hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用，涉及分子生物学技术领域。本发明专利技术还公开了所述hsa_circ_0000284的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，其特异性引物核苷酸序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示。对38例神经母细胞瘤患者进行生存曲线分析发现，hsa_circ_0000284高表达的患者具有较差的术后生存率(P＝0.0107)。本发明专利技术通过检测hsa_circ_0000284的表达水平，进而对神经母细胞瘤患者做出预后判断，使hsa_circ_0000284可作为神经母细胞瘤临床诊断评估的重要指标。

【技术实现步骤摘要】
hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用
本专利技术涉及分子生物学
，更具体的说是涉及hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用。
技术介绍
神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)是儿童最常见的颅外实体瘤，起源于胚胎神经嵴的原始神经上皮细胞，可以沿着交感神经系统的任何地方发展，以肾上腺髓质最为常见。NB患儿占儿童肿瘤患者人数的8-10％，儿童肿瘤患者死亡人数的15％左右，大约50％在诊断时就已经出现肿瘤转移。早期NB可自发消退或单纯手术切除便能取得良好预后，但晚期NB患儿尽管采取了强化治疗措施，五年生存率仍低于40％。对神经母细胞瘤患者进行预后判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为小儿肿瘤外科领域亟待解决的重要课题。环状RNA(circRNA)是一类特殊的RNA分子，与传统的线性RNA不同，circRNA分子呈闭合环状结构，不易被RNA外切酶降解，表达更稳定。近年的研究表明，circRNA参与很多疾病的进展，尤其是肿瘤的发生。CircRNA具有细胞表达特异性、稳定性好及表达丰富等特点，使其作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及精准治疗靶点。因此，如何利用环状RNA精准实现对神经母细胞瘤预后判定是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种环状RNAhsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用，所述hsa_circ_0000284的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。优选的，所述预后制剂为试剂盒。优选的，所述试剂盒包括hsa_circ_0000284的特异性引物，且其核苷酸序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示。正向引物5'-TATGTTGGTGGATCCTGTTCGGCA-3’，SEQIDNO:2；反向引物5’-TGGTGGGTAGACCAAGACTTGTGA-3’，SEQIDNO:3。优选的，所述试剂盒还包括GAPDH内参引物，且其核苷酸序列如SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示。GAPDH内参引物：正向引物5’-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3’，SEQIDNO:4；反向引物5’-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3’，SEQIDNO:5。优选的，所述试剂盒还包括从神经母细胞瘤组织中抽提总RNA所用试剂、以总RNA为模板将hsa_circ_0000284逆转录为cDNA所用试剂和将cDNA实时定量PCR所用试剂。更优选的，所述从神经母细胞瘤组织中抽提总RNA所用试剂包括RNA稳定溶液、Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇和无酶水；所述以总RNA为模板将hsa_circ_0000284逆转录为cDNA所用试剂包括逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、逆转录酶和hsa_circ_0000284引物；优选的，还包括DNA酶；所述将cDNA实时定量PCR所用试剂包括实时荧光定量SYBR染料以及扩增酶。本专利技术的另一目的在于分析hsa_circ_0000284作为神经母细胞瘤预后标志物的可行性评估，包括以下步骤：S1：将收集的待测神经母细胞瘤瘤组织样本进行冻存，抽提总RNA；S2：除去基因组；S3：totalRNA逆转录；S4：实时定量PCR扩增hsa_circ_0000284在不同样本中的表达差异；S5：追踪患者生存状况，分析hsa_circ_0000284作为预后标志物的可行性。本专利技术通过荧光定量PCR对38例神经母细胞瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织进行分析发现，hsa_circ_0000284在肿瘤组织和癌旁组织中具有显著性表达差异(P＜0.001)；对38例神经母细胞瘤患者进行生存曲线分析发现，hsa_circ_0000284高表达的患者具有较差的术后生存率(P＝0.0107)。本专利技术通过检测hsa_circ_0000284的表达水平，进而对神经母细胞瘤患者做出预后判断，使hsa_circ_0000284可作为神经母细胞瘤临床诊断评估的重要指标。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为荧光定量PCR检测hsa_circ_0000284在神经母细胞瘤患者的肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平。图2为38例神经母细胞瘤患者肿瘤组织中hsa_circ_0000284表达量与神经母细胞瘤患者生存时间的关系。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：制备hsa_circ_0000284用于神经母细胞瘤患者预后的试剂盒(20次反应)1.RNA稳定溶液50ml2.异丙醇30ml3.三氯甲烷20ml4.Trizol30ml5.无酶水20ml*26.乙醇5ml7.gDNAEraser30μl8.5×gDNAEraserBuffer60μl9.RTPrimerMix30μl10.5×PrimeScriptBuffer2(含dNTPMixture)90ml11.PrimeScriptRTEnzymeMixI(含RNA酶抑制剂)20μl12.TBGreenPremixExTaqII50μl13.10μMhsa_circ_0000284特异性引物30μl正向引物5'-TATGTTGGTGGATCCTGTTCGGCA-3’，SEQIDNO:2；反向引物5’-TGGTGGGTAGACCAAGACTTGTGA-3’，SEQIDNO:3。14.10μMGAPDH特异性引物30μl：正向引物5’-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3’，SEQIDNO:4；反向引物5’-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3’，SEQIDNO:5。实施例2神经母细胞瘤患者肿瘤组织和癌旁组织中hsa_circ_0000284的检测1、样本预处理：分别收集待测神经母细胞瘤组织和癌旁组织存放于盛有RNA稳定溶液的冻存管中，放至-80℃冰箱备用。2、RNA的抽提：取适量标本于经180℃烘烤6-8h后的研钵中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用，其特征在于，所述hsa_circ_0000284的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.hsa_circ_0000284在制备神经母细胞瘤预后制剂中的应用，其特征在于，所述hsa_circ_0000284的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预后制剂为试剂盒。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括hsa_circ_0000284的特异性引物，且其核苷酸序列如SEQIDNO:2和SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：鹿洪亭，尉嘉斌，
申请(专利权)人：青岛市妇女儿童医院，
类型：发明
国别省市：山东;37