本发明专利技术提供了一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，试剂R1：MES、PEG6000、BSA、NaCl、NaN3、EDTA；试剂R2：MES、PEG6000、BSA、NaCl、偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球、TX
【技术实现步骤摘要】
一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法
[0001]本专利技术涉及免疫学测定分析领域，尤其涉及一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法。
技术介绍
[0002]1994年，Friedman实验室首次定位克隆小鼠ob基因，并由其DNA顺序合成了ob蛋白，后者被命名为瘦素(leptin)。其中，ob基因又称为瘦素基因，瘦素基因缺陷的小鼠及瘦素受体基因突变的小鼠均表现为病态肥胖且丧失生殖能力。由于瘦素对其基因突变的小鼠及非基因突变而因饮食过量引起的肥胖小鼠的显著减肥效应，研究肥胖的学者及众多肥胖症患者曾对此寄以厚望，并由此激发起以瘦素机制及临床应用为中心的对肥胖研究的热潮。
[0003]瘦素(LEP)是一种由脂肪组织分泌的蛋白质类激素。人类之前普遍认为瘦素进入血液循环后会参与糖、脂肪及能量代谢的调节，促使机体减少摄食，增加能量释放，抑制脂肪细胞的合成，进而使体重减轻。
[0004]现在对瘦素作用的认识早已超越肥胖与消瘦的范畴。诚然，一方面瘦素带有体脂即机体营养状态的信号，作用于瘦素受体，对代谢起调节作用。另一方面，瘦素受体的广泛分布，提示瘦素又可能是一种多靶器官，多功能的激素。现发现，瘦素至少与下列功能和现象有关：调节糖、脂代谢，抑制胰岛素的分泌，对生殖功能的促进作用，表现为青春期及妊娠期瘦素浓度升高，有报道与高血压有关，对骨质疏松起保护作用，刺激正常髓细胞系和红细胞系的发育，在某些白血病血细胞中有瘦素受体的表达，慢性粒细胞白血病急性发作时瘦素受体呈高表达状态等。
[0005]其中，瘦素水平上升，产生负性心肌肌力作用血浆中，瘦素的水平通常与体重，尤其是身体内脂肪组织的变化呈正相关。瘦素水平的下降，也可直接促使瘦素信号传导的缺失，从而造成生理水平瘦素对心脏功能的调节缺失。因此，检测LEP对于了解病情有非常重要的意义。
[0006]胶乳免疫比浊法是近年来出现的较为稳定准确的检测方法，其操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量，可完全满足临床检测要求。
[0007]据此，目前急需一种基于胶乳免疫比浊法的瘦素检测方法。
技术实现思路
[0008]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法，利用该试剂盒进行瘦素检测，不仅操作简单、耗时短、自动化程度高，还具备成本低廉、特异性强、灵敏度高的优点。
[0009]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0010]一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组
分，包括的成分及相应含量为：
[0011]试剂R1：
[0012][0013]试剂R2：
[0014][0015][0016]作为本专利技术的优选方式之一，包括的成分及相应含量具体为：
[0017]试剂R1：
[0018][0019]试剂R2：
[0020][0021]作为本专利技术的优选方式之一，还包括瘦素校准品，包括的成分及相应含量为：
[0022][0023]作为本专利技术的优选方式之一，所述瘦素校准品包括的成分及相应含量具体为：
[0024][0025]作为本专利技术的优选方式之一，所述偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球的获取方法如下：
[0026]①
准备50mmol/L、pH 6.0的清洗缓冲液，并用相应清洗缓冲液悬浮聚苯乙烯胶乳
微球，使其浓度为1％；
[0027]②
每mL微球悬液加入20mg的EDC，室温孵育20min，然后再次加入20mg/mL的EDC，并继续室温孵育20min；
[0028]③
水浴摇床活化30min，离心，去上清；
[0029]④
将山羊抗人瘦素多克隆抗体加入到搅拌中的微球悬液中，并持续搅拌，接着于室温下孵育1h；
[0030]⑤
每5mL微球悬液中加入封闭液2.5mL，封闭2h；
[0031]⑥
离心或超滤，用胶贮缓冲液悬浮，重复两次，移除未结合的抗体和封闭液。
[0032]一种上述瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0033](1)制备偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球
[0034]①
准备50mmol/L、pH 6.0的清洗缓冲液，并用相应清洗缓冲液悬浮聚苯乙烯胶乳微球，使其浓度为1％；
[0035]②
每mL微球悬液加入20mg的EDC，室温孵育20min，然后再次加入20mg/mL的EDC，并继续室温孵育20min；
[0036]③
水浴摇床活化30min，离心，去上清；
[0037]④
将山羊抗人瘦素多克隆抗体加入到搅拌中的微球悬液中，并持续搅拌，接着于室温下孵育1h；
[0038]⑤
每5mL微球悬液中加入封闭液2.5mL，封闭2h；
[0039]⑥
离心或超滤，用胶贮缓冲液悬浮，重复两次，移除未结合的抗体和封闭液；
[0040](2)配制试剂R1
[0041]按照试剂R1的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R1；
[0042](3)配制试剂R2
[0043]按照试剂R2的组分含量，将步骤(1)制得的偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球以及余下的其他组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R2；
[0044](4)配制瘦素校准品
[0045]瘦素校准品包括的成分及相应含量如下：
[0046][0047][0048]按照上述瘦素校准品的组分含量，将瘦素抗原以及余下的其他组分于同一容器中
混合，混合均匀后，制得瘦素校准品。
[0049]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，清洗缓冲液采用MES缓冲液。
[0050]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，封闭液采用10％的BSA溶液。
[0051]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，胶贮缓冲液包括的成分及相应含量为：
[0052][0053]一种上述瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒的使用方法，包括如下具体步骤：
[0054](1)吸取15μL样本，加入150μL试剂R1，37℃孵育3
‑
5min；
[0055](2)加入50μL试剂R2，置37℃孵育；
[0056](3)孵育1min读取吸光值A1；孵育5min，读取吸光值A2；
[0057](4)按照
△
A＝A2
‑
A1来计算ΔA，并根据ΔA测算样本中LEP含量。
[0058]作为本专利技术的优选方式之一，所述山羊抗人瘦素多克隆抗体与瘦素抗原均可直接购买获得。
[0059]本专利技术相比现有技术的优点在于：本专利技术试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法，可在全自动生化分本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：其溶剂为纯化水；试剂R2：其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括的成分及相应含量具体为：相应含量具体为：其溶剂为纯化水；
其溶剂为纯化水。3.根据权利要求1所述的瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，其特征在于，还包括瘦素校准品，包括的成分及相应含量为：其溶剂为纯化水。4.根据权利要求3所述的瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述瘦素校准品包括的成分及相应含量具体为：品包括的成分及相应含量具体为：其溶剂为纯化水。
5.根据权利要求1
‑
4任一所述的瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球的获取方法如下：
①
准备50mmol/L、pH 6.0的清洗缓冲液，并用相应清洗缓冲液悬浮聚苯乙烯胶乳微球，使其浓度为1％；
②
每mL微球悬液加入20mg的EDC，室温孵育20min，然后再次加入20mg/mL的EDC，并继续室温孵育20min；
③
水浴摇床活化30min，离心，去上清；
④
将山羊抗人瘦素多克隆抗体加入到搅拌中的微球悬液中，并持续搅拌，接着于室温下孵育1h；
⑤
每5mL微球悬液中加入封闭液2.5mL，封闭2h；
⑥
离心或超滤，用胶贮缓冲液悬浮，重复两次，移除未结合的抗体和封闭液。6.一种如权利要求1
‑
5任一所述的瘦素胶乳增强比浊法检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备偶联山羊抗人瘦素多克隆抗体的胶乳微球
①
准备50mmol/L、pH 6.0的清洗缓冲液，并用相应清洗缓冲液悬浮聚苯乙烯胶乳微球，使其浓度为1％；
②
每mL...
【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，叶侃，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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