【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】RNA序列调整引言本专利技术涉及改变RNA在色谱柱上的保留时间的方法。本专利技术还涉及从至少两个RNA种类的混合物中纯化RNA的方法。此外，本专利技术涉及从至少两个RNA种类的混合物中共纯化至少两个RNA种类的方法。特别地，本专利技术提供了一种用于协调至少两个RNA种类中的A和/或U核苷酸的数目的方法。本专利技术还涉及通过所述方法可获得的RNA，包含所述RNA的组合物或包含所述RNA的疫苗以及用于产生这种RNA和组合物的方法。此外，本专利技术涉及试剂盒，特别是试剂盒套装，其包含RNA、组合物或疫苗。本专利技术还涉及一种治疗或预防病症或疾病的方法，RNA、组合物和疫苗的第一药用和第二药用。此外，本专利技术涉及提供调整的RNA序列或调整的RNA混合物的方法。基于核糖核酸(RNA)的疗法可用于免疫疗法、基因疗法和基因疫苗接种。它们可以为多种疾病的治疗提供高度特异性和个性化的治疗选择。对于某些医学治疗和应用，期望施用包含不同RNA分子种类的RNA混合物。基于RNA混合物的此类治疗的实例包括施用提供针对病原体的几种血清型(例如，来自甲型和乙型流感病毒的多种血清型的血凝素(HA))的保护的多价RNA混合物；施用提供一种病原体的不同抗原(例如流感的不同抗原，例如HA、核蛋白(NP)、神经氨酸酶(NA)等)的RNA混合物；施用提供针对癌症抗原的几种同种型或变体的保护(例如前列腺癌中的前列腺特异性抗原(PSA))的RNA混合物；施用提供抗原的不同表位的RNA混合物；施用含有癌症特异性和/或患者特异性癌症抗原(表达的抗原或突变的抗原)的RNA混合...
【技术保护点】
1.一种改变RNA在色谱柱上的保留时间的方法，/n其中所述方法包括通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整RNA序列的步骤。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171108 EP PCT/EP2017/0786471.一种改变RNA在色谱柱上的保留时间的方法，
其中所述方法包括通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整RNA序列的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括确定原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目的步骤，和增加或减少A核苷酸和/或U核苷酸的数目以获得调整的RNA序列的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述方法包括用A核苷酸和/或U核苷酸替换原始RNA序列中的G核苷酸和/或C核苷酸的步骤。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括用G核苷酸和/或C核苷酸替换原始RNA序列中的A核苷酸和/或U核苷酸的步骤。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法包括将另外的核苷酸，优选G核苷酸和/或C核苷酸，更优选A核苷酸和/或U核苷酸引入原始RNA序列的非编码区的步骤。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述RNA包含编码区，并且其中RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目在编码区内被改变。
7.根据权利要求6所述的方法，其中相对于由原始RNA序列的编码区编码的氨基酸序列，由调整的RNA序列的编码区编码的氨基酸序列不改变。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目，将A核苷酸和/或U核苷酸的数目增加至少2个，优选增加至少3个，更优选增加至少4个，甚至更优选增加至少5个，最优选增加至少10个，来增加调整的RNA的保留时间。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目，将A核苷酸和/或U核苷酸的数目减少至少2个，优选减少至少3个，更优选减少至少4个，甚至更优选减少至少5个，最优选减少至少10个，来减少调整的RNA的保留时间。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述色谱柱是HPLC柱。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述色谱柱包含反相作为固定相。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述色谱柱包含选自聚苯乙烯、非烷基化聚苯乙烯、烷基化聚苯乙烯、聚苯乙烯二乙烯基苯、非烷基化聚苯乙烯二乙烯基苯、烷基化聚苯乙烯二乙烯基苯、硅胶、经非极性残基改性的硅胶、经选自含丁基、辛基和/或十八烷基的残基的含烷基残基改性的硅胶、经苯基残基改性的硅胶、或聚甲基丙烯酸酯的材料，优选多孔材料。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述色谱柱是由珠形成的柱或整体柱。
14.一种从至少两个RNA种类的混合物中纯化至少一个RNA种类的方法，其中所述方法包括：
a)通过相对于原始序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整至少一个RNA种类的序列的步骤；和
b)色谱步骤，其中调整的RNA种类与至少一个其他RNA种类分开。
15.根据权利要求14所述的方法，其中步骤a)包括如权利要求1至13中任一项所限定的改变RNA在色谱柱上的保留时间。
16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述调整的RNA种类中A核苷酸和/或U核苷酸的数目与所述至少一个其他RNA种类中A核苷酸和/或U核苷酸的数目相差至少2个，优选至少3个，更优选至少4个，甚至更优选至少5个，最优选至少10个。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的方法，其中所述调整的RNA种类中A核苷酸和/或U核苷酸的数目与所述至少一个其他RNA种类中A核苷酸和/或U核苷酸的数目相差至少20个，优选至少30个，更优选至少40个，甚至更优选至少50个，最优选至少60个。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法，其还包括确定至少一个RNA种类的同一性和/或完整性的步骤。
19.一种从包含至少两个RNA种类的混合物中共纯化至少两个RNA种类的方法，其中所述方法包括：
a)通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整至少一个RNA种类的序列的步骤；和
b)色谱步骤，其中具有调整的序列的至少一个RNA种类和至少一个其他RNA种类被共纯化。
20.根据权利要求19所述的方法，其中步骤a)包括确定待共纯化的至少两个RNA种类中A核苷酸和/或U核苷酸的数目被调整至的A核苷酸和/或U核苷酸的目标数目。
21.根据权利要求19或20所述的方法，其中待共纯化的至少两个RNA种类的各自序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目相差不大于20个，更优选不大于30个，甚至更优选不大于40个，最优选不大于50个。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中待共纯化的至少两个RNA种类的各自序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目相差不大于2个，优选不大于3个，更优选不大于4个，甚至更优选不大于5个，最优选不大于10个。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的方法，其中待共纯化的至少两个RNA种类在相同的级分中洗脱。
24.一种用于协调至少两个RNA种类的序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目的方法，所述方法包括通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整至少一个RNA种类的序列。
25.根据权利要求24所述的方法，其还包括权利要求1至23中限定的特征中的任一个。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中至少两个协调的RNA种类的每一个的序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目彼此相差不大于20个，更优选不大于30个，甚至更优选不大于40个，最优选不大于50个。
27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其中至少两个协调的RNA种类的序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目彼此相差不大于2个，优选不大于3个，更优选不大于4个，甚至更优选不大于5个，最优选不大于10个。
28.根据权利要求24至27中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整至少两个RNA种类的序列。
29.一种合成包含至少两个协调的RNA种类的混合物的方法，所述方法包括
a)包括协调至少两个RNA种类的序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目的步骤，其中通过相对于原始RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目改变RNA序列中A核苷酸和/或U核苷酸的数目来调整至少一个RNA种类的序列；和
b)合成至少两个协调的RNA种类的步骤。
30.根据权利要求29所述的方法，其中步骤b)包括单独合成至少两个协调的RNA种类。
31.根据权利要求30所述的方法，其中步骤b)包括将至少两个协调的RNA种类混合。
32.根据权利要求29所述的方法，其中步骤b)包括在一个批次中合成至少两个协调的RNA种类。
33.根据权利要求29至32中任一项所述的方法，其中步骤b)包括体外转录步骤。
34.根据权利要求29至33中任一项所述的方法，其特征还在于权利要求1至28中任一项限定的特征中的任一个。
35.根据权利要求1至13、14至18、19至23、24至28、或29至34中任一项所述的方法，其中至少一种RNA或至少一个RNA种类包含至少30个核苷酸、优选至少50个核苷酸、更优选至少100个核苷酸、甚至更优选至少200个核苷酸、最优选至少500个核苷酸。
36.根据权利要求1至13、14至18、19至23、24至28、29至34或35中任一项所述的方法，其中至少一种RNA或至少一个RNA种类是单顺反子、双顺反子或多顺反子。
37.根据权利要求1至13、14至18、19至23、24至28、29至34、35或36中任一项所述的方法，其中至少一种RNA或至少一个RNA种类是编码RNA，优选为mRNA。
38.根据权利要求1至13、14至18、19至23、24至28、29至34、或35至37中任一项所述的方法，其中至少一种RNA或至少一个RNA种类包含5’-帽结...
【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·海因茨，蒂尔蔓·鲁斯，多米尼克·瓦伦霍斯特，马库斯·康策尔曼，
申请(专利权)人：库瑞瓦格股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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