一种用于监测人体免疫状态的6抗体试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种监测人体免疫状态的检测试剂盒，由CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56单克隆抗体组成。所述抗体分别带有适用于流式的荧光素或者质谱流式的金属元素，通过检测人外周血中主要的免疫细胞亚群对人体免疫状态进行评估，达到对人体免疫状态及变化检测、监控，并进而对临床治疗跟踪、预后及疗效评价。预后及疗效评价。预后及疗效评价。

【技术实现步骤摘要】
405、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 700、Alexa Fluor 750、APC/Alexa Fluor 750、APC/Cy7、APC/eflour 750、APC/FireTM750、PerCP/Cy5.5、PerCP、PerCP
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eFlour 710、PE/Cy7、PE、PE/Cy5、PE/Dazzle 594、PE
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CF594、Pacific Blue、Brilliant Violet 421、Brilliant Violet 510、Brilliant Violet 570、Brilliant Violet 605、Brilliant Violet 650、Brilliant Violet 711、Brilliant Violet 750、Brilliant Violet 785、Super Bright 436、Super Bright 600、Super Bright 645、Super Bright 702、eFluor 450、eFluor 506、eFluor 660、eFluor 710、eFluor 780、BD Horizon BB515、BD Horizon PE
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CF594、BD Horizon BV421、BD Horizon BV480、BD Horizon BV510、BD Horizon BV605、BD Horizon BV650、BD Horizon BV711、BD Horizon BV786、BD Horizon BUV395、BD Horizon BUV496、BD Horizon BUV737、BD Horizon BUV805、BD Horizon APC R700、Cy3、Cy5、Cy7中的任意一种。
[0013]优选的，前述试剂盒所述金属元素选自89Y、106Cd、110Cd、111Cd、112Cd、113Cd、114Cd、115In、116Cd、139La、141Pr、142Nd、143Nd、144Nd、145Nd、146Nd、147Sm、148Nd、149Sm、150Nd、151Eu、152Sm、153Eu、154Sm、155Gd、156Gd、157Gd、158Gd、159Tb、160Gd、161Dy、162Dy、163Dy、164Dy、165Ho、166Er、167Er、168Er、169Tm、170Er、171Yb、172Yb、173Yb、174Yb、175Lu、176Yb、197Au、198Pt、209Bi中的任意一种。
[0014]优选的，前述试剂盒所述标记抗体，其组分如下：荧光或金属标记的CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56，以体积百分含量计共0.5～97.5％；
[0015]本专利技术其解决其技术问题通过以下技术方案实现。依据本专利技术提出的一种试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：1)将抗体进行荧光标记或金属标记；2)通过滴定确定抗体的使用量；3)将上述计量的标记的抗体放入试剂瓶内，混合均匀，密封，荧光抗体注意避光。
[0016]本专利技术解决的技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种试剂盒在用于检测人体免疫状态中的应用。
[0017]优选的，前述的试剂盒在用于检测人体免疫状态中的应用，所述试剂盒用于检测外周血中免疫细胞的比例；
[0018]所述外周血中免疫细胞的比例通过各类免疫细胞表面独特的免疫表型特征区分。
[0019]优选的，前述的试剂盒在用于检测人体免疫状态中的应用，其检测样本来自人体外周血，所述人体包含各年龄段体检者。
[0020]优选的，前述的试剂盒在用于检测人体免疫年龄中的应用，其中所述的试剂盒用于检测人体外周血单个核细胞中T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的比值。
[0021]优选的，前述的试剂盒在用于检测人体免疫年龄中的应用，其中所述的其检测包括以下步骤：1)分离外周血单个核细胞；2)通过流式细胞仪或者质谱流式细胞仪检测样本外周血中的淋巴细胞亚群数量和比例；3)根据外周血中免疫细胞亚群的数量和比例，确定检测样本的免疫状态。
[0022]优选的，前述的试剂盒在用于监测人体免疫状态中的应用，所述的检测样品的流式检测制备包括以下步骤：
[0023]1)采集不少于100μL的人体外周血作为检测样本；样本采集后即刻检测，或者2～8℃冷藏，48h内检测；
[0024]2)从所述试剂盒分别吸取6种试剂0.5～20μL于流式管内，将所述的检测样本加入所述的流式管，振荡混匀，得第一预样品；
[0025]3)将所述的第一预样品于常温下避光孵育10～20min，优选15min，或2～8℃20～40min，优选30min，得第二预样品；
[0026]4)于所述的第二预样品中加入红细胞裂解液300μL～2mL，振荡混匀，于常温下避光孵育2min，得第三预样品；
[0027]5)将所述的第三预样品离心，得第四预样品；所述离心的离心条件为500
×
g，常温，5min；
[0028]6)弃所述的第四预样品的上清液，向弃上清液后剩余的样品中加入PBS缓冲液重悬，得检测样品；
[0029]7)将检测样品上流式细胞仪检测。
[0030]所述的检测样品的质谱流式检测制备包括以下步骤：
[0031]1)采集不少于5mL的人体外周血作为检测样本；样本采集后即刻检测，或者2～8℃冷藏，48h内检测；
[0032]2)将检测样本使用淋巴细胞分离液分离，获得单个核细胞；
[0033]3)进行细胞计数，取1
×
106～3
×
106细胞；
[0034]4)用PBS缓冲液配置终浓度0.25μM 194Pt(1mM)死活染液，取50μL～1.5mL 194Pt死活染液重悬细胞，优选100μL，冰上染色5min；
[0035]5)每个样本加入100μL～1.5mL FACS Buffer，优选500μL，重悬细胞，2～8℃离心400g/5min，弃上清；
[0036]6)每个样本加入20μL～1.5mL封闭液，优选50μL，重悬细胞，冰上封闭20min～1h，优选20min；
[0037]7)从所述试剂盒分别吸取6种金属抗体各0.5～20μL于离心管内，用封闭液将总体积调整至50μL；
[0038]8)将所述的检测样本加入所述的离心管，总体积为100μL，振荡混匀；
[0039]9)轻柔吹打混匀细胞，冰上染色20～60min，优选30min；
[0040]10)每个样本加入1mL FACS Buffer，重悬细胞，2～8℃离心4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中的试剂由CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56单克隆抗体组成；所述CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56单克隆抗体分别带有适用于流式细胞仪的六种荧光素或者适用于质谱流式的六种金属元素；六种荧光素或者金属元素互不相同。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光素选自Biotin、FITC、PE、TRITC、APC、Alexa Fluor 405、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 700、Alexa Fluor 750、APC/Alexa Fluor750、APC/Cy7、APC/eflour 750、APC/FireTM750、PerCP/Cy5.5、PerCP、PerCP
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eFlour 710、PE/Cy7、PE、PE/Cy5、PE/Dazzle 594、PE
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CF594、Pacific Blue、Brilliant Violet 421、Brilliant Violet 510、Brilliant Violet 570、Brilliant Violet 605、Brilliant Violet 650、Brilliant Violet 711、Brilliant Violet 750、Brilliant Violet 785、Super Bright 436、Super Bright 600、Super Bright 645、Super Bright 702、eFluor 450、eFluor 506、eFluor 660、eFluor 710、eFluor 780、BD Horizon BB515、BD Horizon PE
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CF594、BD Horizon BV421、BD Horizon BV480、BD Horizon BV510、BD Horizon BV605、BD Horizon BV650、BD Horizon BV711、BD Horizon BV786、BD Horizon BUV395、BD Horizon BUV496、BD Horizon BUV737、BD Horizon BUV805、BD Horizon APC R700、Cy3、Cy5、Cy7中的任意六种；所述的金属元素选自89Y、106Cd、110Cd、111Cd、112Cd、113Cd、114Cd、115In、116Cd、139La、141Pr、142Nd、143Nd、144Nd、145Nd、146Nd、147Sm、148Nd、149Sm、150Nd、151Eu、152Sm、153Eu、154Sm、155Gd、156Gd、157Gd、158Gd、159Tb、160Gd、161Dy、162Dy、163Dy、164Dy、165Ho、166Er、167Er、168Er、169Tm、170Er、171Yb、172Yb、173Yb、174Yb、175Lu、176Yb、197Au、198Pt、209Bi中的任意六种。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂，其组分如下：荧光或金属标记的CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD56，以体积百分含量计共0.5～97.5％。4.一种权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：季庆华，李鹏，王甜，
申请(专利权)人：浙江普罗亭健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：