一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合包括扩增并检测根霉属的引物对和探针、扩增并检测毛霉属的引物对和探针、扩增并检测犁头霉属的引物对和探针、扩增并检测根毛霉属的引物对和探针、扩增并检测小克银汉霉属的引物对和探针中的任意一种或至少两种的组合；所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的检测位点位于28SrRNA序列区域和/或ITS2rRNA序列区域。本发明专利技术还提供了一种毛霉菌分型检测的试剂盒及其以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法以及一种毛霉菌分型检测的装置。所述引物探针组合具有良好的特异性与灵敏度，检测结果准确，应用价值极高。应用价值极高。应用价值极高。

【技术实现步骤摘要】
一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着广谱抗生素、皮质类固醇激素、抗肿瘤药物及免疫抑制剂的普遍应用，糖尿病患者、艾滋病患者的增多，实体器官及骨髓移植、烧伤抢救和其它延长生命技术的广泛使用，为条件致病真菌的繁殖和致病提供了良好的条件，使侵袭性真菌病感染的发病率有明显增加趋势。
[0003]毛霉病是一种由毛霉菌目(主要为根毛霉和毛霉)引起的致命的机会性真菌感染。在真菌感染中，毛霉病发病率占8.3％～13％，仅次于念珠菌和曲霉感染，居于第三位。毛霉病病死率高达40％～80％。
[0004]毛霉病感染的诊断面临很多困难，由于毛霉为实验室或皮肤粘膜表面常见污染菌，因此直接刮取鳞屑获得的镜检结果不能作为组织浸润的可靠证据，并且直接镜检不能用于毛霉菌种属的鉴定；通过培养进行鉴定的结果阳性率低，检测时间长；血清学检测是临床侵袭性真菌感染的重要检测方法，G试验是针对真菌细胞壁1,3
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β
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D葡聚糖的抗原检测，但毛霉亚门的细胞壁少有1,3
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β
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D葡聚糖的表达，因此G试验不适用于毛霉病的血清学诊断；半乳甘露聚糖抗原(galactomannoglycan，GM)试验是烟曲霉较为特异的血清学检测方法，但方法较为繁琐，同样存在不能对毛霉菌进行分型的弊端。
[0005]对毛霉菌进行准确的分型检测对于疾病的治疗具有重要意义。因此，如何提供一种操作简单、用时较短且可以进行分型的毛霉菌检测方法，已成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种毛霉菌分型检测的引物探针组合及其应用，通过荧光探针结合熔解曲线的方法，可以准确判断样本是否发生了毛霉菌感染，并根据熔解曲线对具体的毛霉属进行鉴定。
[0007]为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种毛霉菌分型检测的引物探针组合，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合包括扩增并检测根霉属的引物对和探针、扩增并检测毛霉属的引物对和探针、扩增并检测犁头霉属的引物对和探针、扩增并检测根毛霉属的引物对和探针、扩增并检测小克银汉霉属的引物对和探针中的任意一种或至少两种的组合；
[0009]所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的检测位点位于28S rRNA序列区域和/或ITS2 rRNA序列区域。
[0010]本专利技术中，针对不同的毛霉菌属分别设计了不同的引物对和探针，在不对称PCR扩增反应后进行熔解曲线分析，根据探针熔点的变化来判断待检测样品的感染情况，可以在同一次反应中判断样本是否发生了毛霉菌感染以及感染的具体菌属，效率高，用时短，并且
节约了检测试剂；选择保守性较高的28S rRNA序列区域和/或ITS2 rRNA序列区域作为检测位点设计引物探针，特异性高，结果准确。
[0011]本专利技术中，根霉属的检测位点序列如SEQ ID No.19所示，毛霉属的检测位点序列如SEQ ID No.20所示，犁头霉属的检测位点序列如SEQ ID No.21所示，根毛霉属的检测位点序列如SEQ ID No.22所示，小克银汉霉属的检测位点序列如SEQ ID No.23所示。
[0012]SEQ ID No.19：
[0013]cacaaacccacacataacatttgtttatgtggtgatgggtcgcatcgctgttttattacagtgagcacctaaaatgtgtgtgattttctgtctggcttgctaggcaggaatattacgctggtctcaggatctttttttttggttcgcccaggaagtaaagtacaagagtataatccagtaactttcaaactatgatctgaagtcaggtgg。
[0014]SEQ ID No.20：
[0015]caaaccctctatccagcattttgttgaataggaatactgagagtctcctgatctattctgatctcgaacctcttgaaatgtacaaaggcctgatcttgtttaaatgcctgaacttttttttaatataaagagaagctcttgcggtaaactgtgctggggcctcccaaataatactctttttaa。
[0016]SEQ ID No.21：
[0017]tgattcccctagtaacggcgagtgaagagggaaaagctcaaagttggaacctggctgccctaggcagtccggattgtaaactaaagagcgtgattccaggcaagccggttgaccaagtcctttggaatgaggcgccactgagggtgagagccccgtaagtcgactgagcatttgtcttttgtgtttcgcgttcaaagagtcaggttgtttgggaatgcagcctaaagctggtggtaaatcccacctaaagctaaatacaggcgagagaccgatagcgaacaagtaccgtgagggaaagatgaaaagaactttgaaaagagagttaaacagtatgtgaaattgccaagagggaagcatttggagttagattgactaggagttaatcagcttggtctttggactgggtgtacttgacttcttacagtctgccaatagcagttagtcctagtggaaaaaaccagagggaaggtagtccttcgggatgtttatagacctttggaaaatacactgggattgactgaggaatgcagtagatgccactaaggcttcgtctagtgggtgctaggcaaaggtacttggtattttcagcttgctgatgtactaggttactcgagtctagtcgcctactagaactgtaatc。
[0018]SEQ ID No.22：
[0019]atcaataagcggaggaaaagaaaataacaatgatacccttagtagcggcgagcgaagtgggtaaagctcaagtttaaaacctgtttgtcctagacaaaccggattgtaaactaaggacgtgctatccaggctctttggaccttcaagtcctttggaataaggcttcacagagggtgacaatcccgtagagggtcttgaaagagtctattgcgatgcatgctccaagagtcaggttgtttgggaatgcagcctaaagtgggaggtaaatccctcctaaagctaaatattggcgagagaccgatagcaaacaagtaccgtgagggaaagttgaaaaggactttgaaaagagagtcaaaagtacgtgaaattgct本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合包括扩增并检测根霉属的引物对和探针、扩增并检测毛霉属的引物对和探针、扩增并检测犁头霉属的引物对和探针、扩增并检测根毛霉属的引物对和探针、扩增并检测小克银汉霉属的引物对和探针中的任意一种或至少两种的组合；所述毛霉菌分型检测的引物探针组合的检测位点位于28S rRNA序列区域和/或ITS2 rRNA序列区域。2.根据权利要求1所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，扩增所述根霉属的引物对包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列，检测所述根霉属的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；优选地，扩增所述毛霉属的引物对包括SEQ ID No.4～5所示的核苷酸序列，检测所述毛霉属的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；优选地，扩增所述犁头霉属的引物对包括SEQ ID No.7～8所示的核苷酸序列，检测所述犁头霉属的探针包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列；优选地，扩增所述根毛霉属的引物对包括SEQ ID No.10～11所示的核苷酸序列，检测所述根毛霉属的探针包括SEQ ID No.12所示的核苷酸序列；优选地，扩增所述小克银汉霉属的引物对包括SEQ ID No.13～14所示的核苷酸序列，检测所述小克银汉霉属的探针包括SEQ ID No.15所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1或2所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述毛霉菌分型检测的引物探针组合还包括扩增并检测内标基因的引物对和探针；优选地，扩增所述内标基因的引物对包括SEQ ID No.16～17所示的核苷酸序列，检测所述内标基因的探针包括SEQ ID No.18所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1～3任一项所述的毛霉菌分型检测的引物探针组合，其特征在于，所述探针携带荧光基团和淬灭基团；优选地，所述荧光基团包括ALEX
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350、Alexa Fluor 488、CY3、FAM、VIC、TET、CALGold540、JOE、HEX、CALFluorOrange560、TAMRA、CALFluorRed590、ROX、CALFluorRed610、Tex...

【专利技术属性】
技术研发人员：阎香言，王志贤，张傲，白雪秋，李姝丽，吴秀祯，盛长忠，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜天津生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：