一种Cap2结构5`帽子类似物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种Cap2结构5'帽子类似物及其制备方法，属于基因工程技术领域，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式如下：3′‑O‑Me‑m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)p(2'OMeC)。本发明专利技术提供的Cap2结构5'帽子类似物具有更高的合成效率、更高的加帽效率、更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效率。

【技术实现步骤摘要】
一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用本专利技术是申请日为2020年08月20日、申请号为202010842263.2、专利技术名称为《一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法》的分案申请，申请人深圳市瑞吉生物科技有限公司。
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用。
技术介绍
翻译效率和免疫原性是mRNA药物行使功能的两大关键因素。自体免疫蛋白如RIG-I和IFIT识别异常加帽的mRNA，降低了外源mRNA在细胞内的活性和半衰期，使得mRNA药物在体内难以发挥作用。因此，优化mRNA帽结构对于提高mRNA的生物活性和降低免疫原性是至关重要的。目前在体外合成带帽的mRNA有两种方法，第一种是mRNA转录后使用牛痘病毒加帽酶对其进行加帽，产生带Cap0或Cap1的RNA，这种加帽方法很高效，但是产量不稳定，价格也很昂贵。此外酶促加帽法不能产生Cap2和m6Am的帽子。第二种方法是转录过程中加入过量的帽结构类似物来进行加帽。截至目前，最常用的帽结构类似物是ARCA，使用AR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Cap2结构5'帽子类似物，其特征在于，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式如下：/n3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)p(2'OMeC)。/n

【技术特征摘要】
1.一种Cap2结构5'帽子类似物，其特征在于，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子式如下：
3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)p(2'OMeC)。


2.权利要求1所述的Cap2结构5'帽子类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将2'-O-Methyl-CTP溶解在无RNA酶的水中，再与磷酸水解酶、2×ReactionBuffer混合后进行孵育，得到2'-O-Methyl-CDP；
2)将所述步骤1)得到的2'-O-Methyl-CDP溶解在无RNA酶水中，再与7-Methyl-3'-O-Methylguanosine、鸟苷转移酶、2×ReactionBuffer混合后进行孵育，得到m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)；
3)将所述步骤2)得到的3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeC)溶解在无RNA酶水中，与T4RNALigase1混合后，再与2'-O-Methyl-CTP混合，再与2×T4RNALigaseReactionBuffer混合后进行孵育，得到Cap2结构5'帽子类似物。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)2'-O-Methyl-CTP的摩尔与无RNA酶的水的体积比为1～30mmol:14μl。


4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)无RN...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡勇，张苗苗，洪丹，胡迅，
申请(专利权)人：深圳市瑞吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44