RBV的蛋白结合分子及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种成本低、产能高且可以特异性地预防或治疗RBV感染相关疾病的蛋白分子，弥补或者取代市场上抗狂犬病免疫球蛋白产能不足，供不应求的状态。利用噬菌体展示库技术筛选得到的具有高特异性、高亲和力和高稳定性的针对狂犬病毒的蛋白结合分子。所述蛋白结合分子针对RBV的G蛋白，所述RBV蛋白结合分子为包含一免疫球蛋白单一可变结构域的抗体，与现有技术的氨基酸序列和抗体相比，具有更好的针对RBV病毒的中和抑制功能。对RBV病毒的中和抑制功能。对RBV病毒的中和抑制功能。

【技术实现步骤摘要】
RBV的蛋白结合分子及其用途


[0001]本专利技术涉及抗体
，更具体地说，它涉及RBV的蛋白结合分子及其用途。

技术介绍

[0002]狂犬病毒(简称“RBV”)属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)。外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA。是引起狂犬病的病原体，狂犬病毒具有两种主要抗原：一种是病毒外膜上的糖蛋白抗原，能与乙酰胆碱受体结合使病毒具有神经毒性，并使体内产生中和抗体及血凝抑制抗体，中和抗体具有保护作用；另一种为内层的核蛋白抗原，可使体内产生补体结合抗体和沉淀素，无保护作用。狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患的传染病。
[0003]RBV含有5种主要蛋白(L、N、G、M1和M2)和2种微小蛋白(P40和P43)。L蛋白呈现转录作用；N蛋白是组成病毒粒子的主要核蛋白是诱导狂犬病细胞免疫的主要成分，常用于狂犬病病毒的诊断、分类和流行病学研究；G蛋白是构成病毒表面纤突的糖蛋白，具有凝集红细胞的特性是狂犬病病毒与细胞受体结合的结构，在狂犬病病毒致病与免疫中起着关键作用；M1蛋白为特异性抗原，并与M2构成细胞表面抗原。针对G蛋白的抗体可以抑制其介导的感染周期的起始阶段并中和病毒的感染性从而保护人体免受RBV感染。
[0004]RBV进入人体，沿周围传入神经而到达中枢神经系统，因此头、颈部、上肢等处咬伤和创口面积大而深者发病机会多。RBV主要存在于患病动物的延脑、大脑皮层、小脑和脊髓中。唾液腺和唾液中也常含有大量病毒，人被患狂犬病的动物咬伤、抓伤或经粘膜感染均可引起狂犬病，在特定条件下也可以通过呼吸道气溶胶传染。
[0005]目前世界范围内才采用注射狂犬疫苗或抗狂犬病免疫球蛋白可用于预防RBV感染引起的相关疾病，只有印度2016年上市了一个名为Rmab治疗狂犬病的单抗，这类抗体具有中和效果好、安全性高、成本低、可大量生产优点，但在临床上效果并不是特好。由于抗狂犬病免疫球蛋白产能不足，且价格昂贵，国内持续处于供不应求状态，因而发展一种成本低、产能高且可以特异性地预防或治疗RBV感染相关疾病的抗体药物是当务之急。
[0006]单域抗体(single domain antibody，sdAb)，又称纳米抗体(nanobody)，仅有一个重链可变区结构域(VHH)。该结构域最初发现于骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出的一种重链抗体(heavy chain antibody，hcAb)，通过基因手段，扩增出其中的VHH片段。VHH是目前己知的可结合目标抗原的最小单位。单域抗体具有结构简单，亲和力及稳定性高，组织渗透力强和免疫原性低等一系列优点，是抗体药物领域里的最新技术。目前，应用单域抗体技术来解决病毒感染类疾病已成为国内外科学家的共识。

技术实现思路

[0007]专利技术一种成本低、产能高且可以特异性地预防或治疗RBV感染相关疾病的蛋白分子，弥补或者取代市场上抗狂犬病免疫球蛋白产能不足，供不应求的状态。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0009]在一个方面，本专利技术提供了RBV的蛋白结合分子，其包括三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1选自SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16、19，CDR2选自SEQ ID NO：2、5、8、11、14、17、20，CDR3选自SEQ ID NO：3、6、9、12、15、18、21。
[0010]在一些实施方案中，所述RBV的蛋白结合分子包括：
[0011]1)如SEQ ID NO：1所示的CDR1、如SEQ ID NO：2所示的CDR2、如SEQ ID NO：3所示的CDR3；或者，
[0012]2)如SEQ ID NO：4所示的CDR1、如SEQ ID NO：5所示的CDR2、如SEQ ID NO：6所示的CDR3；或者，
[0013]3)如SEQ ID NO：7所示的CDR1、如SEQ ID NO：8所示的CDR2、如SEQ ID NO：9所示的CDR3；或者，
[0014]4)如SEQ ID NO：10所示的CDR1、如SEQ ID NO：11所示的CDR2、如SEQ ID NO：12所示的CDR3；或者，
[0015]5)如SEQ ID NO：13所示的CDR1、如SEQ ID NO：14所示的CDR2、如SEQ ID NO：15所示的CDR3；或者，
[0016]6)如SEQ ID NO：16所示的CDR1、如SEQ ID NO：17所示的CDR2、如SEQ ID NO：18所示的CDR3；或者，
[0017]7)如SEQ ID NO：19所示的CDR1、如SEQ ID NO：20所示的CDR2、如SEQ ID NO：21所示的CDR3。
[0018]在一些实施方案中，所述RBV的蛋白结合分子包括四个框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中FR1选自SEQ ID NO：22、26、30、34、38、42、46，FR2选自SEQ ID NO：23、27、31、35、39、43、47，FR3选自SEQ ID NO：24、28、32、36、40、44、48，FR4选自SEQ ID NO：25、29、33、37、41、45、49。
[0019]在一些实施方案中，所述RBV的蛋白结合分子包括：
[0020]1)如SEQ ID NO：22所示的FR1、如SEQ ID NO：23所示的FR2、如SEQ ID NO：24所示的FR3、如SEQ ID NO：25所示的FR4；或者、
[0021]2)如SEQ ID NO：26所示的FR1、如SEQ ID NO：27所示的FR2、如SEQ ID NO：28所示的FR3、如SEQ ID NO：29所示的FR4；或者、
[0022]3)如SEQ ID NO：30所示的FR1、如SEQ ID NO：31所示的FR2、如SEQ ID NO：32所示的FR3、如SEQ ID NO：33所示的FR4；或者、
[0023]4)如SEQ ID NO：34所示的FR1、如SEQ ID NO：35所示的FR2、如SEQ ID NO：36所示的FR3、如SEQ ID NO：37所示的FR4；或者、
[0024]5)如SEQ ID NO：38所示的FR1、如SEQ ID NO：39所示的FR2、如SEQ ID NO：40所示的FR3、如SEQ ID NO：41所示的FR4；或者、
[0025]6)如SEQ ID NO：42所示的FR1、如SEQ ID NO：43所示的FR2、如SEQ ID NO：44所示的FR3、如SEQ ID NO：45所示的FR4；或者、
[0026]7)如SEQ ID NO：46所示的FR1、如SEQ ID NO：47所示的FR2、如SEQ ID NO：48所示的FR3、如SEQ ID NO：49所示的FR4。
[0027]在一些实施方案中，所述RBV的蛋白结合分子与选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.RBV的蛋白结合分子，其包括三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1选自SEQ ID NO：1、4、7、10、13、16、19，CDR2选自SEQ ID NO：2、5、8、11、14、17、20，CDR3选自SEQ ID NO：3、6、9、12、15、18、21。2.权利要求1所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子包括：1)如SEQ ID NO：1所示的CDR1、如SEQ ID NO：2所示的CDR2、如SEQ ID NO：3所示的CDR3；或者，2)如SEQ ID NO：4所示的CDR1、如SEQ ID NO：5所示的CDR2、如SEQ ID NO：6所示的CDR3；或者，3)如SEQ ID NO：7所示的CDR1、如SEQ ID NO：8所示的CDR2、如SEQ ID NO：9所示的CDR3；或者，4)如SEQ ID NO：10所示的CDR1、如SEQ ID NO：11所示的CDR2、如SEQ ID NO：12所示的CDR3；或者，5)如SEQ ID NO：13所示的CDR1、如SEQ ID NO：14所示的CDR2、如SEQ ID NO：15所示的CDR3；或者，6)如SEQ ID NO：16所示的CDR1、如SEQ ID NO：17所示的CDR2、如SEQ ID NO：18所示的CDR3；或者，7)如SEQ ID NO：19所示的CDR1、如SEQ ID NO：20所示的CDR2、如SEQ ID NO：21所示的CDR3。3.权利要求1～2中任一项所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子包括四个框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中FR1选自SEQ ID NO：22、26、30、34、38、42、46，FR2选自SEQ ID NO：23、27、31、35、39、43、47，FR3选自SEQ ID NO：24、28、32、36、40、44、48，FR4选自SEQ ID NO：25、29、33、37、41、45、49。4.权利要求3所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子包括：1)如SEQ ID NO：22所示的FR1、如SEQ ID NO：23所示的FR2、如SEQ ID NO：24所示的FR3、如SEQ ID NO：25所示的FR4；或者、2)如SEQ ID NO：26所示的FR1、如SEQ ID NO：27所示的FR2、如SEQ ID NO：28所示的FR3、如SEQ ID NO：29所示的FR4；或者、3)如SEQ ID NO：30所示的FR1、如SEQ ID NO：31所示的FR2、如SEQ ID NO：32所示的FR3、如SEQ ID NO：33所示的FR4；或者、4)如SEQ ID NO：34所示的FR1、如SEQ ID NO：35所示的FR2、如SEQ ID NO：36所示的FR3、如SEQ ID NO：37所示的FR4；或者、5)如SEQ ID NO：38所示的FR1、如SEQ ID NO：39所示的FR2、如SEQ ID NO：40所示的FR3、如SEQ ID NO：41所示的FR4；或者、6)如SEQ ID NO：42所示的FR1、如SEQ ID NO：43所示的FR2、如SEQ ID NO：44所示的FR3、如SEQ ID NO：45所示的FR4；或者、7)如SEQ ID NO：46所示的FR1、如SEQ ID NO：47所示的FR2、如SEQ ID NO：48所示的FR3、如SEQ ID NO：49所示的FR4。5.权利要求1～4中任一项所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子与选自SEQ ID NO：50～56的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％、99％、100％序列同一性，且能够特异性结合G蛋白。6.权利要求1～5中任一项所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子为人源化抗体。7.权利要求6所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子为人源化抗体，其包括三个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1选自SEQ ID NO：64、67、70、73、76、79，CDR2选自SEQ ID NO：65、68、71、74、77、80，CDR3选自SEQ ID NO：66、69、72、75、78、81。8.权利要求7所述的RBV的蛋白结合分子，其中所述RBV的蛋白结合分子为人源化抗体，其包括：1)如SEQ ID NO：64所示的CDR1、如SEQ ID NO：65所示的CDR2、如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：高光，崔院平，
申请(专利权)人：高光，
类型：发明
国别省市：