receptor BindingComparison and Potential Implications on Neutralizing Antibody and VaccineDevelopment”，20200220)。SARS刺突蛋白RBD和新冠病毒刺突蛋白RBD存 在交叉中和表位肽，抗SARS的单克隆抗体CR3022能够结合新冠病毒刺突蛋 白RBD(Emerging Microbes&Infections，9(1)：382-385，20200217)。采用同源建 模的方法明确了新冠病毒病毒CTD1/人ACE2复合物的蛋白-蛋白相互作用界面 的热点和关键残基，筛选靶向CTD1区域与ACE2结合表面的候选抑制剂，阻 断病毒与人体ACE2蛋白的识别与结合。
[0003]随着抗SARS-CoV-2疫苗和治疗性抗体研究的持续推进，最近有报道表明 部分治疗性抗体用于SARS-CoV-2治疗时可产生ADE现象。所谓的ADE，是 指抗体依赖的增强作用，某些病毒在特异性抗体协助下复制或感染能力显著增 强，在感染过程中会引发更严重病理损伤。通俗的解释就是，抗体不能中和病 毒，反而充当了“特洛伊木马”，让病毒感染免疫细胞的能力更强，产生更多的 子代病毒，造成严重症状。
[0004]迄今为止，阻断新冠病毒结合宿主ACE2的单克隆抗体仍停留在理论研究 阶段，尚没有序列结构清楚、阻断新冠病毒结合功能明确的单克隆抗体的现有 技术报道。另外，现有技术中关于抗SARS-CoV-2 S蛋白抗体的研究发现在 SARS-CoV-2感染宿主细胞过程中存在着抗体依赖的增强效应(ADE)，为SARS-CoV-2疫苗和治疗性抗体的研究带来困难。
[0005][0006]
技术实现思路

[0007]为解决上述问题，本专利技术从新冠病毒感染后康复人员PBMC中分离冠状病 毒纤突蛋白RBD特异性记忆B细胞、扩增获得抗体轻重链可变区序列，连接导 入载体、重组表达获得重组人源单抗，从中选择出与SARS-CoV-2纤突蛋白RBD 亲和力高、对SARS-CoV-2纤突蛋白RBD与宿主受体ACEII阻断力强、对病毒 侵染细胞的中和活力强的单抗，进而对所述单抗的ADE效应的进行筛选，最终 获得一株不产生ADE现象的抗SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体MW07。具体而 言：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特 征在于
所述抗体或其片段的特异性结合的抗原表位是存在于SARS-CoV-2 S1蛋 白上的抗原表位，并且不存在于SARS-CoV S1蛋白、MERS-CoV S1蛋白上。
[0009]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段特异性结合的抗原表位位于SARS-CoV-2的受体结合域RBD。
[0010]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段以剂量依赖的方式抑制SARS-CoV-2感染宿主细胞。
[0011]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段用于治疗SARS-CoV-2感染时，不会导致明显的抗体依赖的增 强效应(ADE)。
[0012]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段能够通过阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII的结合而发 挥中和作用，其中阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII结合的IC50小于 500ng/mL，例如小于200ng/mL，优选小于100ng/mL，更优选小于80ng/mL。
[0013]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段的重链可变区CDR1-3分别与SEQ ID NO：10所示重链可变区的 CDR1-3具有100％的序列同源性；轻链可变区CDR1-3分别与SEQ ID NO：9所示 轻链可变区的CDR1-3具有100％的序列同源性。
[0014]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段的重链可变区CDR1-3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：14-16， 轻链可变区CDR1-3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：11-13。
[0015]进一步，本专利技术所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于 所述抗体或其片段的重链可变区与SEQ ID NO：10具有70％以上的序列同源性； 轻链可变区与SEQ ID NO：9具有70％以上的序列同源性。
[0016]第二方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特 征在于：通过Fortebio表位竞争结合实验检测，所述单抗或其片段与本专利技术第 一方面所述抗体或其片段具有竞争关系。
[0017]进一步，本专利技术所述抗体或其片段，包括鼠抗体、兔抗体、山羊抗体、绵 羊抗体、骆驼抗体、羊驼抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、Fab、F(ab
’
)2、 Fv、scFv、Fd、重链抗体、纳米抗体等。
[0018]第三方面，本专利技术提供一种组合物，其包含一种或多种SARS-CoV-2 S蛋白 特异性抗体或其片段，所述抗体或其片段选自由本专利技术第一方面所述 SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段组成的组。
[0019]进一步，本专利技术所述组合物，其特征在于还包含药学上可接受的载体，并 作为药物组合物使用，优选所述药物组合物为水剂、针剂、粉针剂。
[0020]第四方面，本专利技术提供抗体或其片段在制备治疗冠状病毒感染药物中的应 用，其特征在于：所述抗体或其片段包含一种或多种选自由本专利技术第一方面所 述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段组成的组。
[0021]进一步，本专利技术所述的应用，其特征在于所述冠状病毒感染包括SARS-CoV-2 感染。
[0022]第五方面，本专利技术提供一种多核苷酸，其编码本专利技术第一方面所述 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段的特异性结合的抗原表位是存在于SARS-CoV-2 S1蛋白上的抗原表位，并且不存在于SARS-CoV S1蛋白、MERS-CoV S1蛋白上。2.如权利要求1所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段特异性结合的抗原表位位于SARS-CoV-2的受体结合域RBD。3.如权利要求1所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段以剂量依赖的方式抑制SARS-CoV-2感染宿主细胞。4.如权利要求1所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段用于治疗SARS-CoV-2感染时，不会导致明显的抗体依赖的增强效应(ADE)。5.如权利要求1所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段能够通过阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII的结合而发挥中和作用，其中阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII结合的IC50小于500ng/mL，例如小于200ng/mL，优选小于100ng/mL，更优选小于80ng/mL。6.如权利要求1-5任一所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段的重链可变区CDR1-3分别与SEQ ID NO：10所示重链可变区的CDR1-3具有100％的序列同源性；轻链可变区CDR1-3分别与SEQ ID NO：9所示轻链可变区的CDR1-3具有100％的序列同源性。7.如权利要求6所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特征在于所述抗体或其片段的重链可变区CDR1-3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：14-16，轻链可变区CDR1-3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：11-13。8.如权利要求6或7所述SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或...

【专利技术属性】
技术研发人员：管轶，桂勋，郑作宜，王双，管静，王荣娟，陈佩雯，焦莎莎，李利峰，张锦超，朱华晨，刘大涛，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：