siRNA的制备方法技术

本申请涉及核酸提取技术领域，尤其涉及一种siRNA的制备方法，该制备方法包括如下步骤：体外转录获得目的基因的dsRNA；用RNase Ⅲ对所述目的基因的dsRNA进行消化处理，得到消化产物；将所述消化产物凝胶电泳后，切割核酸片段＜30bp的胶块；将所述胶块研磨冻融后，获得siRNA。该制备方法具有准确有效、操作简便、成本低廉的特点，为纯化siRNA以及RNAi研究带来极大的方便，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
siRNA的制备方法
本申请属于核酸提取
，尤其涉及一种siRNA的制备方法。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是近年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法，该技术可以通过双链RNA的介导，降解靶基因的mRNA，在转录后水平上特异性地阻断或降低靶基因的表达，达到类似基因敲除的效果，而操作比基因敲除简单，有着投入少、实验周期短等优势，是一种可以大量进行基因功能检测的高效且经济的研究方法，已经被广泛用于研究特定基因的功能。在RNAi实验中，获得小干扰RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)是沉默靶基因的首要步骤。目前有多种方法制备siRNA，其中较为常用的有化学合成法、体外转录法、体内载体表达法、siRNA表达框架法、RNaseⅢ体外消化dsRNA(Double-strandedRNA，双链RNA)法等。一个基因的不同siRNA对其可能会有显著不同的抑制效果，化学合成法、体外转录法、体内载体表达法、siRNA表达框架法等均需要寻找和验证最有效的siRNA，因而可能会消耗更多时间。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种siRNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n体外转录获得目的基因的dsRNA；/n用RNaseⅢ对所述目的基因的dsRNA进行消化处理，得到消化产物；/n将所述消化产物凝胶电泳后，切割核酸片段＜30bp的胶块；/n将所述胶块研磨冻融后，获得siRNA。/n

【技术特征摘要】
1.一种siRNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
体外转录获得目的基因的dsRNA；
用RNaseⅢ对所述目的基因的dsRNA进行消化处理，得到消化产物；
将所述消化产物凝胶电泳后，切割核酸片段＜30bp的胶块；
将所述胶块研磨冻融后，获得siRNA。


2.如权利要求1所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述消化处理中，RNaseⅢ浓度为0.5-1.5U/μl。


3.如权利要求1所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述凝胶电泳是浓度为3％的琼脂糖凝胶电泳。


4.如权利要求1所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述研磨冻融的步骤包括：将所述胶块切碎后，依次冰冻和解冻融化，然后加水研磨。


5.如权利要求4所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述冰冻的温度为-80℃～0℃；和/或，
所述解冻融化的温度为20℃-27℃。


6.如权利要求4所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述研磨冻融的步骤重复2-4次。


7.如权利要求4所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述加水研磨后，还包括离心取上清。


8.如权利要求1所述的siRNA的制备方法，其特征在于，所述体外转录获得目的基因的dsRNA的步骤包括：将总RNA反转录得到cDNA，用含有T...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓利，谭景云，香凤，兰文升，
申请(专利权)人：深圳大学，深圳市检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44