一种S1F-AXL复合物、试剂盒和检测该复合物的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种S1F

【技术实现步骤摘要】
一种S1F
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AXL复合物、试剂盒和检测该复合物的方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种S1F
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AXL复合物、试剂盒和检测该复合物的方法及应用。

技术介绍

[0002]2019年冠状病毒病(COVID
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19)成为了一个紧迫的全球公共卫生问题，截至2020年12月，全球至少报告了7600万例病例，超过160万例死亡。尽管有几种疫苗正在进行临床试验，但感染和死亡人数在可预见的未来将继续上升，从而对社会健康和经济发展造成灾难性影响。许多药物已经过针对COVID
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19的疗效测试，特别是Remdesivir.RTM等，但这些疗法中很少有人在临床试验中表现出强大的疗效。因此，对COVID
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19患者的医院护理将在世界范围内变得司空见惯，治疗严重病例中的细胞因子风暴和器官衰竭等并发症将需要加强对新疗法疗效的调查。
[0003]COVID
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19的病原体，严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)是冠状病毒科病毒的成员，已知会导致哺乳动物的呼吸道、肝脏、肠道和神经系统疾病。在2002年之前，冠状病毒仅被认为是人类的次要病原体，约占普通感冒的15
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25%。然而，2002年由新型冠状病毒SARS
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CoV引起的严重SARS暴发的出现，推动了公共卫生对冠状病毒引起的疾病的警惕。迄今为止，已知有七种人畜共患冠状病毒可引起人类疾病，其中冠状病毒MERS
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CoV、SARS
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CoV和SARS
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CoV
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2被确定为导致严重急性呼吸系统综合症的原因。
[0004]2019年的冠状病毒病(COVID
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19)是由SARS
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CoV
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2病毒引起的。感染的关键步骤是病毒进入人类宿主细胞时，这是通过病毒颗粒表面的SARS
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CoV
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2Spike(S)蛋白受体结合域(RBD)与表面受体之间的相互作用实现的人体细胞。因此，识别小分子、抗体（如病毒中和抗体）或其他干扰S受体复合物形成的生物分子可能有助于开发预防或治疗COVID
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19的药物。
[0005]新冠病毒SARS
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CoV
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2通过Spike蛋白与宿主ACE2受体结合，介导膜融合和病毒侵入。尽管SARS
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CoV
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2感染主要表现为呼吸系统症状，但单细胞测序数据表明，在各种人体组织中，尤其是肺和支气管组织中，总体ACE2表达较低。2021年1月8日，西湖大学李旭、黄晶及复旦大学陆路等团队研究发现酪氨酸蛋白激酶受体UFO(AXL)与SARS
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CoV
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2病毒Spike蛋白的N末端(NTD)存在特异性相互作用。AXL在几乎所有人体器官中广泛表达，在人的肺和支气管上皮组织和细胞中，AXL表达远高于ACE2表达。AXL以不依赖ACE2的方式促进SARS
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CoV
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2感染人肺上皮细胞，真实的SARS
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CoV
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2感染检测进一步证实了这种可能的情况。尽管如此，仍需要进一步研究以确定AXL和ACE2是否利用相同的辅因子或参与相似的感染过程，以及是否存在其他受体参与介导病毒入侵，毕竟病毒感染并没有随AXL/ACE2敲降而完全消除。
[0006]SARS
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CoV
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2入侵人体的又一候选受体AXL得到鉴定，其在促进人类呼吸系统的病毒感染中发挥重要作用，表明它是未来临床干预策略的潜在目标；进一步发现和阐明其具体机制，将有效推动新冠病毒诊疗方案的完善和实施。

技术实现思路

[0007]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种检测S1F
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AXL复合物的试剂盒，用于检测刺突蛋白(S1F)与酪氨酸蛋白激酶受体UFO（AXL）之间结合形成的复合物，可以确认刺突蛋白与酪氨酸蛋白激酶受体之间的结合程度，应用于冠状病毒药物、疫苗开发和测试。
[0008]为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案如下：一种检测S1F
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AXL复合物的试剂盒，包含S1F多肽和AXL多肽，以S1F多肽、AXL多肽中的一种作为包被底物；所述S1F多肽和所述AXL多肽中至少一种为具有缀合标签的糖基化多肽，还包括具有微孔的微量滴定板、标记底物标记的抗标签特异性抗体、HRP偶联的二抗、洗涤缓冲液、标记底物反应液、反应终止液。
[0009]本专利技术还提供了一种S1F
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AXL复合物，其是由糖基化S1F多肽与哺乳动物的ALX多肽结合后形成的复合物。
[0010]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的所述糖基化S1F多肽为哺乳动物细胞表达系统表达的重组糖基化S1F多肽。
[0011]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的糖基化S1F多肽为糖基化冠状病毒的刺突蛋白，例如SARS
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CoV
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2病毒、SARS病毒、MERS病毒等。
[0012]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒中，所述S1F多肽为哺乳动物细胞表达系统表达的重组糖基化S1F多肽，具有或包含氨基酸序列SEQIDNO：1。
[0013]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒中，所述AXL多肽为具有或者包含氨基酸序列为SEQIDNO：2或SEQ ID NO：3的多肽片段。
[0014]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒中，缀合标签为具有Fc区的IgG。
[0015]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒中，所述标记底物为辣根过氧化物酶；所述标记底物反应液为含有3,3
’
,5,5
’‑
四甲基联苯胺的缓冲液；所述反应终止液为0.2M硫酸。
[0016]作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒还包括用于抑制S1F多肽和AXL多肽结合成复合物的抑制剂和测定稀释剂、。
[0017]本专利技术还提供一种利用本专利技术所述的试剂盒检测S1F
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AXL复合物的方法，该方法包括步骤1：将S1F多肽和AXL多肽中的一种多肽用测定稀释液稀释后用于包被微量滴定板，另一种多肽用于添加到微量滴定板的微孔中以形成S1F
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AXL复合物；步骤2：用洗涤缓冲液洗涤未结合多肽的微孔，然后将微孔进行温育；步骤3：用标记底物标记抗标签特异性抗体，将被标记的抗标签特异性抗体递送到孔中；步骤4：将孔温育预设时间以允许抗标签特异性抗体递送至与步骤一种形成的复合物结合；步骤5：检测与固定在微量滴定板上的复合物结合的抗标签特异性抗体上的标记的信号特征，从而检测出S1F多肽与AXL多肽结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测S1F
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AXL复合物的试剂盒，其特征在于，包含S1F（刺突蛋白）多肽和AXL（酪氨酸蛋白激酶受体）多肽，以S1F多肽、AXL多肽中的一种作为包被底物；所述S1F多肽和所述AXL多肽中至少一种为具有缀合标签的糖基化多肽，还包括具有微孔的微量滴定板、标记底物标记的抗标签特异性抗体、HRP偶联的二抗、洗涤缓冲液、标记底物反应液、反应终止液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述S1F多肽为哺乳动物细胞表达系统表达的重组糖基化S1F多肽，具有或包含氨基酸序列SEQIDNO：1。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述AXL多肽为具有或者包含氨基酸序列为SEQIDNO：2或SEQIDNO：3的多肽片段。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缀合标签为具有Fc区的IgG，所述Fc区具有氨基酸序列SEQIDNO：4。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记底物为辣根过氧化物酶；所述标记底物反应液为含有3,3
’
,5,5
’‑
四甲基联苯胺的缓冲液；所述反应终止液为0.2M硫酸。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于抑制S1F多肽和AXL多肽结合成复合物的抑制剂和测定稀释剂。7.一种冠状病毒抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括步骤1：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，唐浩，罗树红，方建民，张双喆，朱思为，
申请(专利权)人：瑞博奥广州生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：