对CD44特异性的抗体制造技术

对CD44v7/8(又称为CD44变体7/8)具有结合特异性的抗体以及包含该抗体的抗体

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对CD44特异性的抗体
[0001]专利技术背景
[0002]CD44，也被称为HCAM(归巢细胞粘附分子)、Pgp
‑
1(吞噬糖蛋白
‑
1)、Hermes抗原、淋巴细胞归巢受体、ECM
‑
III或HUTCH
‑
1，是一种细胞表面糖蛋白，其主要在细胞粘附和细胞间相互作用中发挥功能。已知CD44的若干剪接变体，包括CD44 v7/8，其是一种包含外显子7和外显子8的变体。CD44是透明质酸的蛋白受体，并且已进一步显示与骨桥蛋白、胶原蛋白、基质金属蛋白酶和其它类似配体结合或以其它方式相互作用。
[0003]专利技术概述
[0004]本公开至少部分地基于对CD44 v7/8剪接变体具有高结合亲和力和特异性的抗体的开发。此类抗体示出了针对表达CD44 v7/8的细胞(CD44
+
细胞)的抑制活性。
[0005]因此，本公开的一个方面的特征在于一种结合至CD44 v7/8的分离的抗体(抗CD44 v7/8抗体)，其中该抗体特异性结合人CD44 v7/8的表位，其中该表位包含QAGRRMDMDSSHSIT(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD44 v7/8抗体与示例性抗体HIS029结合相同的人CD44 v7/8表位，所述示例性抗体HIS029的结构特征提供在本文中。
[0006]在一些实施方案中，抗CD44 v7/8抗体不结合肽PISHPMGRGHQAGRR(SEQ ID NO:12)或肽SHSITLQPTANPNTG(SEQ ID NO:14)。在一些实施方案中，抗CD44 v7/8抗体可以包含重链可变区(V
H
)，其中重链互补决定区1(HC CDR 1)、重链互补决定区2(HC CDR 2)和重链互补决定区3(HC CDR 3)共同地与抗体HIS029的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3至少85％(例如，至少90％、至少95％、至少98％或更多)相同。在一些例子中，该抗体可以包含V
H
，其包括与抗体HIS029相同的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3。在其它实施方案中，本文描述的抗CD44 v7/8抗体可以包含V
H
，其包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，相对于抗体HIS029的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，它们共同地含有多达8个氨基酸残基变化(7、6、5、4、3、2或1个突变)。
[0007]替代地或另外，本文描述的抗CD44 v7/8抗体可以包含轻链可变区(V
L
)，其中轻链互补决定区1(LC CDR 1)、轻链互补决定区2(LC CDR 2)和轻链互补决定区3(LC CDR 3)共同地与抗体HIS029的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3至少85％(例如，至少90％、至少95％、至少98％或更多)相同。在一些例子中，该抗体可以包含与抗体HIS029相同的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。在其它实施方案中，本文描述的抗CD44 v7/8抗体可以包含LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，相对于参考抗体的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，它们共同地含有多达8个氨基酸残基变化(7、6、5、4、3、2或1个突变)。
[0008]在一些实例中，本文描述的抗CD44 v7/8抗体包含与抗体HIS029相同的重链和/或轻链CDR。在一些例子中，此种抗CD44 v7/8抗体可以包含与抗体HIS029相同的V
H
和/或V
L
。
[0009]本文描述的任何抗CD44 v7/8抗体可以特异性结合至人CD44 v7/8。该抗体可以是人抗体或人源化抗体。在一些实例中，其可以是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗CD44 v7/8抗体是人源化抗体，其包含如SEQ ID NO:10所示的V
H
和/或如SEQ ID NO:11所示的V
L
。
[0010]在一些实施方案中，抗CD44 v7/8抗体可以是全长抗体(例如，IgG分子)或其抗原结合片段。替代地，其可以是单链抗体。
[0011]在另一方面，本公开的特征在于核酸或核酸组(例如，两种核酸)和载体或载体组
(例如，两种载体)，该核酸或核酸组共同地编码本文描述的任何抗CD44 v7/8抗体，并且该载体或载体组包含编码抗CD44 v7/8抗体的核酸。在一些例子中，该载体或载体组可以是表达载体。本文还提供了包含该核酸或载体的宿主细胞。进一步地，本公开提供了用于制备本文描述的抗CD44 v7/8抗体的方法，该方法包含：培养包含载体或载体组的宿主细胞，该载体或载体组包含该抗体的编码序列，其中该编码序列可操作地连接至合适的启动子；以及收获因此例如从该宿主细胞或培养基产生的抗体。
[0012]此外，本公开提供了抗体
‑
药物缀合物(ADC)，其包含：本文描述的任何抗CD44 v7/8抗体；以及至少一种治疗剂，其共价缀合至该抗体。在一些实例中，该治疗剂可以是细胞毒性剂，例如，一甲基瑞奥西汀E(monomethyl auristatin E)。
[0013]在一些实施方案中，该抗体和该治疗剂可以通过接头缀合。在一些实例中，该接头可以是可切割的接头，例如，蛋白酶敏感性接头、pH敏感性接头或谷胱甘肽敏感性接头。在一些例子中，该接头可以是蛋白酶敏感性接头，其可以包含具有2
‑
5个氨基酸的肽。该肽可以包含天然存在的氨基酸残基、非天然存在的氨基酸残基或其组合。在一个实例中，该肽可以包含缬氨酸
‑
瓜氨酸。在其它实例中，该接头可以是不可切割的接头。此种不可切割的接头可以包含任选取代的烷烃或硫醚。
[0014]在一些实施方案中，该接头可以包含功能基团，其形成该抗体与该接头之间的共价键。示例性功能基团包括但不限于马来酰亚胺基团、碘乙酰胺基团、乙烯基砜基团、丙烯酸酯基团、丙烯酰胺基团、丙烯腈基团和甲基丙烯酸酯基团。在一个实例中，该接头可以进一步是式I的分子间隔物：
[0015][0016]其中
[0017]R1为任选取代的C1
‑
6烷基、任选取代的苯基、任选取代的C2
‑
6亚烷基、任选取代的C2
‑
6亚烯基、任选取代的C2
‑
6亚炔基或任选取代的三唑；并且X是O、S或N。
[0018]进一步地，本公开提供了嵌合抗原受体(CAR)，其可以包含：(i)细胞外结构域，其包含结合CD44 v7/8的抗原结合片段；(ii)跨膜结构域；以及(iii)一个或多个细胞内刺激结构域。该抗原结合片段可以特异性结合人CD44 v7/8的表位，其中该表位包含QAGRRMDMDSSHSIT(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗原结合片段不结合肽PISHPMGRGHQAGRR(SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.结合至人CD44的分离的抗体，其中所述抗体特异性结合人CD44 v7/8的表位，其中所述表位包含QAGRRMDMDSSHSIT(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体不结合肽PISHPMGRGHQAGRR(SEQ ID NO:12)或肽SHSITLQPTANPNTG(SEQ ID NO:14)。3.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变区(V
H
)，其包含重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)，以及(b)轻链可变区(V
L
)，其包含轻链CDR1(LC CDR1)、轻链CDR2(LC CDR2)和轻链CDR3(LC CDR3)，其中所述HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3共同地与HIS029的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3至少85％相同；和/或其中所述LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3共同地与HIS029的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3至少85％相同。4.根据权利要求3所述的分离的抗体，其中所述V
H
包含与HIS029相同的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3；和/或其中所述V
L
包含与HIS029相同的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3。5.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)重链可变区(V
H
)，其包含重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)，以及(b)轻链可变区(V
L
)，其包含轻链CDR1(LC CDR1)、轻链CDR2(LC CDR2)和轻链CDR3(LC CDR3)，其中所述HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3相对于参考抗体的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3，共同地含有多达8个氨基酸残基变化；和/或其中所述V
L
包含所述LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，其相对于所述参考抗体的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3，共同地含有多达8个氨基酸残基变化。6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体的所述V
H
与HIS029的V
H
至少85％相同；和/或其中所述分离的抗体的所述V
L
与HIS029的V
L
至少85％相同。7.根据权利要求6所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包含与HIS029相同的V
H
和/或与HIS029相同的V
L
。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述抗体是全长抗体，其是IgG分子。10.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单链抗体(scFv)。11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。12.根据权利要求11所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体，其包含如SEQ ID NO:10所示的V
H
和/或如SEQ ID NO:11所示的V
L
。13.核酸或核酸组，其共同地编码根据权利要求1至12中任一项所述的抗CD44 v7/8抗体。14.载体或载体组，其包含根据权利要求13所述的核酸。
15.根据权利要求14所述的载体或载体组，其中所述载体是表达载体。16.宿主细胞，其包含根据权利要求14或15所述的载体或载体组。17.抗体
‑
药物缀合物(ADC)，其包含：i.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体；以及ii.至少一种治疗剂；其中所述抗体共价缀合至所述至少一种治疗剂。18.根据权利要求17所述的抗体
‑
药物缀合物，其中所述抗体和所述治疗剂通过接头缀合。19.根据权利要求18所述的抗体
‑
药物缀合物，其中所述接头是可切割或不可切割的接头。20.根据权利要求19所述的抗体
‑
药物缀合物，其中所述接头是不可切割的接头，其包含蛋白酶敏感性接头、pH敏感性接头或谷胱甘肽敏感性接头。21.根据权利要求20所述的抗体
‑
药物缀合物，其中所述可切割的接头是蛋白酶敏...

【专利技术属性】
技术研发人员：张少飞，侯冰，成广存，刘淑惠，孟逊，
申请(专利权)人：普众发现医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：