【技术实现步骤摘要】
检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法
[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种检测槟榔缺铁的试剂盒及判断槟榔幼苗缺铁状态的方法。
技术介绍
[0002]目前，铁(Fe)是植物生长所必需的微量元素，对植物的生长和代谢具有不可替代的作用。铁在光合作用、叶绿体发育、叶绿素合成、氮代谢、呼吸作用、酶氧化还原反应等各种重要过程中发挥作用。Fe
2+
和Fe
3+
的存在使其适合于氧化还原反应，并在电子转移中起着重要作用。如果过量使用，可能会有潜在的毒性。游离的Fe可通过Fenton反应产生毒性水平的氧自由基和羟基自由基。
[0003]荧光定量PCR是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种新的核酸定量实验技术，它的原理是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，通过对产物量的实时分析，最终能够对模板的初始浓度，核酸种类、基因突变类型等信息作出准确的判定。目前，荧光定量PCR在生物学研究及个体化医学基因检测领...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括一组基于ZIP家族的检测引物以及内参引物。2.如权利要求1所述的快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述基于ZIP家族的检测引物，包括特异性引物ZIP1和特异性引物ZIP2；其中，所述特异性引物ZIP1的核苷酸序列SEQ ID NO：1所示，所述特异性引物ZIP2的核苷酸序列SEQ ID NO：2所示；所述内参引物的核苷酸序列SEQ ID NO：3所示。3.一种如权利要求1~2任意一项所述的快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒在检测槟榔是缺铁还是缺锌中的应用，其特征在于，所述快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒在检测槟榔是缺铁还是缺锌中的应用方法为：以天根多糖多酚植物总RNA提取试剂盒提取待测样品的基因组RNA，逆转录为cDNA为模板，使用试剂盒中的ZIP基因检测引物与内参引物进行RT
‑
qPCR反应，以正常样品为对照，按照2^(
‑
ΔΔCt)计算相对丰度，得到基因的相对表达量；根据AcZIP家族的相对表达量，若ZIP1在叶片中和根中的表达量没有显著差异，而ZIP2在新叶中表达量急剧下降，在根中没有明显变化，则说明植株受到缺铁胁迫；其中，所述样品包括槟榔叶片和槟榔主根。4.一种应用如权利要求1~2任意一项所述的快速检测槟榔缺铁的实时荧光定量PCR检测试剂盒的通过AcZIP家族基因差异性表达判断槟榔幼苗缺铁状态的方法，其特征在于，所述通过AcZIP家族基因差异性表达判断槟榔幼苗缺铁状态的方法包括以下步骤：步骤一，实验基地进行槟榔缺铁处理：以Hoagland为配方，采用水培的方法对一叶期进行适应性培养后的槟榔幼苗进行缺铁处理；步骤二，样品采集：对出现黄化现象的槟榔幼苗的叶片以及主根进行收集，用75%的乙醇擦拭干净，用液氮冻干；步骤三，ZIP家族分析：根据已有的植物ZIP基因设计引物进行PCR扩增，两组ZIP基因简单命名为ZIP1和ZIP2；步骤四，引物设计：根据ZIP基因的序列，应用primer5软件设计每个基因的特异性引物；步骤五，引物的特异性验证：以提取的正常样品的cDNA为模板，进行PCR扩增，测序，与核酸序列进行比较，检测该引物的特异性；步骤六，实时荧光定量PCR：采用荧光定量PCR仪对cDNA模板进行荧光定量PCR检测以及熔解曲线分析，再一次验证扩增的特异性。5.如权利要求4所述的通过AcZIP家族基因差异性表达判断槟榔幼苗缺铁状态的方法，其特征在于，步骤一中，所述实验基地进行槟榔缺铁处理，包括：在实验基地以Hoagland为配方，采用水培的方法对一叶期进行适应性培养后的槟榔幼苗进行缺铁处理，每隔一周时间进行培养液的更换，直到槟榔幼苗出现明显的表型；其中，缺铁的槟榔幼苗的新叶出...
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