2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供了2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用。本发明专利技术提供的2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑5任一所示。将含有前述线性表位肽的多肽载体蛋白偶联免疫小鼠制备获得多株杂交瘤细胞分泌可以特异性识别2019新型冠状病毒N蛋白且具有生物活性的单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用本申请要求申请日为2020年2月4日，申请号2020100799132，专利技术名称为《2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用》的在先申请的优先权。
本专利技术涉及免疫学领域及抗体制备技术，具体地说，涉及2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及应用。
技术介绍
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法。但许多症状是可以处理的，因此需根据患者临床情况进行治疗。此外，对感染者的辅助护理比较有效。研制针对该病毒的特异性抗体，有助于2019-nCoV所引起肺炎的诊断和治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供2019新型冠状病毒N蛋白线性表位肽和单克隆抗体及其应用。本专利技术提供的2019-nCoVN蛋白表位肽，其氨基酸序列含有以下任一所示的多肽序列：多肽1：SDNGPQSNQRNAPRITFG；多肽2：PSDSTGSNQNGERSGARSKQ；多肽3：PGSSRGTSPARMAGNGGDAALA；多肽4：PKKDKKKKADETQALPQRQKK；多肽5：SADSTQA。本专利技术提供的多肽1是位于2019-nCoVN蛋白氨基酸序列第2-19的多肽；多肽2是位于氨基酸序列第20-39的多肽；多肽3是位于氨基酸序列第199-220的多肽；多肽4是位于氨基酸序列第368-388的多肽；多肽5是位于氨基酸序列第413-419的多肽。偶联到载体蛋白，例如KLH，作为免疫原免疫小鼠后，制备杂交瘤细胞，筛选能够稳定分泌特异性识别2019-nCoVN蛋白且具有生物学活性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本专利技术提供了2019-nCoVN蛋白表位肽在制备2019-nCoVN蛋白单克隆抗体或双特异性抗体中的应用，所述2019-nCoVN蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1-5任一所示，或SEQIDNO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本专利技术提供了2019-nCoVN蛋白表位肽在制备2019-nCoV多肽疫苗中的应用，所述2019-nCoVN蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1-5任一所示，或SEQIDNO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本专利技术提供了2019-nCoVN蛋白表位肽在制备以2019-nCoV所引起的疾病治疗药物中的应用所述2019-nCoVN蛋白表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1-5任一所示，或SEQIDNO.1-5任一所示的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。本专利技术提供了含有所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽疫苗。本专利技术提供了一种抗体，其为所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原，免疫动物，制备免疫血清得到抗体；或对所述抗体进行改造得到的嵌合抗体。所述的抗体，其为多克隆抗体、单克隆抗体。具体的说，本专利技术以偶联了载体蛋白的多肽分别作为免疫原分别免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合并筛选得到能持续、稳定分泌特异性识别新冠病毒N蛋白的小鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由各细胞株分泌得到2个单克隆抗体，其中由多肽2作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体Clone4G1，由多肽4作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体11D5。本专利技术提供的单克隆抗体分别命名为Clone4G1和Clone11D5。所述单克隆抗体Clone4G1的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQIDNo.6和7所示；所述单克隆抗体Clone11D5的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQIDNo.8和9所示；本专利技术还提供能稳定分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，其为所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原免疫动物所得的杂交瘤细胞。上述杂交瘤细胞所分泌产生的单克隆抗体属于本专利技术的保护范围。本专利技术提供一种药物，其含有上述的抗体。本专利技术提供一种2019-nCoV检测试剂盒，其含有所述的2019-nCoVN蛋白表位肽或含有所述的2019-nCoVN蛋白表位肽产生的抗体。本专利技术提供一种免疫毒素，包含以各种形式连接于细胞毒性剂的本专利技术所述的抗体或所述杂交瘤细胞分泌产生的单克隆抗体；优选所述的各种连接形式为抗体被标记、体外交联或分子偶联。本专利技术提供一种双特异性或多特异性分子，包含所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述的抗体或所述杂交瘤细胞分泌产生的单克隆抗体。本专利技术还提供一种抗体与其他蛋白和/或多肽的融合蛋白，包含本专利技术所述的抗体或所述杂交瘤细胞分泌产生的单克隆抗体和具有某种功能的其他蛋白或多肽分子的复合物。本专利技术提供了所述的抗体或所述杂交瘤细胞分泌产生的单克隆抗体在制备2019-nCoV所引起的疾病的治疗药物中的应用。本专利技术提供了含有所述的抗体或所述杂交瘤细胞分泌产生的单克隆抗体的药物、检测试剂或试剂盒。本专利技术提供了所述的2019-nCoVN蛋白表位肽、或所述的多肽疫苗、或所述的抗体、或所述的单克隆抗体、或所述的药物、或所述的免疫毒素、或所述的融合蛋白在治疗或预防2019新型冠状病毒肺炎中的应用。本专利技术提供了2019-nCoVN蛋白表位肽、或所述的抗体、或所述的单克隆抗体、或所述的检测试剂盒在诊断2019新型冠状病毒肺炎中的应用。将含有前述线性表位肽的多肽载体蛋白偶联免疫小鼠制备获得多株杂交瘤细胞分泌可以特异性识别2019新型冠状病毒N蛋白且具有生物活性的单克隆抗体。本专利技术中由多肽2作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体Clone4G1，由多肽4作为免疫原免疫小鼠获得了单克隆抗体11D5显示了良好的病原特异性亲和力和反应原性，可用于制备2019新型冠状病毒诊断试剂盒等相关检查试剂。附图说明图1是单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图，其中M是蛋白分子量标准(kDa)，本专利技术获得的2个单克隆抗体，泳道1-4分别是4G1还原抗体、4G1非还原抗体、11D5还原抗体、11D5非还原抗体。图2所示单克隆抗体Clone4G1的免疫印迹结果。图3所示单克隆抗体Clone4G1的ELISA结合力结果。图4所示单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.2019-nCoV N蛋白表位肽，其特征在于，其氨基酸序列含有以下任一所示的多肽序列：/n多肽1：SDNGPQSNQRNAPRITFG；/n多肽2：PSDSTGSNQNGERSGARSKQ；/n多肽3：PGSSRGTSPARMAGNGGDAALA；/n多肽4：PKKDKKKKADETQALPQRQKK；/n多肽5：SADSTQA。/n

【技术特征摘要】
20200204 CN 20201007991321.2019-nCoVN蛋白表位肽，其特征在于，其氨基酸序列含有以下任一所示的多肽序列：
多肽1：SDNGPQSNQRNAPRITFG；
多肽2：PSDSTGSNQNGERSGARSKQ；
多肽3：PGSSRGTSPARMAGNGGDAALA；
多肽4：PKKDKKKKADETQALPQRQKK；
多肽5：SADSTQA。


2.含有权利要求1所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽疫苗。


3.一种抗体，其为权利要求1所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原，免疫动物，制备免疫血清得到抗体；或对所述抗体进行改造得到的嵌合抗体。


4.如权利要求3所述的抗体，其为多克隆抗体、单克隆抗体。


5.如权利要求4所述的抗体，其特征在于，其为权利要求1所述2019-nCoVN蛋白表位肽或所述表位肽的序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列的多肽，与载体蛋白偶联后作为免疫原免疫动物所得的杂交瘤细胞分泌所得的单克隆抗体。


6.权利要求3-5任一所述的抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为Clone4G1，其轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQIDNo.6和7所示；或
所述单克隆抗体为Clone11D5的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQIDNo.8和9所示。


7.一种药物，其特征在于，含有权利要求3-6任一所述的抗体。


8.一种2019-nCoV检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的2019-nCoVN蛋白表位肽或含有权利要求1所述的2019-nCoVN蛋白表位肽产生的抗体。


9.一种免疫毒素，包含以各种形式连接于细胞毒性剂的权利要求3-6任一所述的抗体；优选所述的各种...

【专利技术属性】
技术研发人员：高福，孙乐，宋豪，李茂华，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11