【技术实现步骤摘要】
一种同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡及其制备方法与应用
[0001]本专利技术涉及体外诊断及生物医学检测试剂领域，尤其涉及一种同时检测 ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡及其制备方法与应用。
技术介绍
[0002]2021年3月22日，农业农村部网站发布了《养猪场非洲猪瘟(ASFV)变异株监测技术指南》。该指南是国家非洲猪瘟参考实验室为了指导养猪场做好非洲猪瘟监测工作，及时发现非洲猪瘟病毒，特别是针对目前非法疫苗造成的“疫苗毒”感染情况，提升非洲猪瘟防控能力而特意制定的。
[0003]非洲猪瘟变异株包括基因缺失株、自然变异株、自然弱毒株等。与2018 年传入的非洲猪瘟毒株相比，非洲猪瘟变异株的基因组序列、致病力等发生明显变化。生猪感染ASFV毒株后，潜伏期延长，临床表现轻微，后期可出现关节肿胀、皮肤出血型坏死灶，感染母猪产仔性能下降、死淘率增高，出现流产死胎/木乃伊胎等。与传统的流行毒株相比，生猪感染变异毒株后排毒滴度低、间隙性排毒，难以早期发现。
[0004]2020年下半年，...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，由IgM检测条和IgG检测条组合在一张检测卡上制成；所述IgM检测条与IgG检测条分别包括样品垫、样品结合垫、层析膜与吸水垫；其中，两个所述检测条的层析膜上分别采用了相同的重组ASFV抗原作为固相包被物，且分别是：MGF360
‑
14L、CD2v、p72；同时，所述IgM检测条的样品结合垫上包被有生物素标记的抗猪IgM、示踪物标记的链霉亲和素及示踪物标记的兔抗鸡IgY；所述IgG检测条的样品结合垫上包被有生物素标记的抗猪IgG、示踪物标记的链霉亲和素及示踪物标记的兔抗鸡IgY。2.根据权利要求1所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，每个所述检测条上，根据待测样品的流动迁移方向，依次布置有所述样品垫、样品结合垫、层析膜与吸水垫；并且，所述IgM检测条的层析膜上分别设有C
M
质控线和T
1M
检测线、T
2M
检测线、T
3M
检测线；IgG检测条的层析膜上分别设有C
G
质控线和T
1G
检测线、T
2G
检测线、T
3G
检测线。3.根据权利要求2所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，每个所述层析膜上，检测线靠近所述样品垫设置，质控线靠近所述吸水垫设置。4.根据权利要求2所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，所述C
M
质控线和C
G
质控线由鸡IgY喷涂形成，所述T
1M
检测线和T
1G
检测线由p72重组抗原蛋白喷涂形成，T
2M
检测线和T
2G
检测线由CD2v重组抗原蛋白喷涂形成，T
3M
检测线和T
3G
检测线由MGF360
‑
14L重组抗原蛋白喷涂形成。5.根据权利要求1所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，所述IgM检测条与IgG检测条的样品结合垫上的示踪物具体为胶体金、荧光微球、彩色微球、磁性微球、量子点、量子点微球，或辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、吖啶酯化合物中的一种。6.根据权利要求1所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，所述IgM检测条与IgG检测条的层析膜具体为硝酸纤维素膜。7.根据权利要求1～6任一所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡，其特征在于，所述联合检测卡包括卡壳，所述卡壳的内部平行设置有所述IgM检测条与IgG检测条；其中，所述IgM检测条与IgG检测条分别包括一个底板，每个所述底板上分别布置有所述样品垫、样品结合垫、层析膜与吸水垫。8.一种如权利要求1～7任一所述的同时检测ASFV特异性IgM和IgG抗体的联合检测卡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物素化抗体的制备分别取山羊抗猪IgM和小鼠抗猪IgG抗体，按抗体：生物素摩尔比为1：100的比例加入生物素，室温下培育后，使用PB缓冲液稀释至反应液体积的5倍，接着进行透析处理，制得生物素标记的抗猪IgM与生物素标记的抗猪IgG；(2)示踪物标记的链霉亲和素的制备在沸腾的0.01％氯金酸水溶液中按照体积比25：1加入0...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄逸强，戈军，陈娟，彭湘平，李尤美，
申请(专利权)人：长沙兴嘉生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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