提高单链DNA连接效率的方法技术

本发明专利技术提供了一种提高单链DNA连接效率的方法，在单链DNA的5’‑磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构，该二级结构通过末端核苷酸序列的互补配对的方式，将需要连接的单链DNA的5'‑PO

【技术实现步骤摘要】
提高单链DNA连接效率的方法
本专利技术属于生物化学与分子生物学领域，涉及一种提高DNA连接效率的方法,特别涉及到利用CircLigase连接单链DNA成环制备环状单链及利用CircLigase连接两个单链DNA片段。
技术介绍
CircLigase是一种属于T4RNA连接酶1家族中的具有热稳定性的连接酶，其作用底物单链核酸可以是单链DNA或者RNA，借助ATP水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与3'-OH生成磷酸二酯键。它是分子生物学许多分支发展中的关键酶，因为它具有很好的分子内连接单链核酸的能力。但是，当DNA长度超过100个核苷酸(nt)时，其连接效率会随着目标DNA长度的增加而显著降低。这也在一定程度上限制了它的应用。另外利用CircLigase将任意两条链连接成为一条链的效率极低。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一种提高DNA连接效率的方法。为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：一种提高单链DNA连接效率的方法，在单链DNA的5’-磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，在单链DNA的5’-磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构；/n所述二级结构为：所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对；或/n所述二级结构由单链DNA的5’-磷酸基末端、单链DNA的3’羟基末端与接头DNA组成，所述接头DNA的核苷酸序列分别与所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列、所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，在单链DNA的5’-磷酸基末端和单链DNA的3’羟基末端设计二级结构；
所述二级结构为：所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对；或
所述二级结构由单链DNA的5’-磷酸基末端、单链DNA的3’羟基末端与接头DNA组成，所述接头DNA的核苷酸序列分别与所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列、所述3’羟基末端的核苷酸序列互补配对。


2.根据权利要求1所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述5’-磷酸基末端和所述3’-羟基末端由同一条单链DNA提供，所述单链DNA连接为分子内连接。


3.根据权利要求2所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述二级结构中，所述5’-磷酸基末端的核苷酸序列与所述3’羟基末端的核苷酸序列之间含有10bp-35bp碱基互补配对。


4.根据权利要求1所述的提高单链DNA连接效率的方法，其特征在于，所述5’-磷酸基末端和所述3’-羟基末端由两条单链DNA分别提供，所述单链DNA连接为分子间连接。


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【专利技术属性】
技术研发人员：顾宏周，李青婷，
申请(专利权)人：复旦大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：上海;31