一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽及其应用，所述抗原表位肽氨基酸序列如SEQ ID NO：1～13任一所示。利用其制备得到了pMHC复合物单聚体，进一步制备得到pMHC复合物多聚体，其可以用于新型冠状病毒感染康复者外周血内抗原特异性T细胞的检测，并用于体外的T细胞活化实验，这些新型冠状病毒T细胞抗原表位肽可以应用到新型冠状病毒相关的免疫检测和疫苗研发中，值得深入研究和大力推广。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地，涉及一种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽及其应用。
技术介绍
新型冠状病毒是2019年底发生的新型传染性肺炎的病原体，目前对病毒的来源尚不清楚，基因测序显示和蝙蝠SARS样冠状病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)，中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)高度同源。目前尚没有特效药物报道。人体免疫系统对新型冠状病毒的免疫应答机制，包括抗原识别、免疫清除机制、免疫记忆保护机制等均不清楚。根据对新型冠状病毒同源性较高的SARS等冠状病毒的研究显示，T细胞免疫应答在病毒感染后机体抗病毒防御以及机体免疫病理损伤过程中发挥了重要的作用，尤其是CD8+T细胞，其抗原特异性免疫活性11年后依然存在，说明了CD8+T细胞免疫应答在抗冠状病毒免疫防御中的重要作用及其在疫苗研发中的重要地位。CD8+T细胞免疫应答的第一步就是T细胞通过其表面的抗原识别受体特异性识别被病毒感染的细胞所递呈的抗原表位。因此，抗原表位是T细胞特异性识别病毒、发挥免疫免疫保护作用的重要关键分子，是免疫检测、免疫治疗和疫苗研发的关键靶向分子。疫苗的作用原理是利用抗原表位活化机体的初始淋巴细胞，经过活化、增殖、分化后清除抗原物质。活化的淋巴细胞转变成记忆性淋巴细胞，在下一次同样的抗原物质侵入机体时，快速发挥免疫应答作用，清除抗原。目前的疫苗以诱发机体体液免疫应答，产生抗体为主。新冠病毒疫苗也以诱导抗体等体液免疫应答为主。目前尚没有针对T细胞的细胞免疫疫苗的研究报道。CD8+T细胞通过T细胞受体(TCR)识别pMHC活化，杀灭病毒感染细胞、清除病毒，从而发挥抗病毒的细胞免疫作用。因此，鉴定可以有效活化T细胞的T细胞抗原表位，从而进一步鉴定抗原特异性TCR，开发基于T细胞抗原表位的靶向治疗，是抗病毒治疗的重要手段之一。目前在新冠病毒领域尚没有相关的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽及其应用，本专利技术的抗原表位肽可以和HLA-A2重链和HLA-A2轻链β2m蛋白组装成pMHC复合物，或直接负荷到抗原递呈细胞，从而活化T细胞，可用于新冠病毒疫苗研发、制备和药物研发、临床治疗。本专利技术的第一个目的是提供一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽。本专利技术的第二个目的是提供一个种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽组合。本专利技术的第三个目的是提供所述抗原表位肽和/或所述抗原表位肽组合在在制备抗原递呈细胞中的应用。本专利技术的第四个目的是提供一种的pMHC复合物。本专利技术的第五个目的是一种所述的pMHC复合物的制备方法。本专利技术的第六个目的是一种抗原肽-抗原递呈细胞复合物。本专利技术的第七个目的是一种用于活化T细胞的抗原肽-抗原递呈细胞复合物的制备方法。本专利技术的第八个目的是所述的抗原表位肽、所述的抗原表位肽组合、所述的pMHC复合物、所述的抗原肽-抗原递呈细胞复合物中的一种或几种制备新型冠状病毒疫苗和/或药物中的应用。本专利技术的第九个目的是所述的抗原表位肽、所述的抗原表位肽组合、所述的pMHC复合物、所述的抗原肽-抗原递呈细胞复合物中的一种或几种制备新型冠状病毒检测试剂中的应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下方案予以实现的：T2A2细胞是一种通过重组基因工程技术表达人MHC-I类分子HLA-A2的抗原递呈细胞系。只有有效的抗原表位才能被其递呈，从而在其细胞表面形成稳定的pMHC复合物，因此可以作为刺激T细胞的人工抗原递呈细胞。T细胞抗原表位单独无法工作，必须以pMHC复合物或抗原肽-抗原递呈细胞复合物的方式进行T细胞活化。本专利技术利用基因工程重组的HLA-A2重链和轻链蛋白，和鉴定出的新型冠状病毒T细胞表位进行联合复性，制备了pMHC复合物，直接将鉴定出的新型冠状病毒T细胞抗原表位负荷在抗原递呈细胞表面，制备了抗原肽-抗原递呈细胞复合物(T2A2细胞)，发现其可以有效活化健康人外周血中T细胞。活化的T细胞可以有效杀伤携带新冠病毒抗原的靶细胞。证明新发现的新型冠状病毒T细胞抗原表位具有完全的生物学活性，可以作为疫苗和免疫治疗的应用。因此本专利技术要求保护一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQIDNO：1～13任一所示。SEQIDNO:1：FVFLVLLPLV；SEQIDNO:2：FTISVTTEI；SEQIDNO:3：VVFLHVTYV；SEQIDNO:4：YIWLGFIAGL；SEQIDNO:5：VTWFHAIHV；SEQIDNO:6：FLHVTYVPA；SEQIDNO:7：SVLLFLAFV；SEQIDNO:8：FLLVTLAIL；SEQIDNO:9：FLFLTWICLL；SEQIDNO:10：LIFLWLLWPV；SEQIDNO:11：TLACFVLAAV；SEQIDNO:12：FVLAAVYRI；SEQIDNO:13：GLMWLSYFI。本专利技术还要求保护一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽组合，含有氨基酸序列如SEQIDNO：1～13所示的抗原表位肽中的任意几条。所述抗原表位肽和/或所述抗原表位肽组合在在制备抗原递呈细胞中的应用，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还要求保护一种的pMHC复合物，含有所述的抗原表位肽或含有所述的抗原表位肽组合。一种pMHC复合物的制备方法，将HLA-A2重链、HLA-A2轻链β2m和所述的抗原表位肽或所述的抗原表位肽组合混合复性，纯化。优选地，HLA-A2重链、HLA-A2轻链β2m和所述的抗原表位肽或所述的抗原表位肽组合的摩尔为1：2：10。本专利技术还要求保护一种抗原肽-抗原递呈细胞复合物，表面有所述的抗原表位肽或所述的抗原表位肽组合的抗原递呈细胞。优选地，所述抗原递呈细胞为T2A2细胞。更优选地，T2A2细胞是过表达HLA-A2的T2细胞。一种用于活化T细胞的抗原肽-抗原递呈细胞复合物的制备方法，将含有所述新型冠状病毒T细胞抗原表位肽与抗原递呈细胞混合孵育，之后用于T细胞活化。优选地，所述抗原递呈细胞为T2A2细胞。一种融合蛋白，含有所述的抗原表位肽组合。所述的抗原表位肽、所述的抗原表位肽组合、所述的pMHC复合物、和/或所述的抗原肽-抗原递呈细胞复合物中的一种或几种制备新型冠状病毒疫苗和/或药物中的应用。以及，所述的抗原表位肽、所述的抗原表位肽组合、所述的pMHC复合物、和/或所述的抗原肽-抗原递呈细胞复合物中的一种或几种制备新型冠状病毒检测试剂中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术发现了13种新型冠状病毒T细胞抗原表位肽，并利用其制备得到了pMHC复合物单聚体，进一步制备得到pMHC复合物多聚体，其可以用于新型冠状病毒感染康复者外周血内抗原特异性T细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1～13任一所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO：1～13任一所示。


2.一个种新型冠状病毒T细胞的抗原表位肽组合，其特征在于，含有氨基酸序列如SEQIDNO：1～13所示的抗原表位肽中的任意几条。


3.权利要求1所述抗原表位肽和/或权利要求2所述抗原表位肽组合在在制备抗原递呈细胞中的应用。


4.一种的pMHC复合物，其特征在于，含有权利要求1所述的抗原表位肽或含有权利要求2所述的抗原表位肽组合。


5.一种pMHC复合物的制备方法，其特征在于，将HLA-A2重链、HLA-A2轻链β2m和权利要求1所述的抗原表位肽或权利要求2所述的抗原表位肽组合混合复性，纯化。


6.一种抗原肽-...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国兵，肖潺潺，邓洁萍，邱聪龄，王鹏程，罗钧洪，高利娟，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44