病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法技术

本发明专利技术提供了一种病毒蛋白抗原检测试剂盒及试纸条的制备和使用方法，适用于最近爆发的新冠病毒感染和其他病毒感染的早期现场筛查。所述制备和使用方法包括使检测样本中的病毒抗原肽或蛋白的若干位点与第一亲和蛋白或抗体与金属纳米材料形成的第一标记复合物结合后，再进一步使形成的结合复合物中的病毒抗原肽或蛋白的其他若干位点与第二亲和蛋白或抗体与金属纳米材料形成的第二标记复合物再结合。所述制备和使用方法在10

【技术实现步骤摘要】
病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法。

技术介绍

[0002]目前迫切需要安全有效能拮抗新冠病毒感染的快速检测方法和药物。
[0003]然而，核酸检测对设备场地和操作人员具有极高的技术要求，并且单一样本完成检测也需要数个小时。这也意味着核酸检测无法在采集现场对样本进行分析处理，且需要对样本进行运输，而核酸样本对保存条件要求苛刻，在保存运输的过程中核酸容易降解，影响检测灵敏度。人体感染新冠病毒后需要在两周左右才能产生抗体，这意味着病毒抗体检测有漏检窗口期，早期或无症状感染者会出现抗体检测阴性。可见，在快速检测早期新冠病毒感染者方面，核酸检测和抗体检测均无法起到全面的筛查作用。
[0004]新型冠状病毒基因编码多个结构蛋白，例如S蛋白，N蛋白和E蛋白等，这些蛋白包括多个抗原表位，利用抗原与亲和蛋白或抗体特异性结合的原理，可通过亲和蛋白或抗体检测病毒抗原的存在，从而直接证明样本中含有新冠病毒。另外，抗原检测对实验室的要求低，且能在较短时间内得到检测结果，适用于新冠病毒和其他病毒感染的现场快速筛查。
[0005]因此有必要提供新型的病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，以避免现有技术中存在的上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，以快速得到准确的检测结果，适用于基层医院的大规模筛查以及现场快速检测。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供的所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，包括以下步骤：提供第一亲和蛋白或抗体以及第二亲和蛋白或抗体，所述第一亲和蛋白或抗体以及所述第二亲和蛋白或抗体与病毒抗原肽或蛋白均具有高亲和力，并带有电荷；使所述第一亲和蛋白或抗体以及所述第二亲和蛋白或抗体分别吸附金属纳米材料，以使所述金属纳米材料聚集并形成至少两个标记复合物，不同的所述金属纳米材料与所吸附的亲和蛋白或抗体具有相反的电荷；提供检测样本，使所述检测样本中的病毒抗原肽或蛋白的若干位点与所述第一亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第一标记复合物结合，以形成结合复合物，所述检测样本包括受试样本和参比样本中的至少一种；使所述结合复合物中的病毒抗原肽或蛋白的其他若干位点与所述第二亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第二标记复合物再结合，然后直接或者通过催化过氧化物酶底物的方式产生明显的颜色反应。
[0008]本专利技术的所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法的有益效果在于：使所述检测样本中的病毒抗原肽或蛋白的若干位点与所述第一亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第一标记复合物结合后，再进一步使所述结合复合物中的病毒抗原肽或蛋白的
其他若干位点与所述第二亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第二标记复合物再结合实现了表达信号的放大，从而有利于快速产生明显的颜色反应，适用于基层医院的大规模筛查以及现场检测。
[0009]优选的，所述检测样本中的病毒抗原肽或蛋白来源于呼吸道感染病毒、消化道感染病毒、肝炎病毒、乙脑病毒、神经病毒和性传播病毒中的任意一种或多种。
[0010]进一步优选的，所述呼吸道感染病毒包括新冠病毒、SARS病毒、MERS病毒、流感病毒、鼻病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒中的任意一种或多种。
[0011]优选的，所述受试样本中的病毒抗原肽或蛋白来源于受试者的咳痰、咽拭子、口腔拭子、血液、粪便和体液中的任意一种或多种。
[0012]进一步优选的，所述体液包括血液、尿液、汗液和其他体液中的任意一种或多种。
[0013]进一步优选的，其他体液包括精液、阴道分泌物等。
[0014]优选的，通过生物系统表达或人工合成的方法获取所述参比样本的病毒抗原肽或蛋白。
[0015]进一步优选的，所述生物系统包括动物乳腺生物反应器系统、大肠杆菌系统、昆虫细胞系统、酵母系统和哺乳动物细胞系统中的任意一种或多种。
[0016]优选的，所述参比样本的病毒抗原肽或蛋白包含新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位和S2亚单位及病毒结构蛋白。
[0017]优选的，所述参比样本的病毒抗原肽或蛋白包含所述新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位和S2亚单位及所述病毒结构蛋白中任意一种或多种的片段、变体或衍生物。
[0018]进一步优选的，所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位包括受体结合域。
[0019]进一步优选的，所述病毒结构蛋白包括血凝素、神经氨酸酶、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白中的任意一种或多种。
[0020]优选的，通过生物系统表达或人工合成的方法获取所述第一亲和蛋白或抗体和第二亲和蛋白或抗体中的任意一种，所述生物系统包括动物乳腺生物反应器系统、大肠杆菌系统、昆虫细胞系统、酵母系统和哺乳动物细胞系统中的任意一种或多种。
[0021]优选的，所述第一亲和蛋白或抗体和所述第二亲和蛋白或抗体中的任意一种包括重组全长或片段人ACE2蛋白、ACE2
‑
Fc融合蛋白、人工合成ACE2多肽、病毒亲和蛋白和抗体中的至少一种，所述人工合成ACE2多肽如SEQ ID 1
‑
3所示。
[0022]进一步优选的，所述抗体包括筛选出的拮抗新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白S1亚单位和S2亚单位及所述病毒结构蛋白的单克隆或多克隆抗体。
[0023]进一步优选的，所述抗体包括筛选出的拮抗所述新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位和S2亚单位及所述病毒结构蛋白中任意一种或多种的片段、变体或衍生物的单克隆或多克隆抗体。
[0024]进一步优选的，所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位包括受体结合域，所述病毒结构蛋白包括血凝素、神经氨酸酶、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白中的任意一种或多种。
[0025]优选的，所述金属纳米材料包括胶体金颗粒、银离子颗粒及纳米模拟酶中的至少一种或多种。
[0026]进一步优选的，所述纳米模拟酶包括过氧化物纳米模拟酶或具有催化活性的纳米
模拟酶。
[0027]优选的，所述过氧化物纳米模拟酶或具有催化活性的其他纳米模拟酶的底物包括过氧化氢，以及TMB、 DAB、OPD和CDI中的任意一种或多种。
[0028]优选的，所述检测工具包括试剂盒和试纸条，通过所述第一标记复合物的冻干剂或悬液封装品、所述参比样本与所述第一标记复合物结合形成的参比标记复合物的冻干剂或悬液封装品、所述第二标记复合物的冻干剂或悬液封装品和所述金属纳米材料的冻干剂或悬液封装品进行所述试剂盒组成溶液的包装及所述试纸条的组装。
[0029]优选的，所述试纸条的组装包括：将NC膜粘贴在乙烯基衬垫上；对所述NC膜包被T线和C线；对所述NC膜洗涤和干燥；将吸收垫粘贴在乙烯基背衬上，以与所述NC膜重叠；通过切割形成试纸条，所述试纸条的尺寸为25mm
×
5mm，将所述试纸条放入铝箔袋中，并加入干燥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，包括以下步骤：提供第一亲和蛋白或抗体以及第二亲和蛋白或抗体，所述第一亲和蛋白或抗体以及所述第二亲和蛋白或抗体与病毒抗原肽或蛋白均具有高亲和力，并带有电荷；使所述第一亲和蛋白或抗体以及所述第二亲和蛋白或抗体分别吸附金属纳米材料，以使所述金属纳米材料聚集并形成至少两个标记复合物，不同的所述金属纳米材料与所吸附的亲和蛋白或抗体具有相反的电荷；提供检测样本，使所述检测样本中的病毒抗原肽或蛋白的若干位点与所述第一亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第一标记复合物结合，以形成结合复合物，所述检测样本包括受试样本和参比样本中的至少一种；使所述结合复合物中的病毒抗原肽或蛋白的其他若干位点与所述第二亲和蛋白或抗体与所述金属纳米材料形成的第二标记复合物再结合，然后直接或者通过催化过氧化物酶底物的方式产生明显的颜色反应。2.根据权利要求1所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，所述检测样本中的病毒抗原肽或蛋白来源于呼吸道感染病毒、消化道感染病毒、肝炎病毒、乙脑病毒、神经病毒和性传播病毒中的任意一种或多种，所述呼吸道感染病毒包括新冠病毒、SARS病毒、MERS病毒、流感病毒、鼻病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒中的任意一种或多种。3.根据权利要求1所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，所述受试样本中的病毒抗原肽或蛋白来源于受试者的咳痰、咽拭子、口腔拭子、血液、粪便和体液中的任意一种或多种，所述体液包括血液、尿液、汗液、精液和阴道分泌物中的任意一种或多种。4.根据权利要求1所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，通过生物系统表达或人工合成的方法获取所述参比样本的病毒抗原肽或蛋白，所述生物系统包括动物乳腺生物反应器系统、大肠杆菌系统、昆虫细胞系统、酵母系统和哺乳动物细胞系统中的任意一种或多种。5.根据权利要求4所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，所述参比样本的病毒抗原肽或蛋白包含新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位和S2亚单位、病毒结构蛋白，或所述新冠病毒刺突蛋白、所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位和S2亚单位以及所述病毒结构蛋白中任意一种或多种的片段、变体或衍生物，所述新冠病毒刺突蛋白的S1亚单位包括受体结合域，所述病毒结构蛋白包括血凝素、神经氨酸酶、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白中的任意一种或多种。6.根据权利要求1所述病毒蛋白抗原检测工具的制备和使用方法，其特征在于，通过生物系统表达或人工合成的方法获取所述第一亲和蛋白或抗体和第二亲和蛋白或抗体中的至...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄跃进，
申请(专利权)人：上海桀蒙生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：