一种SARS-CoV-2中和性单抗及其应用制造技术

本公开提供一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS-CoV-2中和性单抗及其应用


[0001]本专利技术属于抗体工程领域，具体涉及一种针对冠状病毒的单抗及其应用，特别是涉及一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]尽管康复患者血浆疗法在临床上取得了一定的成效，然而由于抗原患者血浆来源有限、纯化抗体安全隐患高、特异性抗体效价不稳定。效价高、性能稳定、安全性好的单克隆抗体对于控制新冠状病毒疫情具有良好的应用前景。目前现有文献已经公开或教导了针对新冠病毒RBD制备保护性中和单抗的报道。利用新冠病毒刺突蛋白RBD产生抗新冠病毒的保护性中和抗体(如：bioRxiv，“SARS-CoV-2 and SARS-CoV Spike-RBD Structure and Receptor BindingComparison and Potential Implications on Neutralizing Antibody and VaccineDevelopment”，20200220)。SARS刺突蛋白RBD和新冠病毒刺突蛋白RBD存在交叉中和表位肽，抗SARS的单克隆抗体CR3022能够结合新冠病毒刺突蛋白RBD(Emerging Microbes&Infections,9(1):382-385,20200217)。采用同源建模的方法明确了新冠病毒病毒CTD1/人ACE2复合物的蛋白-蛋白相互作用界面的热点和关键残基，筛选靶向CTD1区域与ACE2结合表面的候选抑制剂，阻断病毒与人体ACE2蛋白的识别与结合。
[0003]迄今为止，阻断新冠病毒结合宿主ACE2的单克隆抗体仍停留在理论研究阶段，尚没有序列结构清楚、阻断新冠病毒结合功能明确的单克隆抗体的现有技术报道。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术从新冠病毒感染后康复人员PBMC中分离冠状病毒刺突蛋白RBD特异性记忆B细胞、扩增获得抗体轻重链可变区序列，连接导入载体、重组表达获得重组人源单抗，从中选择出与SARS-CoV-2刺突刺突蛋白RBD亲和力高、对SARS-CoV-2刺突蛋白RBD与宿主受体ACEII阻断力强、对病毒侵染细胞的中和活力强的四株单抗MW03、MW04、MW05、MW06。具体而言：
[0005]一方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，所述单抗或其片段在不高于10μg/mL浓度时，对滴度为102CCID50的SARS-CoV-2的中和率不低于90％。
[0006]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段能中和或阻断SARS-CoV-2对 Vero-E6细胞的侵袭和/或感染。
[0007]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段能够通过阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII的结合而发挥中和活性，其中阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体 ACEII结合的IC50小于30nM，例如小于25nM，优选小于20nM，更优选小于 15nM。
[0008]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段能与SARS-CoV-2的S蛋白特异性结合，而与MERS-CoV的S蛋白无特异性结合。
[0009]进一步，进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段与SARS-CoV的S蛋白有交叉结合反应。
[0010]第二方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于在同等条件下，所述单抗或其片段对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力，高于人ACE2 对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力。
[0011]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力常数KD值小于1
×
10-8
，优选小于5
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10-9
，更优选小于1
×
10-9
。
[0012]第三方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其包括的重链可变区(VH)选自SEQ ID NO:2、4、6、8，轻链可变区(VL)选自SEQ ID NO:1、 3、5、7。
[0013]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段具有以下重链可变区和轻链可变区的组合：
[0014]VH为SEQ ID NO:2，VL为SEQ ID NO:1；
[0015]VH为SEQ ID NO:4，VL为SEQ ID NO:3；
[0016]VH为SEQ ID NO:6，VL为SEQ ID NO:5；或
[0017]VH为SEQ ID NO:8，VL为SEQ ID NO:7。
[0018]第四方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其中所述抗体的6个CDRs区与本专利技术第三方面所述单抗或其片段的6个CDRs区具有100％的氨基酸序列同源性。
[0019]第五方面，本专利技术提供一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其中通过 Fortebio表位竞争结合实验检测，所述单抗或其片段与本专利技术第三方面所述单抗或其片段具有竞争关系。
[0020]进一步，本专利技术所述中和性单抗或其片段与本专利技术第三方面所述单抗或其片段具有相同的抗原表位。
[0021]第六方面，本专利技术提供一种组合物，其包含一种或多种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，所述单抗或其片段选自由第一方面～第五方面所述中和性单抗或其片段组成的组。
[0022]进一步，本专利技术所述组合物，还包含药学上可接受的载体，从而可以作为药物组合物使用，
[0023]优选本专利技术所述药物组合物为水剂、针剂、粉针剂。
[0024]第七方面，本专利技术提供抗体或其片段在制备治疗冠状病毒感染药物中的应用，其中所述抗体或其片段包含一种或多种本专利技术第一方面～第五方面所述中和性单抗或其片段组成的组。
[0025]进一步，本专利技术所述的应用，其中所述冠状病毒感染包括SARS-CoV-2、 SARS-CoV。
[0026]第八方面，本专利技术提供一种多核苷酸，其编码本专利技术第一方面～第五方面所述中和性单抗或其片段。
[0027]第九方面，本专利技术提供一种载体，其包含本专利技术第八方面所述的多核苷酸。
[0028]第十方面，本专利技术提供一种宿主细胞，其包含本专利技术第八方面所述的多核苷酸或本专利技术第九方面所述的载体。
[0029]第十一方面，本专利技术提供一种制备SARS-CoV-2中和性单抗或其片段的方法，其包括以下步骤：
[0030](1)在适合表达重组SARS-CoV-2中和性单抗或其片段的条件下培养本专利技术第十方面所述宿主细胞；
[0031](2)从细胞培养物中分离纯化SARS-CoV-2中和性单抗或其片段。
[0032]为更好理解本专利技术，首先定义一些术语。其他定义则贯穿具体实施方式部分而列出。
[0033]术语“冠状病毒”是指套式病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科 (Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)的成员。本专利技术所述冠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段在不高于10μg/mL浓度时，对滴度为102CCID50的SARS-CoV-2的中和率不低于90％。2.如权利要求1所述的SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段能中和或阻断SARS-CoV-2对Vero-E6细胞的侵袭和/或感染。3.如权利要求2所述的SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段能够通过阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII的结合而发挥中和活性，其中阻断SARS-CoV-2与宿主细胞受体ACEII结合的IC50小于30nM，例如小于25nM，优选小于20nM，更优选小于15nM。4.如权利要求1-3任一所述SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段能与SARS-CoV-2的S蛋白特异性结合，而与MERS-CoV的S蛋白无特异性结合。5.如权利要求4所述SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段与SARS-CoV的S蛋白有交叉结合反应。6.一种SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于在同等条件下，所述单抗或其片段对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力，高于人ACE2对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力。7.如权利要求6所述SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段对SARS-CoV-2S蛋白的亲和力常数KD值小于1
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10-8
，优选小于5
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10-9
，更优选小于1
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10-9
。8.如权利要求1-7任一所述SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于包括的重链可变区(VH)选自SEQ ID NO:2、4、6、8，轻链可变区(VL)选自SEQ ID NO:1、3、5、7。9.如权利要求8所述SARS-CoV-2中和性单抗或其片段，其特征在于所述单抗或其片段具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：管轶，桂勋，郑作宜，王双，管静，王荣娟，陈佩雯，焦莎莎，李利峰，张锦超，朱华晨，刘大涛，
申请(专利权)人：迈威上海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：