制备β-烟酰胺单核苷酸的方法、酶组合物及其应用技术

本发明专利技术提供了制备β‑烟酰胺单核苷酸的方法、酶组合物及其应用。所述方法包括以下步骤：1)提供微生物的提取物，其中所述微生物的提取物中包含氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；2)将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述微生物的提取物混合，使所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸反应，生成β‑烟酰胺单核苷酸和AMP；其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的方法不仅能够提高产能，还能够实现绿色生产，总体上创造可观的经济成果。

【技术实现步骤摘要】
制备β-烟酰胺单核苷酸的方法、酶组合物及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体而言，涉及制备β-烟酰胺单核苷酸的方法、酶组合物及其应用。
技术介绍
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是生物体中最重要的辅酶。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸调控细胞中的能量代谢，维护生理时钟和各器官细胞的正常功能，并支持基因修复机制和稳定端粒体，为细胞传送氢离子等不可或缺的物质。国内外的研究均证实烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平与衰老和健康有着直接的关联，而且随着年龄增长体内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平亦将跟随下降，引发多种由于新陈代谢能力衰退和基因受损所致的顽症。针对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水平下降对身体健康的影响，研究指出服用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸补充剂能提升新陈代谢的效能并增强体能以有效改善和舒缓相关健康问题，更促使肌肉中的微丝血管增生，赋予在运动上更好的表现和耐力。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸亦能调控身体中的SIRTUIS1-7基因，保护细胞免受自由基(ROS)和炎症因子的破坏。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸除调控睡眠和器官机能外，科学实证其在保护头脑神经和应对脑部退化上也有良好的反应。随着烟酰胺腺嘌呤二核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备β-烟酰胺单核苷酸的方法，包括以下步骤：/n1)提供微生物的提取物，其中所述微生物的提取物中包含氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；/n2)将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述微生物的提取物混合，使所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸反应，生成β-烟酰胺单核苷酸和AMP；/n其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备β-烟酰胺单核苷酸的方法，包括以下步骤：
1)提供微生物的提取物，其中所述微生物的提取物中包含氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；
2)将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述微生物的提取物混合，使所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸反应，生成β-烟酰胺单核苷酸和AMP；
其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在磷酸或其衍生物的存在下将AMP磷酸化酶与所述微生物的提取物混合，并且使所述AMP磷酸化酶与所述步骤2)中所产生的AMP反应，其中所述AMP磷酸化酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述微生物提取物中还包含还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，并且所述方法还包括在二氧化碳或其衍生物的存在下将甲酸脱氢酶与所述微生物的提取物混合，并且使所述甲酸脱氢酶与所述还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸反应，其中所述甲酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。


4.根据权利要求1所述的方法，其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶与所述微生物的提取物的重量比为(0.01-100):1，优选为(0.05-50):1，更优选为(0.1-10):1。


5.根据权利要求2所述的方法，其中所述AMP磷酸化酶与所述微生物的提取物的重量比为(0.01-100):1，优选为(0.05-50):1，更优选为(0.1-10):1；并且所述磷酸或其衍生物的量为0.1mM-0.5M。


6.根据权利要求3所述的方法，其中所述甲酸脱氢酶与所述微生物的提取物的重量比为(0.01-100):1，优选为(0.05-50):1，更优选为(0.1-10):1；并且所述二氧化碳的通气量为0.01-100vvm，优选为0.1-10vvm，更优选为0.5-3vvm。


7.根据权利要求1所述的方法，其中所述微生物选自大肠杆菌、芽孢杆菌、霉菌和酵母菌，优选为酵母菌。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：
A)提供酵母菌提取物，其中该酵母菌提取物中包含氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；
B)在二氧化碳或其衍生物的存在下，将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶和甲酸脱氢酶与所述酵母菌提取物混合；
其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶和甲酸脱氢酶的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.3所示。


9.根据权利要求8所述的方法，其中所述步骤B)还包括在磷酸或其衍生物的存在下将AMP磷酸化酶与所述酵母菌提取物混合，其中所述AMP磷酸化酶的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


10.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括以下步骤：
I)提供酵母菌提取物，其中该酵母菌提取物中包含氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；
II)在二氧化碳或其衍生物的存在下，将甲酸脱氢酶与所述酵母菌提取物混合；
III)当所述酵母菌提取物中的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的量下降至步骤I)时的0.1-99％以下时，将该酵母菌提取物与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶混合；
其中所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二磷酸酶和甲酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘永强，卢锦春，王骏，
申请(专利权)人：百瑞全球有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB