抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供一种抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗VIM型碳青霉烯酶抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列；通过系统性评价，抗VIM型碳青霉烯酶单克隆抗体在各方面均有较佳表现，从而适合作为免疫诊断试剂用于体外诊断VIM型碳青霉烯酶，效价达到了1:1280000以上，制备得到的试剂盒或微流体芯片能够用于耐药菌株的早期分型，指导用药，辅助临床感染控制和治疗。

【技术实现步骤摘要】
抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用
本专利技术属于抗体制备
，尤其是涉及一种抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。
技术介绍
碳青霉烯类抗生素是控制临床致病菌感染最有效的药物之一，产碳青霉烯酶生物（CPO）和耐碳青霉烯肠杆菌因其广谱耐药性成为了一个全球公共卫生问题，患者的治疗方法非常有限。肠杆菌科细菌是院内感染和社区获得性感染的重要病原菌。近年来由于头孢菌素的广泛应用，肠杆菌科中产超广谱β－内酰胺酶（extendedspectmbeta-lactamases,ESBLs）及AmpC酶的菌株比例呈明显上升趋势，治疗此类菌株感染的首选药物是碳青霉稀类抗菌药物。但是，伴随着亚胺培南和美罗培南在临床上的大量使用，耐碳青霉烯酶类肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistanctenterobacteriaceae，CRE）数量也呈逐年上升趋势。临床研究表明CRE菌株对多种抗菌药物耐药，因此临床治疗药物的可选择范围明显受到限制。此外，感染患者往往伴有并发疾病，给临床感染控制和治疗带来极大困难。实验室检测碳青霉烯酶的方法众多。主要包括改良Hodge试验、CarbaNP试验、改良碳青霉烯灭活试验（modifiedcarbapeneminactivationmethod，mCIM）、酶抑制剂增强试验、免疫金标试验以及分子生物学方法等，研发具有自主知识产权的碳青霉烯酶快速诊断产品对于耐药菌株的早期分型、指导用药，提高我国的医疗卫生水平具有重要意义。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。本专利技术采用的技术方案是：抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，命名为1AF6，保藏编号为CGMCCNo.21966；或者命名为1EF3，保藏编号为CGMCCNo.21965。抗VIM型碳青霉烯酶抗体，抗体1AF6，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区包括如SEQIDNO:1所示的CDR1、SEQIDNO:2所示的CDR2和SEQIDNO:3所示的CDR3，重链可变区包括如SEQIDNO:4所示的CDR1、SEQIDNO:5所示的CDR2和SEQIDNO:6所示的CDR3；SEQIDNO:1SASSSISSMY（CDRL1）SEQIDNO:2RTSNLAS（CDRL2）SEQIDNO:3QQYHNFPWT（CDRL3）SEQIDNO:4GFAFSSYDMS（CDRH1）SEQIDNO:5ISGGGTYTYYPDSVKG（CDRH2）SEQIDNO:6QRYGNYDPWDY（CDRH3）或者，抗体1EF3，轻链可变区包括如SEQIDNO:11所示的CDR1、SEQIDNO:12所示的CDR2和SEQIDNO:13所示的CDR3，重链可变区包括如SEQIDNO:14所示的CDR1、SEQIDNO:15所示的CDR2和SEQIDNO:16所示的CDR3；SEQIDNO:11SASSSISSMY（CDRL1）SEQIDNO:12RTSNLAS（CDRL2）SEQIDNO:13QQYHNFPWT（CDRL3）SEQIDNO:14GYSITSDYYWS（CDRH1）SEQIDNO:15YIKYDGSNKYNPSLQN（CDRH2）SEQIDNO:16VTYTAYFAY（CDRH3）优选地，抗体1AF6轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:7所示，重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:9所示；SEQIDNO:7QIVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSISSMYWYQQKPGSSPQPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSFSLTISNMEAEDAATYYCQQYHNFPWTFGGGTKLEIKRASEQIDNO:9VQCEVKLVESGGVLVKPGGSLKLSCEASGFAFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVATISGGGTYTYYPDSVKGRFTISRDSARNTLFLQMSSLRSEDTALYYCARQRYGNYDPWDYWGQGTSVTVSPAKTT或者，抗体1EF3轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:17所示，重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:19所示；SEQIDNO:17QIVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSISSMYWYQQKPGSSPQPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSFSLTISNMEAEDAATYYCQQYHNFPWTFGGGTKLEIKRASEQIDNO:19DLPEIEVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSDYYWSWIRQFPGNKLEWMGYIKYDGSNKYNPSLQNRISITRDPSENQFFLDLSAVTTEDTARYYCARVTYTAYFAYWGQGTLVTVSAAKTT优选地，抗体1AF6由保藏编号为CGMCCNo.21966的抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株产生；抗体1EF3由保藏编号为CGMCCNo.21965的抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株产生。一种核酸分子，包含编码权利要求2或3的抗VIM型碳青霉烯酶抗体的核苷酸。优选地，核酸分子编码抗体1AF6的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示，核酸分子编码抗体1AF6的重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；SEQIDNO:8CAGATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCGTCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATTTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAGTTCCATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCCAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTTCTCTCTCACAATCAGCAACATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTATCATAATTTCCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTGGAAATCAAACGGGCTSEQIDNO:10GTCCAGTGTGAAGTGAAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGTCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGAAGCCTCTGGATTCGCTTTCAGTAGTTATGACATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGCAACCATTAGTGGTGGTGGTACTTACACCTACTATCCAGACAGTGTGAAGGGCCGATTCACCA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，其特征在于，命名为1AF6，保藏编号为CGMCCNo.21966；或者命名为1EF3，保藏编号为CGMCC No.21965。/n

【技术特征摘要】
1.抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，其特征在于，命名为1AF6，保藏编号为CGMCCNo.21966；或者命名为1EF3，保藏编号为CGMCCNo.21965。


2.抗VIM型碳青霉烯酶抗体，其特征在于：抗体1AF6，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区包括如SEQIDNO:1所示的CDR1、SEQIDNO:2所示的CDR2和SEQIDNO:3所示的CDR3，重链可变区包括如SEQIDNO:4所示的CDR1、SEQIDNO:5所示的CDR2和SEQIDNO:6所示的CDR3；
或者，
抗体1EF3，轻链可变区包括如SEQIDNO:11所示的CDR1、SEQIDNO:12所示的CDR2和SEQIDNO:13所示的CDR3，重链可变区包括如SEQIDNO:14所示的CDR1、SEQIDNO:15所示的CDR2和SEQIDNO:16所示的CDR3。


3.根据权利要求2所述的抗VIM型碳青霉烯酶抗体，其特征在于：抗体1AF6轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:7所示，重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:9所示；
或者，
抗体1EF3轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:17所示，重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:19所示。


4.根据权利要求2或3所述的抗VIM型碳青霉烯酶抗体，其特征在于：抗体1AF6由保藏编号为CGMCCNo.21966的抗VIM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株产生；
抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑庆华，何永胜，周跃辉，王玉芳，臧丹戎，孔迪，樊琳琳，黄炎彬，
申请(专利权)人：天津一瑞生物科技股份有限公司，北京金山川科技发展有限公司，北海市兴龙生物制品有限公司，一瑞苏州医药有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12