胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法技术

本发明专利技术提供了一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，所述试剂R1包括10～100mmol/L缓冲液、0.1～1g/L防腐剂；所述试剂R2包括10～100mmol/L缓冲液、1％w/v G17抗体微球。本发明专利技术还提供上述胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒的制备使用方法。本发明专利技术的优点在于：(1)本发明专利技术试剂盒使用体外检测血清中胃泌素含量，避免胃镜检测的复杂流程，定量检测确定萎缩性胃炎症状；并且，可用于全自动生化分析仪，方便且省时节约；同时，在试剂制作上也简单方便；(2)在高稳定性和高精密度情况下，相比同类产品，本发明专利技术具有更高的灵敏度和特异性。本发明专利技术具有更高的灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】
胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法


[0001]本专利技术涉及免疫学测定领域，尤其涉及一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法。

技术介绍

[0002]胃泌素是一种重要的胃肠道肽类激素，于1905年由英国学者Edkins首先发现并命名。胃泌素由位于胃窦及十二指肠近端黏膜的G细胞合成及分泌，成熟胃泌素是酰胺化的胃泌素，酰胺化胃泌素包括G17、G34、G14、G6、G52、G71，其中G17是胃窦中胃泌素的主要形式，为进餐后血液中胃泌素的主要形式。
[0003]胃癌患者血清G17的水平与病变部位、临床分期、病理组织分型相关。由于癌组织大量破坏泌酸腺体和迷走神经末梢，使胃酸分泌缺失，血清胃泌素水平反馈性升高。胃泌素与上消化道黏膜中的CCK
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2受体具有高度亲和力，结合后能够激活细胞增殖、抗凋亡、炎症反应等多种信号通路，诱导酸分泌以及促进肿瘤发生。当人体内胃泌素17处于低值状态时，通常提示患者的胃部存在一些高酸的状况。而当胃泌素17处于高值状态时，则提示患者的胃内部存在一些炎症，患者可能表现出一些高胃泌素血症的发病症状。这种情况可能跟幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡以及药物影响有关系。因此，血清胃泌素17能反应胃粘膜细胞功能状态，血清胃泌素17水平可作为萎缩性胃窦胃炎的血清标志物。
[0004]胃泌素17用胶乳增强免疫比浊法准确度高，根据吸光度的变化可以定量。但是G
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17在离体血液中很不稳定，采血之后就开始快速降解，理论上在2～8℃保存时间只有3h，这意味着，从采血到检测必须在3h内完成，而实际工作中很多医院无法做到3h以内检测，所以临床上会出现很多小于1pmol/L的无效结果。
[0005]据此，目前急需对现有的胃泌素17测定方法进行改进，以获得一种能够快速检测样本并获得相应准确结果的胃泌素17检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种能够快速检测样本并获得相应准确结果的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒及其制备使用方法。
[0007]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0008]一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，所述试剂R1包括10～100mmol/L缓冲液、0.1～1g/L防腐剂；所述试剂R2包括10～100mmol/L缓冲液、1％w/v G17抗体微球。
[0009]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液为Tris
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HCL缓冲液、PBS缓冲液、PB缓冲液和MES缓冲液中的一种或多种。
[0010]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1中的防腐剂为ProClin300、叠氮钠中的一种或两种。
[0011]作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2中G17抗体微球的制备方法为：取活化好
的羧基微球与G17抗体进行偶联，偶联后的羧基微球与G17抗体以共价键形式结合，并稳定地存在于所述缓冲液中。
[0012]作为本专利技术的优选方式之一，所述羧基微球采用EDC作为活化剂进行活化，活化时间15min。
[0013]作为本专利技术的优选方式之一，所述活化好的羧基微球与G17抗体分别以1:(5～6)的w/v比偶联混合，偶联时间2h。
[0014]一种上述胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0015](2)制备G17抗体微球
[0016]取活化好的羧基微球与G17抗体进行偶联，偶联后的羧基微球与G17抗体以共价键形式结合，构成G17抗体微球；其中，所述羧基微球采用EDC作为活化剂进行活化，活化时间15min；活化好的羧基微球与G17抗体分别以1:(5～6)的w/v比偶联混合，偶联时间2h；
[0017](2)配制试剂R1
[0018]按照试剂R1的组分含量，将缓冲液与防腐剂于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R1；
[0019](3)配制试剂R2
[0020]按照试剂R2的组分含量，将缓冲液与步骤(1)制得的G17抗体微球于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R2。
[0021]一种上述胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒的使用方法，包括如下具体步骤：
[0022](1)吸取10μL样本，加入150μL试剂R1，37℃孵育5min；
[0023](2)再加入50μL试剂R2进行混合，并使其充分反应；
[0024](3)l min后读取吸光值Al，3min后读取吸光值A2，计算ΔA；
[0025](4)根据吸光度变化值ΔA计算出样本中胃泌素17含量。
[0026]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中，采用全自动生化分析仪，于主波长505nm测定吸光值。
[0027]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，依据定标值，根据ΔA测算样本中胃泌素17含量；所述定标方法为：5点定标，采用全自动生化分析仪进行检测，设置校准品浓度分别为：0pmol/L、15pmol/L、30pmol/L、60pmol/L、120pmol/L。
[0028]本专利技术相比现有技术的优点在于：
[0029](1)本专利技术试剂盒使用体外检测血清中胃泌素含量，避免胃镜检测的复杂流程，定量检测确定萎缩性胃炎症状；并且，可用于全自动生化分析仪，方便且省时节约；同时，在试剂制作上也简单方便，适用于大规模生产；
[0030](2)本专利技术可在全自动生化分析仪上使用，成本低廉，且自动化高，节省检测时间；在高稳定性和高精密度情况下，相比同类产品，具有更高的灵敏度和特异性，提升了胃泌素17检测的应用价值。
具体实施方式
[0031]下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。
[0032]实施例1
[0033]本实施例的一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，试剂R1包括10mmol/L Tris
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HCL缓冲液、0.1g/L ProClin300；试剂R2包括10mmol/L Tris
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HCL缓冲液、1％w/v G17抗体微球。
[0034]具体地，在本实施例中，关于G17抗体微球的制备：取活化好的羧基微球与G17抗体进行偶联，偶联后的羧基微球与G17抗体以共价键形式结合，并稳定地存在于Tris
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HCL缓冲液中。
[0035]实施例2
[0036]本实施例的一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，试剂R1包括100mmol/L PBS缓冲液、1g/L叠氮钠；所述试剂R2包括100mmol/L PBS缓冲液、1％w/v G17抗体微球。
[0037]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；其中，所述试剂R1包括10～100mmol/L缓冲液、0.1～1g/L防腐剂；所述试剂R2包括10～100mmol/L缓冲液、1％w/v G17抗体微球。2.根据权利要求1所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液为Tris
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HCL缓冲液、PBS缓冲液、PB缓冲液和MES缓冲液中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂为ProClin300、叠氮钠中的一种或两种。4.根据权利要求1所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中G17抗体微球的制备方法为：取活化好的羧基微球与G17抗体进行偶联，偶联后的羧基微球与G17抗体以共价键形式结合，并稳定地存在于所述缓冲液中。5.根据权利要求4所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述羧基微球采用EDC作为活化剂进行活化，活化时间15min。6.根据权利要求4所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述活化好的羧基微球与G17抗体分别以1:(5～6)的w/v比偶联混合，偶联时间2h。7.一种如权利要求1～6任一所述的胃泌素17胶乳增强比浊法测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备G17抗体微球取活化好的羧基微球与G17抗体进...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，席瑞，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：