吉富罗非鱼神经分泌肽GL及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术还提供了一种DNA序列，其编码所述的吉富罗非鱼神经分泌肽GL。本发明专利技术还提供了一种重组载体，其包含编码所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的DNA序列。本发明专利技术还提供了含有所述重组载体的转化微生物。本发明专利技术还提供了一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术还提供了一种DNA序列，其编码吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽。本发明专利技术还提供了包含该DNA序列的重组载体。本发明专利技术还提供了所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL用于制备调控动物摄食行为或血清化学指标的饲料添加剂的用途。本发明专利技术可应用于进一步提高罗非鱼水产养殖产量和水产品质量并降低生产成本。量和水产品质量并降低生产成本。量和水产品质量并降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
吉富罗非鱼神经分泌肽GL及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术及水生生物学领域，具体涉及的是吉富罗非鱼神经分泌肽GL、其编码基因、多克隆抗体的制备、成熟肽的重组表达及其应用。

技术介绍

[0002]脊椎动物的能量平衡指能量摄入和能量消耗保持平衡，这需要通过多种途径来调节，包括能量获得、散失和体重增长等。维持能量稳态是一个复杂的过程，相关研究主要集中在探讨能量平衡的控制和具体的食物摄入的分子机制等。20多年来的研究已经阐明，动物在摄食方面的饱食和饥饿信号来源于神经肽、内分泌系统、神经递质、细胞群和外源物质等。
[0003]在过去十多年间，越来越多的研究报道了在不同物种间发现的新型神经肽。神经分泌蛋白GL(Neurosecretory protein GL，NPGL)是2014年在家鸡下丘脑漏斗状核中新发现的一种小分子蛋白。它由182个氨基酸组成，其中包含了由80个氨基酸组成的成熟肽。因C端以甘氨酸和亮氨酸结尾Gly(G)
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Leu(L)
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NH2，因此命名神经分泌肽GL。荧光定量PCR(Real
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time PCR)、原位杂交及NPGL免疫组化分析显示，鸟类和啮齿类NPGL主要在下丘脑表达。家鸡的Npgl mRNA主要在下丘脑内侧乳突核和漏斗状核中表达，其他脑区的表达水平接近背景水平。哺乳类的Npgl mRNA在大脑和多个外周组织表达，小鼠的Npgl集中分布于脑区，包括端脑、间脑、中脑、小脑和下丘脑。Real
‑
time PCR、原位杂交、免疫组化结果显示啮齿动物NPGL主要在下丘脑MBH表达，经秋水仙碱阻断轴突转运后，大鼠NPGL仅仅在下丘脑后部弓状核和腹侧结节核中检测到。这些结果表明NPGL的功能主要局限于下丘脑的能量调节。
[0004]NPGL可能是负能量调节的信号，喂食高脂饮食表达水平下降，而禁食24h则显著上升。利用渗透泵进行大鼠脑室渗透注射NPGL 13天，喂食普通饲料虽然不影响其摄食和体重，但脂肪细胞增大，脂肪组织质量明显重于对照组。利用腺相关病毒使NPGL在大鼠下丘脑中过表达(AAV
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NPGL)，结果同样表现为不影响体重和促进脂肪累积。而在喂食高能量饲料时，大鼠脑室渗透NPGL及AAV
‑
NPGL均促进摄食量、体重、脂肪质量明显增加。NPGL还能够影响外周抑食欲因子瘦素和胰岛素的释放。总的来说，NPGL主要功能是参与摄食和能量代谢调控，促进摄食和脂肪累积。
[0005]罗非鱼是水产养殖产业重要的经济物种，具有适应能力强、生长迅速和出肉率高的优点，被联合国粮农组织认定为最值得推广的养殖品种之一。尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)已成为鱼类代谢研究的常用的模式鱼，而且罗非鱼具有很高的经济价值以及清晰的基因组信息。吉富罗非鱼由尼罗罗非鱼遗传改良(Genetically improved farmed tilapia,Gift tilapia)，是生长快抗病力强的高性能罗非鱼，对降低生产成本有积极的效果。生长优良的特性使吉富罗非鱼成为水产养殖中主要的罗非鱼品种。
[0006]研究鱼类能量平衡调节因子有助于了解其生长机制，进一步提高罗非鱼水产养殖产量和水产品质量并降低生产成本。NPGL是一种新发现的神经肽，研究表明其能促进摄食
和体重增长，并参与能量平衡调节，是潜在的促生长因子。但现研究主要集中于鸟类与啮齿动物，鱼类中还未有NPGL的相关报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL、其编码基因、多克隆抗体的制备、成熟肽的重组表达及其应用。
[0008]为了实现以上专利技术目的，本专利技术提供了一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0009]本专利技术还提供了一种DNA序列，其编码本专利技术所述的吉富罗非鱼神经分泌肽GL。优选地，所述DNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]本专利技术还提供了一种重组载体，其包含编码本专利技术所述的吉富罗非鱼神经分泌肽GL的DNA序列。优选地，该重组载体是基于真核表达载体的(包括但不限于酵母质粒载体，如毕赤酵母质粒载体)，或基于原核表达载体的(包括但不限于大肠杆菌质粒载体)。
[0011]本专利技术还提供了含有所述重组载体的转化微生物。所述微生物可以是真核生物或原核生物，优选但不限于为大肠杆菌或酵母菌(如毕赤酵母)。
[0012]本专利技术还提供了一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0013]本专利技术还提供了一种DNA序列，其编码所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽。优选地，编码所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽的DNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0014]本专利技术还提供了一种重组载体，其包含编码所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽的DNA序列。优选地，该重组载体是基于真核表达载体的(包括但不限于酵母质粒载体，如毕赤酵母质粒载体)，或基于原核表达载体的(包括但不限于大肠杆菌质粒载体)。本专利技术还提供了含有所述重组载体的转化微生物。所述微生物可以是真核生物或原核生物，优选但不限于为大肠杆菌或酵母菌(如毕赤酵母)。
[0015]本专利技术还提供了一种重组融合蛋白，其包含吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽。此外，该重组融合蛋白还可以包含表达载体融合标签。优选地，该表达载体融合标签包括但不限于His标签。
[0016]本专利技术还提供了所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL用于制备调控动物摄食行为的药物的用途。优选地，所述动物为鱼类，更优选为罗非鱼，包括但不限于吉富罗非鱼。
[0017]本专利技术还提供了所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽用于制备调控动物摄食行为的药物的用途。优选地，所述动物为鱼类，更优选为罗非鱼，包括但不限于吉富罗非鱼。
[0018]本专利技术还提供了所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL用于制备调控动物血清化学指标及能量代谢水平的药物的用途。优选地，所述动物为鱼类，更优选为罗非鱼，包括但不限于吉富罗非鱼。
[0019]本专利技术还提供了所述吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽用于制备调控动物血清化学指标及能量代谢水平的药物的用途。优选地，所述动物为鱼类，更优选为罗非鱼，包括但不限于吉富罗非鱼。
[0020]本专利技术还提供了一种兔源anti
‑
tNPGL多克隆抗体的制备方法，其步骤如下：以原
核表达的吉富罗非鱼神经分泌肽GL重组融合蛋白为抗原，对新西兰兔进行免疫注射四次后，收集全血并纯化，通过特性验证，获得anti
‑
tNPGL多克隆抗体。
[0021]本专利技术还提供了由上述制备方法制得的兔源anti
‑
tNPGL多克隆抗体。
[0022]本专利技术以吉富罗非鱼下丘脑总RNA为模板，利用RT
‑
PCR和5
’本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.一种DNA序列，其编码权利要求1所述的吉富罗非鱼神经分泌肽GL。3.根据权利要求2所述的DNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。4.一种重组载体，其包含权利要求2或3所述的DNA序列。5.含有权利要求4所述的重组载体的转化微生物。6.一种吉富罗非鱼神经分泌肽GL的成熟肽，其氨基酸序列如...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙彩云，黄金凤，郝雨晨，李文笙，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：