检测转人血清白蛋白基因工程水稻的引物、探针及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测转人血清白蛋白基因工程水稻的引物，引物如SE Q ID NO.1～SEQ ID NO.2所示；还公开了一种检测转人血清白蛋白基因工程水稻的探针，探针如SEQ ID NO.3所示；将该引物和探针组成试剂盒，用于检测转人血清白蛋白基因工程水稻，可以精准定量检测待测样品中转人血清白蛋白基因工程水稻的含量。测样品中转人血清白蛋白基因工程水稻的含量。测样品中转人血清白蛋白基因工程水稻的含量。

【技术实现步骤摘要】
NO.4～SEQ ID NO.5所述的引物和SEQ ID NO.6所述的探针：
[0016]PLD
‑
Forward:5
’‑
TGGTGAGCGTTTTGCAGTCT
‑3’
，如SEQ ID NO.4所示；
[0017]PLD
‑
Reverse:5
’‑
CTGATCCACTAGCAGGAGGTCC
‑3’
，如SEQ ID NO.5所示；
[0018]PLD
‑
Probe:5
’‑
HEX
‑
TGTTGTGCTGCCAATGTGGCCTG
‑
BHQ1
‑3’
，如SEQ ID NO.6所示；
[0019]其中，PLD
‑
Probe的5
’
端标记有HEX荧光基团，3
’
端标记有BHQ1淬灭基团
[0020]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术根据转人血清白蛋白基因工程水稻品系114
‑7‑
2的基因序列设计了引物和探针，引物和探针结合，可以特异性检测人血清白蛋白基因工程水稻品系，且灵敏度较高，还收集并采用了中华人民共和国国家标准GBT19495.4
‑
2018中公布的水稻内源性引物对和探针组成的PLD组合物。实验结果证明，利用两种组合物构成的试剂盒，基于双重微滴式数字PCR的技术，可定量检测待测水稻样品中转人血清白蛋白基因工程水稻的含量，且该方法准确性好、灵敏度高，完善了转基因产品阈值标识和安全管控体系。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0022]图1附图为转人血清白蛋白基因工程水稻组合物特异性检测阳性扩增结果图；
[0023]图2附图为转人血清白蛋白基因工程水稻组合物特异性检测阴性扩增结果图；
[0024]图3附图为转人血清白蛋白基因工程水稻组合物灵敏度检测结果图。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]实施例1：检测转人血清白蛋白基因工程水稻方法的建立
[0027]一、检测转人血清白蛋白基因工程水稻组合物的设计
[0028]1、根据转人血清白蛋白水稻品系114
‑7‑
2品系中的人血清白蛋白基因序列(专利号：200510019084.4)设计了针对检测转人血清白蛋白基因工程水稻的引物对和探针组成的HSA组合物，如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示；如表1所示；
[0029]表1
[0030][0031][0032]其特征在于:HSA探针的5
’
端标记有FAM荧光基团，3
’
端标记有BHQ1淬灭基团。
[0033]2、引物探针均可委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成，并采用UL
‑
TRAPAGE纯化方式。
[0034]二、检测转人血清白蛋白基因工程水稻引物探针特异性验证
[0035](一)实验材料
[0036]植物材料
[0037]转基因水稻：转人血清白蛋白基因工程水稻质量分数为100％的种子粉末；
[0038]转基因水稻：含3种其他转基因水稻种子粉末混合样(科丰6号，克螟稻，TT51
‑
1转化体，每种转化体含量为1％)；
[0039]转基因玉米：含14种转基因玉米种子粉末混合样(MON810，Bt
‑
11，Bt
‑
176，GA21，MON863，MON89034，MON88017，MIR604，TC1507，MIR162，98140，59122，NK603，T25转化体，每种转化体含量为1％)；
[0040]转基因油菜：含9种其他转基因油菜种子粉末混合样(MS1，MS，RF1，GT73，RF2，RF3，T45，Oxy235，Topas19/2转化体，每种转化体含量为1％)；
[0041]转基因大豆：含3种其他转基因大豆种子粉末混合样(GTS40
‑3‑
2，MON89788，CV127转化体，每种转化体含量为1％)；
[0042]转基因棉花：含5种其他转基因棉花种子粉末混合样(MON531，MON15985，LLCOTTON25，GHB614，MON88913转化体，每种转化体含量为1％)；
[0043]常规水稻：非转基因水稻台北309(TP309)。
[0044]生化试剂
[0045]DNA提取试剂盒：DNAsecure Plant Kit(TIANGEN，货号：DP320
‑
03)；
[0046]实时荧光PCR试剂：iTaqUniversal Probes Supermix(BIO
‑
RAD,美国)。
[0047]实验仪器
[0048]实时荧光PCR仪：CFX ConnectTM Real
‑
Time System(BIO
‑
RAD,美国)；
[0049]微量紫外分光光度计：NanoDrop one(Thermo，美国)；
[0050]常规仪器包括:电子天平、台式离心机、生物安全柜和分光光度计等。
[0051](二)实验方法
[0052](1)DNA提取：按照植物基因组DNA提取试剂盒说明书操作办法提取各个样品DNA；
[0053](2)DNA测试：用微量紫外分光光度计测试各个DNA的质量，包括DNA浓度以及根据OD
260
/OD
280
比值判断DNA的纯度，并将各个DNA放入
‑
20℃冰箱保存备用；
[0054](3)实时荧光PCR方法：在CFX ConnectTM Real
‑
Time System PCR仪中进行扩增，反应体系为20μL：iTaquniversal probes supermix(2
×
)10μL，上游引物(10μmol/L)0.8μL，下游引物(10μmol/L)0.8μL，探针(10μmol/L)0.4μL，DNA模板1μL，ddH2O 7μL。
[0055]反应程序为：95℃变性3s，60℃退火延伸30s，循环40次；在每次第二阶段的退火本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测转人血清白蛋白基因工程水稻的引物，其特征在于，所述引物如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示：HSA
‑
Forward:5
’‑
GCATGTTCCTCTACGAGTA
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；HSA
‑
Reverse:5
’‑
GTGGTCTCGTAGGTCTTG
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示。2.一种检测转人血清白蛋白基因工程水稻的探针，其特征在于，所述探针如SEQ ID NO.3所示：HSA
‑
Probe:5
’‑
FAM
‑
CTACTCCGTGGTGCTCCTCC
‑
BHQ1
‑3’
，如SEQ ID NO.3所示；其中，HSA
‑
Probe的5
’
端标记有FAM荧光基团，3
’
端标记有BHQ1淬灭基团。3.一种检测转人血清白蛋白基因工程水稻的组合物，其特征在于，包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示的引物和SEQ ID NO.3所示的探针。4.权利要求1所述的引物或权利要求2所述的探针或权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗军玲，李晓飞，闫晓红，姜伟华，姚晓青，李俊，赵圣博，刘芳，吴刚，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：