一种鱼类神经肽LPXRFa及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鱼类神经肽LPXRFa，属于基因工程领域。所述神经肽LPXRFa包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了该神经肽LPXRFa的编码基因及以该神经肽LPXRFa为前体的成熟多肽，以及它们的应用。利用本发明专利技术，可以对包括黄条鰤在内的鱼类进行人工催产，为推动渔业发展具有重要意义。动渔业发展具有重要意义。动渔业发展具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种鱼类神经肽LPXRFa及其编码基因和应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体地，涉及一种鱼类神经肽LPXRFa及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]脊椎动物的生殖活动主要受到脑
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垂体
‑
性腺轴的调控。通常认为下丘脑分泌的神经肽作用于垂体，影响垂体分泌产生GTH(包括LH和FSH)进而影响生殖调控。因为GTH在脊椎动物的生殖调控中起了主导作用，所以对于GTH分泌的调节一直以来都是生殖生理学家们研究和探索的重点。
[0003]LPXRFa是一种新型下丘脑神经肽，目前仅在金鱼等几种鱼类中鉴定出了lpxrfa基因，但是LPXRFa多肽的功能作用研究极少，且存在较大争议。
[0004]黄条鰤(Seriola lalandi)是一种全球性分布的海洋中上层暖温性远洋洄游鱼类，具有生长速度快、肉质鲜嫩、适合网箱养殖和循环水养殖等优点，黄条鰤逐渐成为世界范围内水产养殖的一个新品种。目前，尚没有关于黄条鰤LPXRFa肽的研究和应用。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术第一方面提供一种鱼类神经肽LPXRFa，包括SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
[0007]在本专利技术的一些实施方案中，所述神经肽LPXRFa由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成。
[0008]本专利技术第二方面提供一种本专利技术第一方面所述神经肽LPXRFa的编码基因lpxrfa，包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，所述编码基因lpxrfa由SEQ ID NO.1所示核苷酸序列组成。
[0010]本专利技术第三方面提供一种多肽，其是以本专利技术第一方面所述的神经肽LPXRFa为前体的成熟多肽。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，所述多肽具有SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，所述多肽由SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成。
[0013]本专利技术第四方面提供本专利技术第一方面所述的神经肽LPXRFa或本专利技术第二方面所述的编码基因lpxrfa或本专利技术第三方面所述的多肽在制备用于调控鱼类生殖的制剂中的应用。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，所述调控鱼类生殖是指对鱼类进行催产。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，通过向鱼类腹腔注射所述多肽对鱼类进行催
产。
[0016]在本专利技术中，所述鱼类包括但不限于黄条鰤。
[0017]本专利技术的有益效果
[0018]相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]本专利技术公开了一种鱼类神经肽LPXRFa，其可以对包括黄条鰤在内的鱼类进行催产，为推动黄条鰤等鱼类产业养殖规模和技术创新具有重要意义。
[0020]利用本专利技术的以神经肽LPXRFa为前体的成熟多肽对黄条鰤进行催产，可以显著上调垂体中GH和GTH亚基(包括LH和FSH)表达水平，从而促进鱼类催产。
附图说明
[0021]图1示出了黄条鰤LPXRFa基因在黄条鰤各个组织的表达分析，A：lpxrfa基因mRNA水平，B：lpxrfa
‑
r基因mRNA水平。
[0022]图2示出了LPXRFa成熟肽腹腔注射黄条鰤幼鱼后垂体gh、lhβ和fshβ表达的影响。A：gh基因mRNA水平，B：lhβ基因mRNA水平；C：fshβ基因mRNA水平。误差棒上不同字母表示差异显著。
具体实施方式
[0023]为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。
[0024]实施例
[0025]以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。
[0026]除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
[0027]那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
[0028]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0029]实施例1黄条鰤lpxrfa基因序列鉴定及雌雄组织表达分析
[0030]以黄条鰤脑cDNA为模板，根据其他物种lpxrfa序列设计兼并引物进行PCR扩增，从而获得黄条鰤lpxrfa cDNA序列。具体步骤如下：
[0031]1.黄条鰤lpxrfa基因克隆：
[0032]首先利用TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂提取脑组织总RNA；其次，按照PrimeScript
TM
RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书合成第一链cDNA；第三，按照TaKaRa Ex Taq所要求的反应条件进行黄条鰤lpxrfa cDNA片段PCR扩增。PCR反应条件：95℃5min；95℃30s，53℃30s，72℃50s，36个循环；72℃10min。将PCR产物
用1.5％的胶进行凝胶电泳检测，将符合目的基因大小的条带按照Gel DNA Recovery Kit
TM
(ZYMO)胶回收试剂盒说明书进行胶回收，测序得到534bp的片段，经blast比对证实为黄条鰤lpxrfa cDNA序列。
[0033]序列如下(SEQ ID NO.1)：
[0034][0035][0036]其编码的多肽，即LPXRFa多肽的氨基酸序列如下(SEQ ID NO.2)：
[0037][0038]2.黄条鰤lpxrfa基因表达分析
[0039]为了阐明lpxrfa基因是否参与了黄条鰤生殖调控，专利技术人分别取雌雄黄条鰤脑(brain)、垂体(pituitary)和性腺组织(gonad)，进行RNA提取及反转录得到cDNA，通过荧光定量PCR进行组织表达分析。
[0040]qPCR反应条件为：95℃30s；95℃5s，60℃20s，40个循环。通过比较Ct法进行数据分析。
[0041]结果如图1所示，雄性黄条鰤lpxrfa基因和其受体lpxrfa
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鱼类神经肽LPXRFa，其特征在于，包括SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列。2.一种权利要求1所述神经肽LPXRFa的编码基因lpxrfa，其特征在于，包括SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列。3.一种多肽，其特征在于，所述多肽为以权利要求1所述的神经肽LPXRFa为前体的成熟多肽。4.根据权利要求3所述的多肽，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王滨，柳学周，徐永江，姜燕，崔爱君，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：