膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法技术

本发明专利技术提供了膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及制备方法。该方法包括1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖时，该方法还包括5)将所述膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质与磷酸盐混合，使其中的壳聚糖分子之间进行交联。所述方法为一步法，工艺简单，节省时间和成本。节省时间和成本。

Membrane immobilized cells, polypeptides, oligopeptides or proteins and their preparation methods

【技术实现步骤摘要】
膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法


[0001]本专利技术属于固定化细胞和固定化蛋白领域，具体而言，涉及膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法。

技术介绍

[0002]酶的应用越趋广泛，而固定化酶因其易于与产品分离并可重复使用，所以常用于工业用途以减低生产成本。酶的固定化方法众多，如物理吸附、亲和联结、共价交联、凝絮包埋等(参见文献“Roger A.Sheldon,2007,Advanced Synthesis&Catalysis,349:1289
‑
1307”)。
[0003]现有的载体的制作过程复杂，例如：制备硅载体需要使用多种有机溶液(袁中一、吴星佳、李士芸、吉鑫松，“一种珠状壳聚糖载体的制备及其应用于酶固定化的方法”，中国专利申请公开号：
[0004]CN1407103A)；制备多孔复合氧化物需要使用高温高压(权镐真、洪舜教、白桂东、金惠真、朴东坤，“多孔复合氧化物制造方法”，中国专利申请公开号：CN1171295A)。而一般凝胶载体制作过程简单，只需使把凝胶溶液用注射器滴入能使其凝胶化的溶液制成凝胶颗粒即可。例如：把海藻酸钠滴入氯化钙溶液、把卡拉胶滴入氯化钾溶液。不过这种技术在工业生产时需要设计特定的设备进行生产(曾昭景、欧阳平凯、潘光亮，“固定化细胞载体成型机”，中国专利申请公开号：CN2181511Y)，这大大增加了生产成本。因此，制备简单及低生产成本的固定化方法一直是本领域研究人员的目标。

技术实现思路

[0005]为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质及其制备方法。
[0006]具体而言，本专利技术提供了：
[0007](1)一种制备膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质的方法，包括以下步骤：
[0008]1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；
[0009]2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；
[0010]3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；
[0011]4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；
[0012]其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖时，所述方法还包括：
[0013]5)将步骤4)所得膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质与磷酸盐混合，使其中的壳聚糖分子之间进行交联。
[0014](2)根据(1)所述的方法，其中通过将磷酸盐与未经预交联的壳聚糖混合来制备所
述经预交联的壳聚糖。
[0015](3)根据(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸盐与所述未经预交联的壳聚糖的重量比为(0.1
‑
20):1。
[0016](4)根据(1)或(2)所述的方法，其中所述磷酸盐选自多聚磷酸盐、多偏磷酸盐和焦磷酸盐中的一种或多种。
[0017](5)根据(1)所述的方法，其中步骤3)中所述交联剂包括多元醛化合物和京尼平。
[0018](6)根据(1)所述的方法，其中所述未成膜的壳聚糖包括壳聚糖粉末和壳聚糖溶液。
[0019](7)根据(1)所述的方法，其中所述未成膜的壳聚糖为壳聚糖粉末，并且步骤2)包括，
[0020]I)提供壳聚糖粉末与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液；
[0021]II)用醋酸溶解所述壳聚糖粉末。
[0022](8)根据(1)所述的方法，其中在步骤2)中，所述未成膜的壳聚糖与所述细胞的重量比为1:(1
‑
20)。
[0023](9)根据(1)所述的方法，其中在步骤2)中，所述未成膜的壳聚糖与所述多肽、寡肽或蛋白质的重量比为(0.5
‑
10):1。
[0024](10)根据(1)所述的方法，其中在步骤3)中，所述交联剂与所述混合液中的未成膜的壳聚糖的重量比为(0.005
‑
10):1。
[0025](11)根据(1)所述的方法，其中所述蛋白质包括酶。
[0026](12)根据(1)
‑
(11)中任一项所述的方法制备的膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质。
[0027]本专利技术与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
[0028]本专利技术创新性地提出采用一步法制备膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质。“一步法”是指使膜状壳聚糖载体的制备和细胞、多肽、寡肽或蛋白质的固定化同时完成，减少了制备载体的成本和时间，制备工艺简单，不需使用特定的仪器，易操作，适合工业化生产。
[0029]在本专利技术的方法中，细胞、多肽、寡肽、蛋白质或酶的载量可通过载体材料的用量灵活地控制。
[0030]本专利技术所用载体的主要成分为壳聚糖，其是一种天然无毒性的高份子聚合物，对环境不造成污染。
[0031]本专利技术采用磷酸盐使壳聚糖交联，可有效地降低膜状固定化细胞、多肽、寡肽、蛋白质或酶遇水膨胀的程度。并且磷酸盐是一种无害的食物添加剂，安全性可靠。
附图说明
[0032]图1示出实验例1中样本1在浸泡去离子水前的照片。
[0033]图2示出实验例1中样本1在浸泡去离子水后的照片。
[0034]图3示出实验例1中样本2在浸泡去离子水前的照片。
[0035]图4示出实验例1中样本2在浸泡去离子水后的照片。
[0036]图5示出实验例1中样本3在浸泡去离子水前的照片。
[0037]图6示出实验例1中样本3在浸泡去离子水后的照片。
[0038]图7示出实验例1中样本4在浸泡去离子水前的照片。
[0039]图8示出实验例1中样本4在浸泡去离子水后的照片。
[0040]图9示出实验例1中样本5在浸泡去离子水前的照片。
[0041]图10示出实验例1中样本5在浸泡去离子水后的照片。
具体实施方式
[0042]以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。
[0043]本专利技术提供了一种制备膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质的方法，包括以下步骤：
[0044]1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；
[0045]2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；
[0046]3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；
[0047]4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；
[0048]其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质的方法，包括以下步骤：1)提供未成膜的壳聚糖，其中所述壳聚糖为未经预交联的壳聚糖或经预交联的壳聚糖；2)提供所述未成膜的壳聚糖与细胞、多肽、寡肽或蛋白质的混合液，其中在所述混合液中，所述未成膜的壳聚糖为溶解状态；3)将交联剂与所述混合液混合，得到所述壳聚糖与所述细胞、多肽、寡肽或蛋白质的共交联产物；4)将所述共交联产物干燥，得到膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质；其中，当步骤1)使用未经预交联的壳聚糖时，所述方法还包括：5)将步骤4)所得膜状固定化细胞、多肽、寡肽或蛋白质与磷酸盐混合，使其中的壳聚糖分子之间进行交联。2.根据权利要求1所述的方法，其中通过将磷酸盐与未经预交联的壳聚糖混合来制备所述经预交联的壳聚糖。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述磷酸盐与所述未经预交联的壳聚糖的重量比为(0.1
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20):1。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述磷酸盐选自多聚磷酸盐、多偏磷酸盐和焦磷酸盐中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张仲康，王骏，
申请(专利权)人：百瑞全球有限公司，
类型：发明
国别省市：