本申请公开了一种用于DNA甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒，对SEQ ID NO.37或者其部分区域或者其互补序列DNA甲基化水平的检测，可以用于食管癌患者的诊断及辅助诊断，尤其适用于食管鳞状细胞癌的检测诊断/辅助诊断，可用于不同分期食管癌患者，包括高级别瘤变、早期食管癌、进展期食管癌，因而本申请的检测试剂盒可用于食管癌的早期筛查，其灵敏度可达70％甚至97％以上，具有良好的灵敏度和特异性，对于早日治疗介入及改善患者预后具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
用于DNA甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒
本申请涉及生物医药
，具体涉及一种用于DNA甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒。
技术介绍
食管癌是发生在食管黏膜上皮及食管腺上皮的恶性肿瘤，是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。食管癌分为鳞状细胞癌和腺癌两种亚型，其中鳞状细胞癌占绝大部分，90％的食管癌病例为鳞状细胞癌。两种亚型的食管癌在地理分布上呈现不同的差异，比如在美国，更多食管癌患者为食管腺癌，在中国，大部分食管癌患者为鳞状细胞癌。相当多食管癌患者在确诊时已经是中晚期，其预后较差。食管癌的早期诊断能明显提高治疗效果并改善患者的预后，食管癌的癌前病变，包括鳞状细胞癌的癌前病变和腺癌的癌前病变，即鳞状上皮和腺上皮的上皮内瘤变/异型增生。鳞状上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管黏膜鳞状上皮内不同层次的异型鳞状细胞为特征的癌前病变，根据病变累及层次，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。腺上皮的上皮内瘤变/异型增生，是指以食管腺上皮不同程度的细胞异型性和结构异常为特征的癌前病变，主要见于Barrett食管，根据细胞异型性和结构异常的程度，分为低级别上皮内瘤变/异型增生和高级别上皮内瘤变/异型增生。内镜和细胞活检等技术相结合提高了高危人群中食管癌的检出率，但患者接受度低、且操作不够灵活，近年来分子生物学方面的进展为开发简便、有效的早期诊断方法提供了新的方向，食管癌组织中存在多基因、多位点的甲基化，并且在食管癌发生的早期即出现DNA甲基化的改变，因此，甲基化改变有望作为食管癌早期诊断的标志物，从DNA甲基化角度探索食管癌诊断策略已成为一种新的思路。一般而言，与癌症相关的DNA甲基化改变指的是CpG岛的甲基化改变，值得注意的是，尽管CpG岛内包含多个CpG二核苷酸位点，但并非每个位点都与癌症的发生发展有同等的相关性。现有技术中以某基因的DNA甲基化水平作为疾病诊断依据时，通常以基因整体作为靶序列，但这种情况下靶序列中的CpG岛较长，且与疾病的相关性存在差异，导致检测的特异性及灵敏度降低。因此，在开发癌症检测标记物时，需要找到灵敏性和特异性均较好的CpG位点。
技术实现思路
本申请提供一种用于DNA甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒，可以用于食管癌的诊断尤其是食管癌的早期筛查。本申请提供如下技术方案：一种用于DNA甲基化检测的试剂，包括能够特异性检测生物样本中以下(a)-(c)中至少任一核苷酸序列的甲基化水平的检测试剂：(d)SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的全长或其任意部分区域；(e)与SEQIDNO.37所示的核苷酸序列互补序列的全长或其任意部分区域；(f)与(a)或(b)至少80％以上同一性的核苷酸序列。在本申请的一些实施例中，所述互补序列是与SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的每个碱基一一对应互补所形成的核苷酸序列。在本申请的一些实施例中，所述(a)或(b)中部分区域为SEQIDNO.37所示的核苷酸序列或其互补序列中包括CpG二核苷酸位点的区域，所述部分区域的核苷酸序列长度为小于908bps。在本申请的一些实施例中，所述(a)中的部分区域为SEQIDNO.37中的第1-304位所示的核苷酸序列。在本申请的一些实施例中，所述检测试剂包括核酸分子。在本申请的一些实施例中，所述核酸分子包括可PCR扩增(a)、(b)或(c)的核苷酸序列的引物对。在本申请的一些实施例中，所述部分区域为SEQIDNO.38-SEQIDNO.49任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。在本申请的一些实施例中，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：(13)SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核酸分子；(14)SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核酸分子；(15)SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的核酸分子；(16)SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的核酸分子；(17)SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示的核酸分子；(18)SEQIDNO.16和SEQIDNO.17所示的核酸分子；(19)SEQIDNO.19和SEQIDNO.20所示的核酸分子；(20)SEQIDNO.22和SEQIDNO.23所示的核酸分子；(21)SEQIDNO.25和SEQIDNO.26所示的核酸分子；(22)SEQIDNO.28和SEQIDNO.29所示的核酸分子；(23)SEQIDNO.31和SEQIDNO.32所示的核酸分子；(24)SEQIDNO.34和SEQIDNO.35所示的核酸分子；在本申请的一些实施例中，所述探针选自SEQIDNO.3、SEQIDNO.6、SEQIDNO.9、SEQIDNO.12、SEQIDNO.15、SEQIDNO.18、SEQIDNO.21、SEQIDNO.24、SEQIDNO.27、SEQIDNO.30、SEQIDNO.33、SEQIDNO.36中的一种或多种。在本申请的一些实施例中，所述试剂还包括能差异修饰甲基化DNA和非甲基化DNA的反应试剂。在本申请的一些实施例中，所述反应试剂为重亚硫酸盐。在本申请的一些实施例中，所述生物样本为血液样本、唾液样本、组织样本或食管来源的细胞样本；所述生物样本为来源于哺乳动物的离体生物样本。相应地，本申请还提供一种用于食管癌诊断或辅助诊断的检测试剂盒，其包括如上所述的用于DNA甲基化水平检测的试剂。在本申请的一些实施例中，所述检测试剂盒还包括内参基因、对照物和缓冲液。在本申请的一些实施例中，所述食管癌包括食管鳞状细胞癌和食管腺癌。有益效果：本申请提供的用于DNA甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒，对特定的核苷酸序列DNA甲基化水平的检测，可以用于食管癌患者的诊断及辅助诊断，尤其适用于食管鳞状细胞癌的检测诊断/辅助诊断，可用于不同分期食管癌患者，包括高级别瘤变、早期食管癌、进展期食管癌，因而本申请的检测试剂盒可用于食管癌的早期筛查，其灵敏度可达70％甚至97％以上，具有良好的灵敏度和特异性，对于早日治疗介入及改善患者预后具有重要意义。具体实施方式下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。本申请实施例提供一种DNA甲基化检测试剂及食管癌检测试剂盒。以下分别进行详细说明。需说明的是，以下实施例的描述顺序不作为对实施例优选顺序的限定。另外，在本申请的描述中，术语“包括”是指“包括但不限于”。本申请实施例首先提供一种DNA甲基化检测用的试剂，包括能够特异性检测生物样本中以下(a)-(c)中至少任一DNA序列的甲基化水平的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于DNA甲基化水平检测的试剂，其特征在于，包括能够特异性检测生物样本中以下(a)-(c)中至少任一目标核苷酸序列中CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂：/n(a)SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列的全长或其任意部分区域；/n(b)与SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列互补序列的全长或其任意部分区域；/n(c)与(a)或(b)至少80％以上同一性的核苷酸序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于DNA甲基化水平检测的试剂，其特征在于，包括能够特异性检测生物样本中以下(a)-(c)中至少任一目标核苷酸序列中CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂：
(a)SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的全长或其任意部分区域；
(b)与SEQIDNO.37所示的核苷酸序列互补序列的全长或其任意部分区域；
(c)与(a)或(b)至少80％以上同一性的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述互补序列是与SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的每个碱基一一对应互补所形成的核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述(a)或(b)中的部分区域为SEQIDNO.37所示的核苷酸序列或其互补序列中包括CpG二核苷酸位点的区域，所述部分区域的核苷酸序列长度为小于908bps。
4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述(a)中的部分区域为SEQIDNO.37中的第1-304位所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于所述目标核苷酸序列为SEQIDNO.38-SEQIDNO.49任一所示的核苷酸序列或其中至少两者所示的核苷酸序列的组合。
6.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述检测试剂包括核酸分子。
7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述核酸分子包括可PCR扩增所述(a)、(b)或(c)所示核苷酸序列的引物对。
8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于，所述引物对选自以下的组中的一组或多组：
(1)SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核酸分子；
(2)SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核酸分子；
(3)SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的核酸分子；
(4)SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的核酸分子；
(5)SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示的核酸分子；...
【专利技术属性】
技术研发人员：张良禄，周俊，董兰兰，熊杨辉，李婷婷，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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