一种CD276基因人源化的非人动物及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种人源化CD276蛋白、一种人源化CD276基因、一种CD276基因人源化的非人动物的构建方法，CD276基因人源化的非人动物，多基因修饰的非人动物的构建方法，以及获得的CD276基因人源化的非人动物或多基因修饰的非人动物，及其在靶向人CD276通路抗体的筛选、药效评价中的应用。效评价中的应用。效评价中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种CD276基因人源化的非人动物及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及人源化改造的转基因非人动物，尤其是人源化改造的转基因啮齿类动物，例如转基因小鼠。更具体的，涉及包含人CD276基因序列的转基因小鼠，其构建方法和用途。

技术介绍

[0002]CD276，又被称为B7
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H3、B7RP
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2，为I型跨膜蛋白，属于B7家族。该家族成员还包括：B7.1、B7.2、ICOS
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L、PD
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L1、PD
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L2、B7
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H4，以及随后发现的B7
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H6、VISTA、B7
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H7。B7家族成员在抗原递呈细胞均有表达，包括树突状细胞、巨噬细胞以及B细胞；与B7.1仅局限表达于淋巴细胞不同，CD276在多种正常的组织也有表达，表达量较低；但其表达受多种细胞因子调控，例如，IFN
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γ可以上调CD276的表达，IL4会降低其表达。B7家族成员与不同的受体结合可以起到共刺激或抑制作用，如与B7
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CD28结合起到激活作用，而与B7
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CTLA4结合起到抑制作用，早期的研究认为CD276促进T细胞的正向调节，但后续的研究发现CD276在T细胞免疫中发挥共抑制作用，即CD276同时具有共刺激和共抑制的双重免疫作用。
[0003]随着研究深入，CD276被发现在多种肿瘤中大量表达，如：前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、胃癌等，促进肿瘤的生长、转移、耐药，与患者预后及疾病进展密切相关。有研究发现CD276分子有膜型和可溶性两种形式，可溶性CD276分子由基质金属蛋白酶从活化的T细胞、单核细胞、DC细胞表面剪切形成，在正常的人外周血中可以检测到。可溶性CD276可以激活NF
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κB信号通路增强胰腺癌细胞的侵袭和转移能力；此外，非小细胞肺癌患者胸腔积液中的可溶性CD276含量明显高于健康人水平，可作为相关肿瘤诊断和预后判断的指标。目前，至少有三种CD276单克隆抗体已经进入到临床阶段，omburtamab单抗在实体瘤临床试验中表现出较好的安全性和有效性，有效地延长了患者的生存期，已经进入临床3期；Enoblituzumab进入临床2期，1期临床显示没有剂量相关毒性，以及免疫相关副作用，对抑制肿瘤有效；MGC
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018是一种ADC(antibody
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drug conjugate)药物，也已经进入临床2期。
[0004]实验动物疾病模型对于研究人类疾病发生的病因、发病机制、开发防治技术和开发药物是不可缺少的研究工具。但由于动物与人类的生理结构和代谢系统本身的差异，传统的动物模型并不能很好的反映人体的真实状况，在动物体内建立更接近人类的生理特征的疾病模型是生物医药行业的迫切需求。目前，尚未有CD276基因人源化非人动物的报道。

技术实现思路

[0005]实施方案1，一种人源化CD276蛋白，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白的全部或部分。
[0006]实施方案2，如实施方案1所述的人源化CD276蛋白，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分，优选的，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白胞外区的全部或部分，其中，所述的人CD276蛋白胞外区的部分包含至少200、250、300或350个氨基酸，优选的，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276基因
的2号至10号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分，进一步优选的，包含3号至6号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分。
[0007]实施方案3，如实施方案1或2所述的人源化CD276蛋白，所述的人源化CD276蛋白包括选自下列组中的一种：
[0008]a)SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分；
[0009]b)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列全部或部分的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；
[0010]c)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；
[0011]d)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列的全部或部分，包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列；
[0012]任选地，所述SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的部分为SEQ ID NO：4的第34
‑
417位、SEQ ID NO：4第32
‑
456位、或者SEQ ID NO：4的第30
‑
459位。
[0013]实施方案4，一种人源化CD276基因，所述的人源化CD276基因包含人CD276基因的部分，
[0014]任选地，所述的人源化CD276基因编码实施方案1
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3任一所述的人源化CD276蛋白。
[0015]实施方案5，如实施方案4所述的人源化CD276基因，所述的人源化CD276基因包含人CD276基因的1号至10号外显子的全部或部分；进一步优选的，包含3号至7号外显子的全部或部分；再进一步优选的，包含3号外显子至6号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分。
[0016]实施方案6，如实施方案4或5所述的人源化CD276基因，所述的人源化CD276基因包含下列组中的一种：
[0017](A)为SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的全部或部分；
[0018](B)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；
[0019](C)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或
[0020](D)具有SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。
[0021]实施方案7，如实施方案4
‑
6任一所述的人源化CD276基因，所述的人源化CD276基因转录的mRNA选自下列组中的一种：
[0022](i)为SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的全部或部分；
[0023](ii)与SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；
[0024](iii)与SEQ ID NO：1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化CD276蛋白，其特征在于，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白的全部或部分。2.根据权利要求1所述的人源化CD276蛋白，其特征在于，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白的信号肽、跨膜区、胞质区和/或胞外区的全部或部分，优选的，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276蛋白胞外区的全部或部分，其中，所述的人CD276蛋白胞外区的部分包含至少200、250、300或350个氨基酸，优选的，所述的人源化CD276蛋白包含人CD276基因的2号至10号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分，进一步优选的，包含3号至6号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分，优选的，所述的人源化CD276蛋白包括选自下列组中的一种：a)SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分；b)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；c)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸；d)与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的全部或部分包括取代、缺失和/或插入一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列；任选地，所述SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的部分为SEQ ID NO：4的第34
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417位、SEQ ID NO：4第32
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456位、或者SEQ ID NO：4的第30
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459位。3.一种人源化CD276基因，其特征在于，所述的人源化CD276基因包含人CD276基因的部分，任选地，所述的人源化CD276基因编码权利要求1
‑
2任一所述的人源化CD276蛋白。4.根据权利要求3所述的人源化CD276基因，其特征在于，所述的人源化CD276基因包含人CD276基因的1号至10号外显子的全部或部分；进一步优选的，包含3号至7号外显子的全部或部分；再进一步优选的，包含3号外显子至6号外显子编码的氨基酸序列的全部或部分，优选的，所述的人源化CD276基因包含下列组中的一种：(A)为SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的全部或部分；(B)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；(C)与SEQ ID NO：5所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或(D)具有SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列，优选的，所述的人源化CD276基因转录的mRNA选自下列组中的一种：(i)为SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的全部或部分；(ii)与SEQ ID NO：13所示核苷酸序列的同一性至少为60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％；(iii)与SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸；或
(iv)与SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列，优选的，所述的人源化CD276基因包含编码人CD276蛋白的cDNA，优选的，所述的人源化CD276基因还包含人CD276非编码区，任选地，所述的人源化CD276基因中人的CD276是纯合或者杂合。5.一种CD276靶向载体，其特征在于，所述的CD276靶向载体包含供体DNA序列，所述的供体DNA序列包含人CD276基因的部分，优选的，所述的供体DNA序列包含人CD276基因的2号至10号外显子的全部或部分；再进一步优选的，包含3号外显子至6号外显子的全部或部分，更进一步优选的，供体DNA序列包含与SEQ ID NO：5具有至少60％、65％、70％、80％、85％、90％、95％或至少99％同一性的核苷酸序列、包含SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5所述核苷酸序列一致。6.根据权利要求5所述的靶向载体，其特征在于，所述的供体DNA序列包含编码人CD276蛋白的cDNA的至少部分，优选的，所述的靶向载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈月雷，白阳，姚佳维，郭雅南，赵磊，
申请(专利权)人：百奥赛图北京医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：