一种胎盘造血干细胞的扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种胎盘造血干细胞的扩增方法，包括以下步骤：（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在基础培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素成分得到；（2）取活化后的胎盘造血干细胞接种于扩增培养基B中，连续培养12天；所述扩增培养基B为在基础培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL‑3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分得到。本发明专利技术提供的胎盘造血干细胞的扩增方法，在无需饲养层细胞及外源性血清的情况下实现胎盘造血干细胞在体外的快速扩增，为体外获取大量的胎盘造血干细胞提供新途径。

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘造血干细胞的扩增方法
本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种胎盘造血干细胞的扩增方法。
技术介绍
造血干细胞（Hematopoieticstemcells,HSCs）是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义。其广泛应用于治疗恶性血液病、重型再生障碍性贫血、代谢病等。同时，造血干细胞移植也是为癌症患者重建正常的造血和免疫功能的有效手段。据研究表明胎盘组织中造血干细胞的含量是脐带血中造血干细胞含量的8-10倍，且胎盘作为分娩后的废弃物，不需要侵入性过程来获取，且其造血干细胞的含量和增殖能力也具有明显优势。胎盘造血干细胞在自体器官修复、克隆移植，美容，遗传类疾病治疗，及心脏病、肝病、糖尿病等多个等领域拥有无限前景。随着胎盘造血干细胞在各领域的应用，直接在胎盘中分离得到的胎盘造血干细胞在数量上远不能满足科研和临床的需求，需要在体外对分离得到的胎盘造血干细胞进行扩增，以获取足够数量的胎盘造血干细胞。现有的胎盘造血干细胞的培养基成分复杂，需要饲养层细胞以及血清等存在安全隐患的成分，并且培养过程操作繁琐，胎盘造血干细胞增殖效率低，为获得足够数量的胎盘造血干细胞有必要对胎盘造血干细胞的培养过程进行改进。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种胎盘造血干细胞的扩增方法，过程中不添加血清，无需饲养层细胞，易于操作，为胎盘造血干细胞的体外扩增提供新途径。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种胎盘造血干细胞的扩增方法，包括以下步骤：（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在基础培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素成分得到；（2）取活化后的胎盘造血干细胞接种于扩增培养基B中，连续培养12天；所述扩增培养基B为在基础培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分得到。进一步地，所述异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸10-15ng/mL、黄芪提取物5-10ng/mL、赤霉素1-5ng/mL。进一步地，所述异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸12ng/mL、黄芪提取物7ng/mL、赤霉素3.5ng/mL。进一步地，所述六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖在培养基B中的浓度为：六钛酸钾晶须10-20ng/mL、螺二醇7.5-10ng/mL、IL-320-30ng/mL、FLT310-20ng/mL、促血小板生成素12-17ng/mL、海藻糖1-5μg/mL。进一步地，所述六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖在培养基B中的浓度为：六钛酸钾晶须15ng/mL、螺二醇8.5ng/mL、IL-324ng/mL、FLT315ng/mL、促血小板生成素14ng/mL、海藻糖3μg/mL。进一步地，所述基础培养基为无血清StemSpan培养基。进一步地，胎盘造血干细胞在培养基A中的密度为1-5×105个/mL，在培养基B中的密度为1-5×104个/mL。进一步地，步骤（1）中连续培养48h，在培养24h时进行半量换液，。进一步地，步骤（2）中在连续培养过程中每2-3天更换一次培养基。进一步地，步骤（1）和步骤（2）中均在37℃，5%CO2的条件下进行细胞培养。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种胎盘造血干细胞的扩增方法，在扩增过程中先采用添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素的培养基A对体外分离得到的胎盘造血干细胞进行活化，使细胞进入增殖状态。然后再用添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖等成分的培养基B对活化后的胎盘造血干细胞进行扩增，在无需饲养层细胞及外源性血清的情况下实现胎盘造血干细胞在体外的快速扩增，为体外获取大量的胎盘造血干细胞提供新途径。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。实施例1一种胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，置于T75培养瓶中，胎盘造血干细胞在培养基A中的密度为3×105个/mL，将培养瓶放入37℃，5%CO2的培养箱中进行细胞培养，在培养24h时进行半量换液，连续培养48h，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在无血清StemSpan培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素、成分得到，异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸12ng/mL、黄芪提取物7ng/mL、赤霉素3.5ng/mL；（2）取步骤（1）活化后的胎盘造血干细胞经离心去除培养基A后用PBS清洗两次，然后接种于T75培养瓶的扩增培养基B中，细胞在培养基B中的密度为2×104个/mL，在37℃，5%CO2的培养箱中连续培养12天，过程中每2天更换一次培养基；扩增培养基B为在无血清StemSpan培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分，各成分在培养基B中的浓度为：六钛酸钾晶须15ng/mL、螺二醇8.5ng/mL、IL-324ng/mL、FLT315ng/mL、促血小板生成素14ng/mL、海藻糖3μg/mL。实施例2一种胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，置于T75培养瓶中，胎盘造血干细胞在培养基A中的密度为1×105个/mL，将培养瓶放入37℃，5%CO2的培养箱中进行细胞培养，在培养24h时进行半量换液，连续培养48h，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在无血清StemSpan培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素、成分得到，异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸10ng/mL、黄芪提取物5ng/mL、赤霉素1ng/mL；（2）取步骤（1）活化后的胎盘造血干细胞经离心去除培养基A后用PBS清洗两次，然后接种于T75培养瓶的扩增培养基B中，细胞在培养基B中的密度为1×104个/mL，在37℃，5%CO2的培养箱中连续培养12天，过程中每2天更换一次培养基；扩增培养基B为在无血清StemSpan培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分，各成分在培养基B中的浓度为：六钛酸钾晶须10ng/mL、螺二醇7.5ng/mL、IL-320ng/mL、FLT310ng/mL、促血小板生成素12ng/mL、海藻糖1μg/mL。实施例3一种胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在基础培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素、成分得到；/n（2）取活化后的胎盘造血干细胞接种于扩增培养基B中，连续培养12天；所述扩增培养基B为在基础培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取体外分离得到的胎盘造血干细胞重悬于培养基A中，经培养后得到活化的胎盘造血干细胞；所述培养基A为在基础培养基中添加异烟酸、黄芪提取物、赤霉素、成分得到；
（2）取活化后的胎盘造血干细胞接种于扩增培养基B中，连续培养12天；所述扩增培养基B为在基础培养基中添加六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖成分得到。


2.根据权利要求1所述胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，所述异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸10-15ng/mL、黄芪提取物5-10ng/mL、赤霉素1-5ng/mL。


3.根据权利要求1所述胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，所述异烟酸、黄芪提取物和赤霉素在培养基A中的浓度为：异烟酸12ng/mL、黄芪提取物7ng/mL、赤霉素3.5ng/mL。


4.根据权利要求1所述胎盘造血干细胞的扩增方法，其特征在于，所述六钛酸钾晶须、螺二醇、IL-3、FLT3、促血小板生成素、海藻糖在培养基B中的浓度为：六钛酸钾晶须10-20ng/mL、螺二醇7.5-10ng/mL、IL-320-30ng/mL、FLT310-20ng/mL...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏明军，余里，余明友，
申请(专利权)人：郑州沃冠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41