叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种叶酸中杂质6

Determination of 6-formylpterin in folic acid

【技术实现步骤摘要】
叶酸中杂质6
‑
甲酰蝶呤含量的检测方法


[0001]本专利技术属于医药
，涉及一种叶酸中杂质6
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甲酰蝶呤含量的检测方法。特别地，涉及一种叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法。

技术介绍

[0002]叶酸是一种维生素的基本品种，是机体细胞生长和繁殖所必需的物质，对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起着重要的作用。人体缺少叶酸可导致红细胞的异常，未成熟细胞的增加，贫血以及白细胞减少；孕妇缺乏叶酸有可能导致胎儿出生时出现低体重、唇腭裂、心脏缺陷等。
[0003]叶酸极不稳定，易受紫外线、高温等影响而发生氧化。当暴露于紫外线辐射后，叶酸分子会裂解为对氨基苯甲酰基
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L
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谷氨酸(p
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aminobenzoilglutamicacid,PABA
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Glu)和6
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甲酰蝶呤(6
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formylpterin,FOP)，6
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甲酰蝶呤在紫外线和氧气的作用下又会进一步转变为蝶呤6
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羧酸(6
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carboxypterin,CAP)，6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸反过来又会促进叶酸的光降解。此循环一旦开启，就会加速叶酸的光降解，使其杂质含量增加，使原料药质量下降，同时增加了用药安全性方面的安全隐患。
[0004]因此，对叶酸原料药中6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸杂质的含量进行监测非常重要。但是，由于6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸杂质在叶酸中的含量较低，因而采用常规高效液相色谱(HPLC)分离，结合紫外检测的方法无法检测。并且，6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的化学结构和理化性质接近，6
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甲酰蝶呤在一定条件下还会向蝶呤6
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羧酸转变，导致目前尚无能够将叶酸中的微量杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸分离，并实现对其同步定量检测的HPLC检测方法。因而，建立对叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法，对于对叶酸进行质量控制，以提高叶酸原料药的质量和用药安全性具有重要意义。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法，并进行了方法学验证。经实验证明，该方法具有专属性强、快速、灵敏度高、准确度高等优点，能够可靠地对叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
‑
羧酸的同步定量检。
[0006]具体地，通过以下技术方案实现了本专利技术：
[0007]本专利技术提供了一种叶酸中杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
‑
羧酸的同步定量检测方法，将叶酸溶解后直接进样，采用HPLC分离结合荧光检测器对叶酸中6
‑
甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸进行定性和定量检测，所述HPLC分离结合荧光检测器的色谱条件为：
[0008]色谱柱：AgilentSB
‑
CN色谱柱；流速：0.8
‑
1.2mL/min；柱温：33
‑
37℃；流动相A：甲醇
‑
含0.2％磷酸的水＝15：85
‑
25：75；流动相B：甲醇
‑
0.2％磷酸的水＝40：60
‑
50：50；
[0009]梯度洗脱条件见下表1。
[0010]表1：梯度洗脱表
[0011]时间/min流动相A/％流动相B/％0100051000100100150100201000
[0012]荧光检测器：激发波长350nm，发射波长450nm。
[0013]在一个优选的实施方式中，所述HPLC分离结合荧光检测器的色谱条件为：
[0014]色谱柱：AgilentSB
‑
CN色谱柱，4.6
×
250mm，5μm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；流动相A：甲醇
‑
含0.2％磷酸的水＝20：80；流动相B：甲醇
‑
0.2％磷酸的水＝45：55。
[0015]作为可选方式，在上述定量检测方法中，溶解叶酸、6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸采用的溶剂为28.6g/L碳酸钠溶液，稀释剂为按照体积比甲醇
‑
水＝5：95。
[0016]作为可选方式，在上述定量检测方法中，建立6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的标准曲线，采用外标法测定叶酸中杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的含量。
[0017]作为可选方式，在上述定量检测方法中，所述定量检测方法中，叶酸峰的保留时间为3.8
±
0.1min，蝶呤6
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羧酸的保留时间为10.7
±
0.1min和6
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甲酰蝶呤的保留时间为15.5
±
0.1min。
[0018]作为可选方式，在上述定量检测方法中，所述定量检测的具体方法包括：
[0019](1)取叶酸，用溶剂溶解并定容，配制成1mL中含有2mg叶酸的溶液，作为供试品溶液；
[0020](2)分别取6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸，用溶剂溶解并定容，配制成1mL含有0.002mg6
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甲酰蝶呤和0.002mg蝶呤6
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羧酸的溶液，作为对照品溶液；
[0021](3)取步骤(1)中制备得到的供试品溶液与步骤(2)中制备得到的对照品溶液，采用HPLC分离结合荧光检测器进行同步定量检测，记录色谱图；
[0022](4)按照外标法，以峰面积计算叶酸中杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的含量。
[0023]本专利技术相对于现有技术，具有以下有益效果：
[0024](1)本专利技术首次建立了叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法，便于对叶酸进行质量控制，从而提高了叶酸原料药的质量和用药安全性。
[0025](2)采用本专利技术的叶酸中微量光敏杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法，能够使这两种杂质得到很好的分离，在本专利技术的定量检测方法中，叶酸峰的保留时间为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种叶酸中杂质6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸的同步定量检测方法，其特征在于：将叶酸溶解后直接进样，采用HPLC分离结合荧光检测器对叶酸中6
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甲酰蝶呤和蝶呤6
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羧酸进行定性和定量检测，所述HPLC分离结合荧光检测器的色谱条件为：色谱柱：AgilentSB
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CN色谱柱；流速：0.8
‑
1.2mL/min；柱温：33
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37℃；流动相A：甲醇
‑
含0.2％磷酸的水＝15：85
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25：75；流动相B：甲醇
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0.2％磷酸的水＝40：60
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50：50；梯度洗脱条件：时间/min流动相A/％流动相B/％0100051000100100150100201000荧光检测器：激发波长350nm，发射波长450nm。2.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于：所述HPLC分离结合荧光检测器的色谱条件为：色谱柱：AgilentSB
‑
CN色谱柱，4.6
×
250mm，5μm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：35μL；流动相A：甲醇
‑
含0.2％磷酸的水＝20：80；流动相B：甲醇
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0.2％磷酸的水＝45：55。3.根据权利要求1或2所述的定量检测方法，其特征在于：溶解叶酸、6
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甲酰蝶呤和蝶呤6

【专利技术属性】
技术研发人员：孙圆丽，杨卓理，
申请(专利权)人：北京斯利安药业有限公司，
类型：发明
国别省市：