【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于无载体3D球体悬浮培养中视网膜神经元生成的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求2018年9月7日提交的美国临时专利申请号62/728,088的优先权和权益,其公开通过引用全文的方式纳入本文。
本公开总体上涉及用于由例如人多能干细胞生成视网膜神经元的方法和组合物。背景年龄相关联的黄斑变性和遗传性视网膜变性是发达国家中导致无法治疗的失明的主要原因[1]。它们有一个共同的最终病理生理学,即光敏光受体(photoreceptor)丢失,其由视杆细胞和视锥细胞组成。对于缺少有效治疗选择的两个患者群体来说,丢失的光受体的替代可以提供一种潜在的治疗策略[1-3]。大多数黄斑疾病都涉及光受体和视网膜色素上皮细胞(RPE)的丢失,后者支持和维持视网膜外层光受体的健康。已经公开了临床试验中移植人胚胎干细胞(hESC)衍生的RPE来治疗患有干性年龄相关联的黄斑变性(AMD)和Stargardt病,并显示出安全性和有效性的证据,包括在4年后的评估[4-6],但在尚未在人临床试验中对衍生自人多能干细胞(hPSC)的光受体进行此类研究[7]。开发有效的光受体移植疗法的主要要求是建立稳健的方案,其允许由可再生来源(诸如hESC和人诱导型多能干细胞)生成大量同质的光受体前体细胞(PRPC),因为形成人组织的PRPC供应有限,主要存在伦理障碍[8]。在过去的数几十年中,由多种鼠和人PSC来源以不同程度的效率体外生成视网膜细胞类型的能力方面取得了显著的进展,包括PRPC和光受体,并在使用不同动物模型的临床前移 ...
【技术保护点】
1.一种用于体外产生光受体前体细胞的方法,其包括:/n(a)三维(3D)球体培养多个多能干细胞以生成多个第一球体,所述多个第一球体包含眼早期和晚期定向视网膜神经祖细胞(CRNP);/n(b)监测球体大小,直到第一球体的直径达到约300-500μm的平均大小;/n(c)将所述第一球体解离成第一多个基本单细胞;/n(d)3D球体培养所述第一多个基本单细胞以生成多个第二球体,所述多个第二球体包含光受体前体细胞(PRPC);/n(e)监测球体大小,直到第二球体的直径达到约300-500μm的平均大小;/n(f)将所述第二球体解离成第二多个基本单细胞;/n(g)3D球体培养所述第二多个基本单细胞以生成多个第三球体,所述多个第三球体包含有丝分裂后PRPC;和/n(h)任选地,进一步将有丝分裂后PRPC分化为光受体样细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180907 US 62/728,0881.一种用于体外产生光受体前体细胞的方法,其包括:
(a)三维(3D)球体培养多个多能干细胞以生成多个第一球体,所述多个第一球体包含眼早期和晚期定向视网膜神经祖细胞(CRNP);
(b)监测球体大小,直到第一球体的直径达到约300-500μm的平均大小;
(c)将所述第一球体解离成第一多个基本单细胞;
(d)3D球体培养所述第一多个基本单细胞以生成多个第二球体,所述多个第二球体包含光受体前体细胞(PRPC);
(e)监测球体大小,直到第二球体的直径达到约300-500μm的平均大小;
(f)将所述第二球体解离成第二多个基本单细胞;
(g)3D球体培养所述第二多个基本单细胞以生成多个第三球体,所述多个第三球体包含有丝分裂后PRPC;和
(h)任选地,进一步将有丝分裂后PRPC分化为光受体样细胞。
2.如权利要求1所述的方法,其中,所述多能干细胞是胚胎干细胞或诱导型多能干细胞,优选来自人类。
3.如权利要求1所述的方法,其中,步骤(a)、(d)和(g)包括在旋转瓶或搅拌罐生物反应器中培养,优选在连续搅拌下。
4.如权利要求1所述的方法,其中,步骤(a)还包括逐渐适应神经诱导培养基并在其中进行培养,优选NIM-3D(神经诱导培养基-3D)基础培养基,其包含DMEM/F12,具有HEPES,N2和B27无血清补充剂,青霉素/链霉素,MEM非必需氨基酸和葡萄糖,补充有一种或多种下述物质:音猬因子、肝素、IWR-1e、SB431542、LDN193189和IGF1。
5.如权利要求4所述的方法,其还包括提供SB431542、LDN193189和IGF1第一时间段,提供IWR-1e第二时间段,所述第二时间段短于所述第一时间段,和提供音猬因子或肝素第三时间段,所述第三时间段短于所述第二时间段。
6.如权利要求5所述的方法,其中,所述第一时间段为10-20天,优选12-18天,更优选16天。
7.如权利要求5所述的方法,其中...
【专利技术属性】
技术研发人员:冯强,G·埃尔森,卢世江,
申请(专利权)人:赫贝细胞股份有限公司,
类型:发明
国别省市:美国;US
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