一种抗肿瘤的白桦醇衍生物、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种抗肿瘤的白桦醇衍生物、制备方法及其应用，制备方法包括：反应器中加入白桦醇，通过酰氯磺化，再与吲哚乙酸反应，得到白桦醇衍生物粗品，将粗品再经过硅胶柱纯化、高效液相色谱分离纯化，最终得到白桦醇衍生物；白桦醇衍生物对对人卵巢癌细胞(SKOV3)、人白血病细胞(K562)、人黑色素瘤细胞(A875)具有显著的抑制活性，其中，白桦醇衍生物对人黑色素瘤细胞(A875)的半数抑制浓度(IC

Antitumor betulin derivative, preparation method and application thereof

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤的白桦醇衍生物、制备方法及其应用
本专利技术属于化学药物合成
，涉及一种抗肿瘤的白桦醇衍生物、制备方法及其应用。
技术介绍
白桦醇又名白桦醇酯、桦木醇，属于羽扇豆烷类五环三萜，是一种广泛存在于各种植物中的天然产物。具有广泛的生物活性，尤其对肿瘤细胞的增殖具有优良的抑制活性，以此得到了相关
人员的更多的青睐，但由于白桦醇的选择性低，生物利用度不高，溶解性也达不到临床应用的需求。为使天然产物发挥理想的功效，人们尝试对其结构经行改性，以完善其性质。为此，人们做了这方面的大量研究，例如，Chrobak等(Molecules，2016，21(9):1123－1135)在白桦醇结构中引入磷酸酯，获得一系列具有磷酸酯结构的白桦醇，虽然这些类化合物具有较好的抗肿瘤活性，但是分子中含有过多的酯基，使化合物在水中的溶解性下降，未达到白桦醇结构改性的主要目的；Bebenek等(MedicinalChemistryResearch，2017，26(1):1－8)等在白桦醇28位羟基上连接一些列长短、饱和程度不同的烃基链，但是这些化合物在杀死肿瘤细胞的同时，对正常结肠细胞造成一定的损伤，因此此方法得到的白桦醇衍生物存在缺陷。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种抗肿瘤的白桦醇衍生物，其衍生物具有式(I)分子结构：本专利技术的一个目的在于提供抗肿瘤的白桦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：(1)以白桦醇为原料，在室温条件下加入有机溶剂A充分溶解，在温度为-10～0℃下缓慢加入草酰氯，加入2～3滴DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，升温至室温反应2～5h，反应结束，去除多余的氯化亚砜，得到化合物1；(2)将化合物1溶解在有机溶剂B中，加入吲哚乙酸，室温下搅拌反应4～8h，薄层色谱显示反应无进展。在反应液中加入碳酸氢钠溶液，再用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，有机相先后用饱和食盐水、5％盐酸溶液洗涤，干燥、浓缩，粗产物用硅胶柱分离纯化得目标产物粗品，将目标产物粗品经高效液相色谱分离纯化，即得目标产物；上述制备方法，步骤(1)中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、丙酮、乙腈、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或乙醚；所述白桦醇与所述草酰氯的投料摩尔比为1:2.0～4.0；上述制备方法，步骤(2)中，所述有机溶剂B为二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、二甲基亚砜或丙酮；所述吲哚乙酸与化合物2的投料摩尔比为1.2:1.8～2.5:3.0；所述硅胶柱洗脱液采用石油醚和丙酮的混合液体系，所述石油醚和丙酮的体积比为10～20:1；所述高效液相色谱分离纯化条件如下：色谱柱：C18柱或C8柱；流动相：甲醇-水溶液，甲醇与水的体积比为68:36；检测波长为278～320nm；柱温：25～40℃；每次进样量为0.5～1.2mL；流速为10～15mL/min，收集40～55min的色谱峰，多次累计后干燥即得目标产物。根据上述制备方法的一种优选，包括如下步骤：(1)以15g白桦醇为原料，在室温条件下加入丙酮，充分溶解，在温度为-5～0℃下缓慢加入4.5g草酰氯，加入2～3滴DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，升高温度反应5h，反应结束，去除多余的氯化亚砜，得到化合物1；(2)将7.5g化合物1溶解在二氯甲烷中，加入6.4g吲哚乙酸，室温下搅拌反应6h，薄层色谱显示反应无进展。在反应液中加入碳酸氢钠溶液，再用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，有机相先后用饱和食盐水、5％盐酸溶液洗涤，干燥、浓缩成浸膏，将浸膏经硅胶柱层析洗脱，以体积为15:1的石油醚和丙酮混合液进行梯度洗脱，收集洗脱液浓缩，得目标产物粗品；将上述目标产物粗品使用高效液相色谱进行分离，色谱条件为：以甲醇-水溶液为流动相，C18柱为固定相，流动相流速为15mL/min，紫外检测波长为285～290nm，柱温为25℃，每次进样量为1.0～1.2mL，收集停留时间为44.5min的色谱峰，多次累计后，用无水硫酸钠干燥，即得目标产物。本专利技术衍生物用于治疗人卵巢癌、人白血病和人黑色素瘤。本专利技术衍生物用于制备抗人黑色素瘤药物。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的白桦醇衍生物对人卵巢癌细胞(SKOV3)、人白血病细胞(K562)、人黑色素瘤细胞(A875)具有显著的抑制活性，其中，白桦醇衍生物对人黑色素瘤细胞(A875)的半数抑制浓度(IC50)为12.39μg/mL，其效果略与阳性药物顺铂(IC50＝10.67μg/mL)相当，说明本专利技术的化合物可用于制备抗人黑色素瘤的药物。附图说明图1：实施例1为抗肿瘤白桦醇衍生物核磁共振氢谱图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细描述，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于下述实施例。实施例1(1)以15g白桦醇为原料，在室温条件下加入丙酮，充分溶解，在温度为-5～0℃下缓慢加入4.5g草酰氯，加入2～3滴DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，升高温度反应5h，反应结束，去除多余的氯化亚砜，得到化合物1；(2)将7.5g化合物1溶解在二氯甲烷中，加入6.4g吲哚乙酸，室温下搅拌反应6h，薄层色谱显示反应无进展。在反应液中加入碳酸氢钠溶液，再用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，有机相先后用饱和食盐水、5％盐酸溶液洗涤，干燥、浓缩成浸膏，将浸膏经硅胶柱层析洗脱，以体积为15:1的石油醚和丙酮混合液进行梯度洗脱，收集洗脱液浓缩，得目标产物粗品；将上述目标产物粗品使用高效液相色谱进行分离，色谱条件为：以甲醇-水溶液为流动相，C18柱为固定相，流动相流速为15mL/min，紫外检测波长为285～290nm，柱温为25℃，每次进样量为1.0～1.2mL，收集停留时间为44.5min的色谱峰，多次累计后，用无水硫酸钠干燥，即得目标产物。产率为79.09％。核磁共振氢谱检测：将样品放入样品管中，用注射器取0.5mLCDCL3(氘代氯仿)注入样品管，使样品充分溶解。要求样品与试剂充分混合，溶液澄清、透明、无悬浮物或其他杂质，经核磁共振鉴定，得到核磁共振氢谱图，结果见如图1。实验例2本专利技术化合物的抗肿瘤药学研究(1)体外试验：将白桦醇衍生物与白桦醇分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解，再用培养液(含10％胎牛血清的RPMI1640培养液)配制成浓度为2mg/mL的储备液置于-20℃保存。临用前，用培养液稀释白桦醇衍生物与白桦醇的终浓度分别为2.5μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、25.0μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL，且其中任意稀释供试液中DMSO终浓度控制在0.01％以下。将人胃腺癌细胞株(BGC-823)、人卵巢癌细胞株(SKOV3)、人白血病细胞株(K562)、人食道癌细胞株(Ec9706)、人黑色素瘤细胞株(A875)作为测试细胞株分别用0.25％的胰酶消化后，悬浮于含10％胎牛血清的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤的白桦醇衍生物，其特征在于，所述衍生物具有式(I)分子结构：/n

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤的白桦醇衍生物，其特征在于，所述衍生物具有式(I)分子结构：

。


2.一种抗肿瘤白桦醇的衍生物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以白桦醇为原料，在室温条件下加入有机溶剂A充分溶解，在温度为-10～0℃下缓慢加入草酰氯，加入2～3滴DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，升温至室温反应2～5h，反应结束，去除多余的氯化亚砜，得到化合物1；
(2)将化合物1溶解在有机溶剂B中，加入吲哚乙酸，室温下搅拌反应4～8h，薄层色谱显示反应无进展。在反应液中加入碳酸氢钠溶液，再用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取，有机相先后用饱和食盐水、5％盐酸溶液洗涤，干燥、浓缩，粗产物用硅胶柱分离纯化得目标产物粗品，将目标产物粗品经高效液相色谱分离纯化，即得目标产物；
步骤(1)中，所述有机溶剂A为二氯甲烷、丙酮、乙腈、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或乙醚；
所述白桦醇与所述草酰氯的投料摩尔比为1:2.0～4.0；
步骤(2)中，所述有机溶剂B为二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、二甲基亚砜或丙酮；
所述吲哚乙酸与化合物2的投料摩尔比为1.2:1.8～2.5:3.0；
所述硅胶柱洗脱液采用石油醚和丙酮的混合液体系，所述石油醚和丙酮的体积比为10～20:1；
所述高效液相色谱分离纯化条件如下：
色谱柱：C18柱或C8柱；流动相：甲醇-水溶液，甲醇与水的体积比为68:36；检测波长为278～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：籍建亚，
申请(专利权)人：籍建亚，
类型：发明
国别省市：广东;44