非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达在利用铂类药物化疗中的应用制造技术

本发明专利技术提供了非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达在利用铂类药物化疗中的应用。本发明专利技术创造利用实时定量PCR的方法检测来自目标患者（NSCLC）的组织中基因ERCC1表达量，根据检测获得的‑△Ct对患者利用铂类药物进行化疗的敏感性进行预判。本方法弥补了先有技术不足，为非小细胞肺癌的治疗提供了新思路。

【技术实现步骤摘要】
非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达在利用铂类药物化疗中的应用
本专利技术涉及生物医学领域，特别是涉及非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达在利用铂类药物化疗中的应用。
技术介绍
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。非小细胞型肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80％，多数病例在确诊时已属晚期，虽然铂类新药化疗是目前治疗NSCLC的基本方案，但有效率亦低，且肿瘤病人存在不同程度的异质性、对化疗的药物敏感性也不一样，所以依据耐药基因及药敏选择药物化疗成为了趋势。铂类抗癌药物与癌细胞DNA分子作用，形成药物-DNA分子配合物，破坏DNA，从而抑制癌细胞分裂。目前，已有研究显示，核苷酸切除修复途径(NER)因具修复DNA的作用而与铂类耐药关系密切，其中关于ERCC1(excisionrepaircrosscomplementation1，切除修复交叉互补基因1)的研究较多，发现ERCC1表达水平的高低与非小细胞肺癌的发病及预后都有紧密的关系。ERCC1是重要的核苷酸外切修复酶之一，与XPF形成异源二聚体，在DNA单链受损处的5′端进行剪切而发挥功能。ERCC1的过表达可使停滞在G2/M期的损伤DNA迅速修复，导致其对顺铂耐药，ERCC1表达量直接影响DNA的修复，因此ERCC1可作为肿瘤细胞中药物-DNA结合物修复能力的检测标志。另外多项独立临床研究表明ERCC1的mRNA在肿瘤组织中的表达量可以用来预测NSCLC患者铂类药物的化疗疗效。即在早期术后患者中ERCC1高表达者生存时间显著延长，预后好。而在接受铂类化疗的NSCLC患者中，ERCC1阳性表达者反而较阴性者预后差，ERCC1阴性者无病生存期及总的生存期较阳性者明显延长，可作为指导预后的独立预测指标。当前，关于基因ERCC1表达量检测的研究也在不断进行中，刘辉等曾报道选用了β-actin作为参比基因，得到的表达量以SPSS统计分析高表达和低表达，并以免疫组化作为金标准与之比较，结果显示采用荧光定量PCR检测ERCC1mRNA水平，检测结果的特异性和敏感度均显著提高，但是该专利对于PCR结果并未进行深入的截断值(cutoff值)分析等，降低了分析结果的准确性。目前的方法只是局限于检测端，对于结果评价没有很明确，没有数据库排序来确定表达水平。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达在利用铂类药物化疗中的应用，用于解决现有技术中非小细胞肺癌的化疗中问题。本专利技术的构思：利用实时定量PCR技术检测大量来自目标患者(NSCLC)的组织中基因ERCC1表达量，并且对获得的数据进行分析，构建评分标准。对待检测患者进行实时定量PCR检测组织中基因ERCC1表达量，根据检测获得的-△Ct结合评分标准对患者利用铂类药物进行化疗的敏感性进行预判。ERCC1靶标基因mRNA序列参考GenBank:NM_202001.3。本专利技术的另一方面提供了ERCC1基因表达量在利用铂类药物治疗非小细胞型肺癌中的用途。进一步地，所述用途是指利用实时定量PCR的方法检测患者癌症组织中ERCC1的表达量，根据检测获得的-△Ct对治疗结果进行预判。进一步地，当所述所述-△Ct<-8.11，判断为低表达，提示患者预期获益率较高；当所述-△Ct为大于等于-8.11、且≤0.76，判断为中表达，提示患者预期获益率中等；当所述-△Ct>0.76，判断为低表达，提示患者预期获益率较低。本专利技术的一方面提供了一种用于检测ERCC1基因的试剂盒，所述试剂盒中含有探针和引物，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述探针的两端分别标记有荧光报告基团/荧光淬灭基团。进一步地，所述试剂盒中还含有用于检测内参基因的探针和引物。例如，人β-actin内参基因序列参考NM_001101.5。更进一步地，所述用于检测内参基因的探针的核苷酸序列如SEQIDNo.6，所述用于检测内参基因的引物包括正向引物和反向引物，所述用于检测内参基因的正向引物核苷酸序列如SEQIDNo.4所示，所述用于检测内参基因的反向引物核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。进一步地，试剂盒中所述荧光报告基团/荧光淬灭基团选自选自FAM、VIC或HEX、ROX、NED、CY3或CY5荧光报告基团BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1、Tamra和Quencher基团。进一步地，所述试剂盒还包括以下组分中的任一种或几种：PCR反应液、酶混合液、阳性对照、阴性对照。进一步地，所述PCR反应液包括缓冲液、MgCl2、dUTP和dNTPs；所述酶混合液包括Taq酶、反转录酶和UNG酶，所述Taq酶为热启动Taq酶，所述的反转录酶为依赖RNA的DNA聚合酶，所述的UNG酶为尿嘧啶-N-糖基化酶。进一步地，所述阳性对照选自以下以下任一中或几种：含有部分人ERCC1靶标基因mRNA序列的假病毒。例如，含有人ERCC1靶标基因mRNA序列的非复制型慢病毒。含有部分人β-actin基因mRNA序列的假病毒。例如，含有人β-actin基因mRNA序列的非复制型慢病毒。进一步地，所述阴性对照为无菌水。本专利技术的另一方面提供了上述试剂盒在制备治疗非小细胞型肺癌产品中的用途。如上所述，本专利技术的非小细胞肺癌患者ERCC1基因表达的应用，具有以下有益效果：(1)本专利技术的试剂盒结果评价明确，数据库排序来确定表达水平，图形化的结果分析，弥补了现有技术的不足。(2)本专利技术还具有灵敏度高、特异性好、可重复性强、检测通量大、防污染性强、检测结果快速客观、节约成本等优点。附图说明图1显示为试剂盒灵敏度实验结果图。图2显示为试剂盒特异性实验结果图。图3显示为ERCC1基因中等表达量检测结果示意图。图4显示为ERCC1基因高表达量检测结果示意图。图5显示为ERCC1基因低表达量检测结果示意图。图6显示为100例回顾性分析案例观察结果。具体实施方式以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。此外应理解，本专利技术中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ERCC1基因表达量在利用铂类药物治疗非小细胞型肺癌中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.ERCC1基因表达量在利用铂类药物治疗非小细胞型肺癌中的用途。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述用途是指利用实时定量PCR的方法检测患者癌症组织中ERCC1的表达量，根据检测获得的-△Ct对治疗结果进行预判。


3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
当所述-△Ct<-8.11，判断为低表达，提示患者预期获益率较高；
当所述-△Ct为大于等于-8.11、且≤0.76，判断为中表达，提示患者预期获益率中等；
当所述-△Ct>0.76，判断为低表达，提示患者预期获益率较低。


4.一种用于检测ERCC1基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有探针和引物，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，所述探针的两端分别标记有荧光报告基团/荧光淬灭基团。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有用于检测内参基因的探...

【专利技术属性】
技术研发人员：李万帅，孔祥宾，
申请(专利权)人：常州国药医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32