一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法技术

本发明专利技术公开了一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，包括以下步骤：S1：将hESC与hESC‑MSC按照比例进行混样并标明组份；S2：各组细胞样品进行RNA提取：S3：RNA定量并反转录以得到反转录产物；S4：H‑ESRG基因引物设计，该引物为跨内含子引物；S5：采用qPCR检测反转录产物中H‑ESRG基因mRNA水平的表达。本发明专利技术使用H‑ESRG基因检测人hESC残留，并采用低成本的SYBR Green的qPCR方法检测，测得人hESC到最低检测限为0.0025％。在测得最低检测限相同情况下，使用本检测方法所用的成本较低，相关系数接近1，准确性高。

【技术实现步骤摘要】
一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法
本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法。
技术介绍
人胚胎干细胞相关基因(humanembryonicstemcellrelatedgene,H-ESRG)蛋白位于人胚胎干细胞(humanembryonicstemcell,hESC)细胞核内。H-ESRG是一种新的、敏感的和特异性的胚胎癌的生物标志物，在hESC的未分化状态或自我更新方面发挥了重要作用。实时聚合酶链反应(qPCR)是基于PCR的革命性方法，这一技术是PCR高灵敏度和实时检测相结合的结果。实时定量聚合酶链反应的独特特征就是把目的基因的扩增与荧光信号联系起来，并将其量化。在定量基因表达分析,目前有两种方法最受欢迎,荧光染料法(SYBRGreen)和寡核苷酸探针(TaqMan)。在分化细胞中未分化细胞残留问题，多数文献使用Taqman探针法，且检出的分化细胞中未分化细胞的最低检测线为0.0025％。Taqman探本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：将hESC与hESC-MSC按照比例进行混样并标明组份；/nS2：各组细胞样品进行RNA提取，得到总RNA：/nS3：RNA定量并反转录以得到反转录产物；/nS4：H-ESRG基因引物设计，该引物为跨内含子引物；/nS5：采用qPCR检测反转录产物中H-ESRG基因mRNA水平的表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将hESC与hESC-MSC按照比例进行混样并标明组份；
S2：各组细胞样品进行RNA提取，得到总RNA：
S3：RNA定量并反转录以得到反转录产物；
S4：H-ESRG基因引物设计，该引物为跨内含子引物；
S5：采用qPCR检测反转录产物中H-ESRG基因mRNA水平的表达。


2.根据权利要求1所述的一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，所述S4中基因引物包括H-ESRG-F和H-ESRG-R。


3.根据权利要求2所述的一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，所述H-ESRG-F的基因序列为TGGGATGGAGCCATAGAAGT。


4.根据权利要求2所述的一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，所述H-ESRG-R的基因序列为TGGGTCTTTCAAGAAGTTCCTC。


5.根据权利要求1所述的一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，所述S5中在qPCR反应的扩增程序后采集熔解曲线，并获得扩增图，检测特异性扩增及引物二聚体出现。


6.根据权利要求1所述的一种低成本且高灵敏度的体外检测hESC分化来源功能细胞中hESC残留的方法，其特征在于，所述S1中的样品分组包括A组、B组、C组、D组、hESC组及hESC-MSC组，其中A组中hESC占MSC百分比为0.0025％，B组中hESC占...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹哲厚，吴立前，王梦岩，
申请(专利权)人：杭州原生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33